En este apartado, pueden hallar practicas mas comunes echas en un laboratorio.

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Practica Numero 1: Preparación de Medios de Cultivo.
-Introducción: Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes
que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas optimas,
permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son
esenciales en los Laboratorios de Microbiología por lo que un control
en su fabricación, preparación, conservación y usos asegura la
exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados
obtenidos.
En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de
medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o
sólida. Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un
medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar,
la gelatina o la silicagel.
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza
de sus constituyentes en:
 MEDIOS NATURALES O COMPLEJOS: Constituidos por
sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son
usualmente complementadas por la adición de minerales y
otras sustancias. En ellos no se conocen todos los
componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno
de ellos.
 MEDIOS DEFINIDOS O SINTETICOS: Son los medios que tienen
una composición química definida cuali y cuantitativamente.
Generalmente se usan en trabajos de investigación.

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De acuerdo al uso del medio de cultivo, estos se clasifican en:
 MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO: Son medios líquidos que
favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismos en
particular. Permiten aumentar el número de microorganismos
de este tipo. Usualmente contienen una o más sustancias
inhibidores del crecimiento de los microorganismos con
excepción de los que se quieren cultivar.
 MEDIOS SELECTIVAS: Son parecidos a los de enriquecimiento,
se diferencian por medios sólidos y están diseñados para el
aislamiento de microorganismos específicos.
 MEDIOS DIFERENCIALES: Son medios que contienen
indicadores de productos derivados de la actividad microbiana
de los microorganismos. No contienen ningún tipo de sustancia
con actividad antimicrobiana. Permiten revelar características
fisiológicas de los microorganismos.
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir
de cada uno de sus constituyentes básicos, o por simple
rehidratación de productos asequibles comercialmente (medios d
cultivo deshidratado). Generalmente se prefiere el uso de los medios
de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el trabajo,
con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados
reproducibles.
Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes
aspectos:
 Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de
fabricantes o proveedores que suministren productos de
calidad.

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 Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad
microbiológica y fisicoquímica adecuada.
 Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua
destilada o desmineralizada.
 Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su
esterilización. Nunca se deben exceder las condiciones
señaladas por el fabricante.
ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIO DE CULTIVO.
Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases
sellados bajo las condiciones que señale el fabricante. Generalmente
se almacenan en un lugar fresco (entre 15° y 25°), con poca humedad
y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca
de autoclaves, hornos, ni otras fuentes de calor o vapor.
Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los
envases de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para
su uso inicial, se debe tener la precaución de cerrarlos tan pronto
como sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la
entrada de humedad. La absorción de agua produce cambios de pH,
formación de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica
que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios
químicos o estar contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado,
puede almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo
de 2 semanas protegido de la luz, o por periodos mayores a 12-15°C.
Sin embargo, almacenados bajo refrigeración entre 2 y 8°C se
prolonga la vida útil de los mismos, (nunca por debajo de 0°C porque
se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo se deben

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mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación
y cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima una
envoltura de papel (Craft).
Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio
de cultivo preparado debe pasar por un riguroso proceso de control
de calidad, en donde se determinan sus propiedades fisicoquímicas
(apariencia, pH, etc.) y microbiológicas (esterilidad y promoción de
crecimiento) verificando que cumplan con los requisitos de calidad
establecidos y por ende demostrar que son aptos para su uso.
-Objetivo: Al finalizar el trabajo práctico nosotros como estudiantes
estaremos en capacidad de:
 Preparar medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a
partir de medios de cultivo deshidratados.
 Indicando el método de esterilización apropiado.
-Fundamento: La preparación adecuada de un medio de cultivo nos
permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para
favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio.
-Materiales:
Cajas de Petri (5). Abatelenguas (1). Mechero (1). Jeringa (1).
Medio de Cultivo Agar
Sangre (1).
Agua Destilada (1). Tapón (1). Campana Extractora (1).
Balanza Granataria (1). Matraz (1). Autoclave (1). Sangre (5 mililitros).
Pedazo de Papel
Aluminio (1).
Agitador (1). Cinta Mástil (1). Guantes (2).

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-Procedimiento: En el siguiente procedimiento relataremos el
medio de cultivo que nos asignó la doctora para realizarlo, el cual fue
AGAR SANGRE, aunque también se realizaron otros medios como
Agar Macconkey, Agar Nutritivo, Eosina y Azul de Metileno (EMB),
Salmonella Shigella, Agar Sal y Manitol y de todos estos solo
mencionares como son, cuáles son sus ingredientes y para que nos
sirve.
 AGAR SANGRE: El agar sangre es una combinación de un agar
base (agar nutritivo) con el agregado de 5% de sangre humano
en nuestro caso de esta práctica ya que también se utiliza
sangre ovina. Aporta muchos factores de enriquecimiento. Se
usa también para ver la capacidad hemolítica de los
microorganismos patógenos (que es un factor de virulencia).
Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se
determina el tipo de hemolisis que posee:
-Alfa: Halos verdosos (reducción de la hemoglobina de los glóbulos
rojos a metahemoglobina en el medio).
-Bata: Halos incoloros (hemolisis total).
-Gamma: Inexistencia de halos (sin hemolisis).
No permite el crecimiento de Neisseria y Haemophilus.
Hemolisis de Streptococcus: Izquierda: alfa
hemolisis (hemolisis parcial) por S. mitis.
Centro: beta hemolisis (hemolisis total) por
S. pyogenes. Derecha gamma hemolisis (sin
hemolisis) por S. salivarius.
Agar sangre para el diagnóstico de infecciones.
Ala Izquierda positivo para infección por
Staphylococcus, ala Derecha positivo para un
cultivo de Streptococcus.
Beta hemolisis en agar sangre, se observan
tres colonias centrales y sus halos de
hemolisis.

