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  • obrigada!:)
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  • Olá Ana Caroline, obrigado pelo elogio e que bom que tenha ajudado!
    WT significa 'wild type' que traduzindo é 'tipo selvagem', sempre que aparecer essa sigla indica normalidade, no caso do slide, a pessoa é normal, sem fibrose cística.
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  • Olá Eduardo!Primeiro gostaria de parabenizá-lo pelo trabalho, achei bem interessante e na verdade acabou respondendo algumas dúvidas que eu tinha sobre a PCR-RFLP. Tenho uma dúvida sobre o slide 16. O que significa a sigla WT??
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  • 1. UNIVERSIDADE PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS RFLPRestriction Fragment Lenght Polymorphism Juiz de Fora, 09 de dezembro de 2011.
  • 2. Grupo• Bárbara Tuâne;• Carlos Eduardo Cardoso;• Marina Cognalato;• Poliane Lopes.
  • 3. Introdução• A técnica de RFLP foi descrita inicialmete por Botstein em 1980; RFLP é um dos muitos tipos de marcadores moleculares, e são capazes de detectar variações em sequências de DNA de 4 a 8 pares de base, reconhecidas por enzimas de restrição, capazes de clivar DNA por reconhecimento de sequências.
  • 4. Marcadores Genéticos• Qualquer característica morfológica ou molecular que diferencia indivíduos, e que seja facilmente detectável é um potencial marcador genético.
  • 5. Marcadores Genéticos Marcadores molecularesMorfológicos Bioquímicos DNA
  • 6. Marcadores Dominantes
  • 7. Marcadores Codominantes
  • 8. RFLP• São fragmentos de DNA obtidos de enzimas de restrição, separados por eletroforese e visualizados por meio de hibridizações com sondas marcadas com radioatividade ou fluorescência.
  • 9. Etapas para aquisição de RFLP’s• Extração do DNA;• Digestão com endonucleases de restrição (cortam a molécula de DNA através do reconhecimento de sequências nucleotídicas específicas);• Eletroforese;• Transferência dos fragmentos para uma membrana de nitrocelulose;• Hibridização dos fragmentos com sondas marcadas;• Visualização dos polimorfismos através de auto- radiografia.
  • 10. Base Genéticas dos Marcadores RFLP’s • O polimorfismo observado na técnica de RFLP ocorre porque o DNA de indivíduos geneticamente distintos difere na sequência de nucleotídeos ao longo da fita.
  • 11. Interpretação
  • 12. Autoradiografia de umamembrana dehibridização revelandomarcadores RFLP.Indivíduos homozigotospara o aleloA1(3,5,6,7,8,9) ehomozigotos para osalelos A2(1,2,4).
  • 13. Vantagens e Desvantagens• Reprodutível;• Marcadores co-dominantes;• Simples.• Trabalhoso;• Caro;• Uso de sondas radioativa.
  • 14. Aplicações• Mapeamento do Genoma;• Genotipagem;• Ciência forense;• Teste de paternidade;• Detecção de doenças hereditárias, etc.
  • 15. Análise do RFLP para a Fibrose Cística
  • 16. PCR-RFLP (AFLP- Amplified Fragment Length Polymorphisms)• Isolamento de DNA suficiente para a análise RFLP é demorado e trabalhoso. No entanto, a PCR pode ser usado para amplificar pequenas quantidades de DNA, geralmente em 2-3 horas, para os níveis exigidos para a análise de RFLP. Portanto,mais amostras podem ser analisadas em um curto tempo.
  • 17. Artigo: Identification of a criminal by DNAtyping in a rape case in Rio de Janeiro,Brazil. A identificação humana por DNA é uma ferramenta poderosa para casos de paternidade, assim como investigação criminal pela tipagem de evidências biológicas coletadas em cenas de crime e identificação de restos mortais.
  • 18. OBJETIVO: Identificação de criminoso em caso de estuprocom quatro suspeitos.PARTICIPANTES: Sangue de quatro suspeitos e vítima epele do feto.PROCEDIMENTOS: Reação em cadeia da polimerase(PCR) e polimorfismo de tamanho de fragmentos derestrição (RFLP).
  • 19. RESULTADOS: Três suspeitos foram excluídos e umsuspeito foi incluído como pai biológico do feto.Um teste complementar com 3 loci VNTR também foirealizado.O suspeito foi incluído como pai biológico apresentandoÍndice de Paternidade de 412.860 (probabilidade depaternidade: 99,9997%).
  • 20. Conclusão O desenvolvimento de técnicas baseadasna hibridização de sequências de DNA abriunovas opções para o estudo de variações . Adescoberta de enzimas de restrição, apossibilidade de transferência de fragmentos deDNA para membranas e o desenvolvimento denovos métodos de marcação radioativa eluminescente para fins de hibridização defragmentos de DNA determinaram o empregoeficiente de RFLP em análise genética.
  • 21. Bibliografia• Artigo: GOES, Andréa Carla de Souza et al . Identification of a criminal by DNA typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil. Sao Paulo Med. J., São Paulo, v. 120, n. 3, maio 2002 . Disponível em <http://www.scielo.br/scielo>• Livro: “Marcadores Genéticos Moleculares” – Fábio Gelape Faleiro (2007);• Livro: “Introdução ao Uso de Marcadores Moleculares em Análise Genética” – Márcio Elias Ferreira & Dário Grattapaglia (1996);• Livro: “Marcadores Moleculares em Plantas” – Sandra Milach (1998);• Site: http://www.e-escola.pt/biologia;• Site: http://www.ncbi.nlm.nih.gov;• Site: http://www.sciencedirect.com/
  • 22. Obrigado!