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8489540 cultivo-y-frotis-de-liquido-cefalorraquideo-lcr

  1. 1. AREA MICROBIOLOGIA CULTIVO Y FROTIS DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO LCRIntroducciónEl líquido cefalorraquídeo (LCR) ha sido durante muchos años una de las fuentes de informacióndiagnóstica en neurología. Es producido por el plexo coroideo en el cerebro y en el espacio extracelulardel parénquima cerebral. Su velocidad de producción es constante (0,35 mL/min) y alcanza un volumentotal diario de alrededor de 500 mL. El intercambio de iones con la sangre se lleva a cabo por eltransporte secretorio activo. Las proteínas presentes en él provienen, en gran medida, del suero, a travésde células endoteliales capilares. La glucosa, también del suero, llega al LCR por un mecanismo detransporte por portadores. Este líquido tiene, además, la función de “sumidero” para transportar losproductos de la degradación metabólica de regreso al sistema venoso.El líquido cefalorraquídeo normalmente es límpido, cristalino, trasparente, como agua de roca. Pude sertambién claro en los procesos crónicos y agudos que no está demasiado aumentado el contenidocelular. Patológicamente se enturbia en las meningitis purulentas de cualquier etiología. En casos esfrancamente turbio. En las poliomielitis graves y en la fase de comienzo o de declinación de lasmeninges purulentas, el LCR es sólo ligeramente turbio. En las meningitis tuberculosa habitualmentees claro y trasparente, pero a menudo es esmerilado, opalescente y tras su extracción (2 a 3 horas)puede dar lugar a un fino retículo fibrinoso en tela de araña. Esto es mismo ocurre también, menosfrecuente en los tumores del sistema nervioso central.PresiónLos valores normales oscilan entre 100 y 200 y entre 200 y 250 mm de H2O para las posiciones endecúbito y sentado, respectivamente. En niños pequeños son menores y en recién nacidos pueden serincluso subatmosféricas.Las causas de hipertensión más frecuentes son: meningitis, hemorragia subaracnoidea, tumorescerebrales, encefalitis y edemas cerebrales.Valores normales • Normalmente el líquido cefalorraquídeo no contiene flora alguna. Sin embargo, la muestra se puede contaminar con la flora normal de al piel durante la observación de esta.INDICACIONES PARA LA RECOLECCION • Meningitis viral. • Meningitis piógena. • Meningitis tuberculosa. • Meningitis crónica ( causada por Cryptococcus neoformans)El examen bacteriológico de LCR forma parte del diagnostico indispensable de la meningitis. Lameningitis bacteriana aguda es la infección de las meninges (que es la membrana que recubre alcerebro y la médula espinal) y es una enfermedad rápidamente progresiva e incluso letal si no se tratade manera adecuada. Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ 1
  2. 2. AREA MICROBIOLOGIAEl paciente puede morir en un lapso de unas horas. Se debe identificar de inmediato el microorganismocausal para instituir el tratamiento con los antibióticos idóneos. La meningitis puede ser producida poruna gran variedad de gérmenes tantos Gram positivos, como Gram negativos. También puede sersecundaria de otras infecciones en el organismo.La muestra de LCR de individuos con sospecha de meningitis se somete a frotis y cultivo, cuando ellíquido sea transparente o turbio. (El LCR normal es trasparente.)TINCIONLa tinción de gram durante el examen microscópico es el paso inicial en al valoración microbiológicade LCR, su sensibilidad es de alrededor de un 60-90%, pueden producirse falsos negativos con menosde 1000 microorganismos / ml en el LCR y tinciones falsas positivas con una tinción precipitada,bacterias no viables en las bandejas de punción lumbar, portaobjetos contaminados o soluciones detinción contaminados. La sensibilidad de la tinción de Gram. Puede incrementar utilizando unaconcentración citomedular en lugar de una centrifugación regular.El naranja de acridina, una tinción fluorocromica, parece más sensible que al tinción de Gram. a pesarde que las tinciones de naranja de acridina en LCR no se utilizan profusamente, pueden resultar útilesen algunos pacientes con hallazgos compatibles con meningitis y una tinción de Gram negativa. Lastinciones de Ziehl Neelsen para M. tuberculosis tiene una sensibilidad de un 40 %, sin embargo cuandose examinan el líquido en cuatro punciones medulares seriadas, la sensibilidad incrementa hasta un80-90%. La tinción fluorescente de rodamina puede proporcionar una sensibilidad poco mejor que latinción de Ziehl Neelsen.Las preparaciones con tinta china para C. neoformans tienen una sensibilidad aproximada del 25-50%significativamente menor que de las pruebas de aglutinación con látex para el antígeno criptococico. Laespecificidad es menor de 100%, por que en algunos pacientes las células inflamatorias mononuclearespueden repelar las partículas de carbón de tinta china, produciendo falsos positivos, se han sugeridoque al utilización de nigrosina, en lugar de tinta china, evitando falsos positivos.CULTIVOPara los tipos de meningitis bacteriana, los medios de cultivo anaerobio ofrecen una sensibilidad dealrededor del 80-90%, sin embargo, si se inicia el tratamiento antibiótico antes de obtenerse el LCRpara el cultivo puede resultar difícil el aislamiento de las bacterias. Se producen cultivos de LCR falsospositivos para los organismos contaminantes comunes, la especificidad de un cultivo positivo puede serinferior a un 50%.En la meningitis bacteriana, que pude deberse a una gran cantidad de bacterias, el LCR muestralas siguientes características: • Purulento (generalmente). • Mayor número de leucocitos. • Predominio de polimorfonucleares. Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ 2
  3. 3. AREA MICROBIOLOGIA • Disminución de glucosa. • Elevación de proteínas.En la meningitis producida por el bacilo tuberculoso, virus, hongos o protozoarios, el LCR tienelas siguientes características: • No purulento. • Reducción en el número de mononucleares, mayor número de linfocitos. • Glucosa normal o reducida.AVISO CLINICOCuando se sospecha de meningitis, hay que realizar un cultivo para llegar al diagnóstico lo más prontoposible. Esto es importante debido a que algunos microorganismos que pueden ser la causa no tolerancambios de temperatura. Si se sospecha que la causa es viral, una parte del LCR se refrigera (0-4°C).No se recomienda congelar la muestra a menos que al inoculación del cultivo tisular se lleve más de 5días.Los cultivos anaerobios de LOCR están indicados en pacientes con procesos como otitis media crónicao mastoditis crónica, sinusitis crónica, infección de al herida de craneotomía, supuración faríngea,neoplasia craneal o de cuello y focos de infección anaerobia.MENINGITIS PRODUCIDAS POR HONGOS:En la meningitis micotica, la sensibilidad del cultivo es inicialmente solamente del 40-60 %. Algunastécnicas especiales como al filtración de membrana con volúmenes importantes de LCR (unos 30 ML)pueden proporcionar una sensibilidad poco mejor .En pacientes inmuno comprometidos, diabéticos yen post traumatismos se aísla generalmente Cryptococcus neoformans.MENINGITIS PARASITARIAS:Si se sospecha de meningitis amibiana basada en ensayos de identificación de microorganismos en laspreparaciones citomedulares teñidas con tinción de Wright, pueden utilizarse técnicas de cultivoespeciales para la conformación.Naegleria o Acanthamoeba pueden producir meningitis y encefalitis en aquellas personas quehayannadado en aguas contaminadas. También Plasmodium spp. y Toxoplasma gondii pueden producirmeningitis en personas inmunosuprimidas.MENINGITIS VIRALES:Los cultivos víricos tiene valor escaso en casos seleccionados, la sensibilidad se encuentra ene l rangodel 40-70% sin embargo, determinados microorganismos como el virus del herpes simple requierebiopsia cerebral. Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ 3
  4. 4. AREA MICROBIOLOGIAEnterovirus, Parotiditis,VHI, Herpes simplex, Varicela Zoster pueden causar esta patología.Microorganismos que no desarrollan en medios habituales:Mycoplasma pneumoniae, Brucella spp, Rickettsia spp y Leptospira spp. son también productores demeningitis.Meningitis post quirúrgicas: causadas por Staphylococcus aureus, S. epidermidis, bacilos Gramnegativos aerobios.Meningitis post traumáticas: debidas a gérmenes del tracto respiratorio como Streptococcuspneumoniae, Haemophilus Influenzae b y Streptococcus pyogenes.En pacientes inmunocomprometidos: Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Listeriamonocytógenes, bacilos Gram negativos aerobios pueden causar meningitis.RECOLECCION DE LA MUESTRAAsépticamente desinfecte con tintura de yodo al 2%. Inserte una aguja con estilete en el inter espacioL3-L4, L4-L5 (niños) ó L5-S1. Mida la presión del líquido. Coleccione de 1 – 3 ml de LCR en 4 tubosestériles previamente rotulados. Ordene en los tubos: química, celularidad, frotis, cultivo,aglutinaciones.Si no logra obtener suficiente líquido, envíe lo colectado al laboratorio de microbiología primero.Nunca refrigere el líquido cefalorraquídeo. En la requisición con los datos del paciente indique la edady si ha habido antibioterapia previa. Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ 4
  5. 5. AREA MICROBIOLOGIA La muestra se obtiene siguiendo la técnica estéril y se sella de inmediato para prevenir el escape o la contaminación, se envía de inmediato al laboratorio. Rotule la muestra, se avisa al personal de laboratorio para que al examine de inmediato. Avise al laboratorio que llevará una muestra de LCR para que se analice de inmediato. El tiempo es esencial, ya que las células se desintegran cuando la muestra se mantiene a temperatura ambiental durante más de una hora. Se notifica de inmediato al médico encargado en cuando tenga los resultados para que pueda instituir el tratamiento conveniente.MÉTODO:1-Observación microscópica: • Con coloración de Gram Con coloración azul de metileno Con coloración de Giemsa Con tinta china2-Cultivo: • En medios enriquecidos y selectivosSIGNIFICADO CLINICOLos microorganismos patógenos que se observan en el LCR son: • Bacilos coliformes. • Cryptococcus y otros hongos. • Haemophilus influenzae (especialmente en niños y lactantes). • Especies de Leptospira. • Especies de Naegleria o Acanthamoeba. • Virus (generalmente enteovirus). • Listeria monocytogenes. • Mycobacteruim tuberculosis. • Neisseria meningitidis. • Neumococos estreptocócicos. • Estafilococos. • Streptococcus agalactie (grupo b). • Treponema pallidum.Frecuencia de microorganismos según el grupo etario:EN RECIÉN NACIDOS Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ 5
  6. 6. AREA MICROBIOLOGIA Streptococcus agalactiae Escherichia coli Enterobacterias Cocos Gram positivos Listeria monocytógenesMENORES DE DOS MESES Streptococcus agalactiae Haemophilus influenzae Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis Escherichia coli Listeria monocytógenesMENORES DE 15 AÑOS Haemophilus influenzae b Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidisMAYORES DE 15 AÑOS Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis Enterobacterias Staphylococcus spp Listeria monocytógenesLos cultivos son positivos en: • Meningitis. • Traumatismos. • Absceso cerebral o del epéndimo espinal. • Tromboflebitis séptica de los senos venosos.CONSERVACION DEL CULTIVOCuando la muestra de LCR no se puede llevar al laboratorio de inmediato se almacena a 37°C.No debe pasar más de 4 horas entre la toma de muestra y el análisis de laboratorio, ya que losmicroorganismos que suelen causar meningitis (especialmente H. influenzae y meningococos) son muylábiles.REFERENCIAS Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ 6
  7. 7. AREA MICROBIOLOGIA• Balcells, G., A., La clínica y el laboratorio, 18ª Edición, Editorial Masson, México, 2001.• Fiscbach, T.F., Manual de pruebas diagnosticas, 5ª Edición, 1997, Editorial MCgrawhill Interamericana, México.• Govantes, B.J DR, Lorenzo V.P Dr, Manual normon, 8ª edición, España, Editorial Laboratorios Normon S.A, Departamento de publicaciones científicas, 2007.• Henry J.B., Diagnostico clínico y tratamiento clínico, 9ª edición, 2000, Editorial Masson, México.• Suardíaz Jorge, Celso Cruz, Ariel Colina, Laboratório clínico, La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 2004.• Treseler, M.K., Laboratorio clínico y pruebas de diagnóstico, 1ª Edición traducida de la 3ª edición en ingles, 1999, Editorial El Manual Moderno, México.• http://www.lablasamericas.com.co/• http://www.farestaie.com.ar Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ 7

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