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 AGAR MACCONKEY: Es un medio de cultivo específico para
bacterias Gram negativas y cepas que fermentan la lactosa. Los
ingredientes necesarios para este medio son los siguientes:
Sales Biliares (medio inhóspito para el crecimiento de bacterias
Gram positivos, excepto Enterococcus y algunas especies de
Staphylococcus), Colorante Crista Violeta (inhóspito para cierto
tipo de bacterias Gram-Positivo), Colorante Rojo Neutro (el
cual marca microorganismos que fermentan lactosa). Lactosa,
Peptona y Cloruro Sódico.
Sirve como indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias
Gram negativas que pueden fermentar Lactosa (Lac+) y las que no
pueden (Lac-).
-LAC+: Al utilizar la lactosa en el medio, bacterias Lac+ como
Escherichia Coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual
baja el pH bajo 6,8 lo que tiene como consecuencia la aparición de
colonias de color rosadas o rojas.
-LAC-: Bacterias que no fermenten la lactosa como Salmonella,
Proteus y Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando
amoniaco, lo cual incrementa el pH del agar, formando colonias
blancas o incoloras.
-SLOW: Algunas bacterias en cambio fermentan la lactosa de manera
lenta, y con consideraciones en una categoría distinta, por ejemplo:
Serratia y Citrobacter.
Agar Macconkey con Bacterias Lac+
(izquierda), Lac- (derecha).

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 AGAR NUTRITIVO: El agar nutritivo es un medio de cultivo
usado normalmente como rutina para todo tipo de rutina para
todo tipo de rutina. Es muy útil porque permanece sólido
incluso a relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se
distinguen mejor las colonias pequeñas.
El agar nutritivo contiene normalmente lo siguiente:
- 0,5% de Peptona.
- 0,3% de Extracto de carne/extracto de levadura.
- 1,5% de Agar.
- 0.5% de Cloruro de Sodio.
- Agua Destilada.
- pH casi neutro (6,8) a 25°C.
En esta caja de Petri con Agar Nutritivo se inocularon los micro-organismos y acá se puede
evidenciar el crecimiento de colonias de los mismos. Posteriormente se elaboró una placa
con el contenido de esta caja y se puede evidenciar la presencia de Bacillus Esporulados.

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 EOSINA AZUL DE METILENO (EMB): Es un medio de cultivo
selectivo y diferencial: Inhibe el crecimiento de bacterias Gram
positivas y algunas Gram negativas y muestra si las Gram
Negativas que crecen son o no fermentadores de lactosa. Esto
lo realiza gracia ala eosina y el azul de metileno:
-La Eosina es un indicador de pH y, por tanto, de la presencia de
fermentación.
-El Azul de Metileno es un compuesto que inhibe el crecimiento
de bacterias Gram Positivas y ciertos grupos de Gram Negativas.
Cultivo de Escherichia Coli en medio
de EMB. Es un medio selectivo y
diferencial.
Esta especialmente diseñado para
diferenciar entre E. Coli (colonias
metálicas) de Enterobacter (sin este
color).

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 AGAR SALMONELLA SHIGELLA: Es una modificación del Agar
Citrato Desoxicolato. Se le considera un medio
moderadamente selectivo según el nivel de inhibición de los
microorganismos Gram positivos y Enterobacteriaceae
diferentes de Salmonella Shigella, que inhibe por contenido de
Sales Biliares, Verde Brillante y Citratos.
En BD Salmonella Shigella, la diferenciación de los organismos
entéricos se logra mediante la incorporación de lactosa en el medio.
Los organismos que fermentan lactosa produce acido que, en
presencia del indicador rojo neutro, propicia la formación de
colonias de color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa
forman colonias incoloras. Este último grupo incluye la mayoría de
los patógenos intestinales, incluidos Salmonella y Shigella.
Agar Salmonella Shigella contiene lo siguiente:
- Extracto de Carne Bovina 5,0g.
- Digerido Pancreático de Caseína 2,5.
- Digerido Péptido de Tejido Animal 2,5.
- Lactosa 10,0.
- Sales Biliares 8,5.
- Citrato Sódico 8,5.
- Tiosulfato Sódico 8,5.
- Citrato Férrico 1.0.
- Rojo Neutro 0,025.
- Agar 13,5.
- Verde Brillante 0,330mg.

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 AGAR SAL Y MANITOL: Es un medio de cultivo que se utiliza
normalmente en el laboratorio de microbiología. Permite el
crecimiento de un determinado grupo de bacterias mientras
que inhibe el crecimiento de otras. Este medio es importante
debido que es capaz de distinguir microorganismos patógenos
en corto periodo de tiempo.
Contiene una alta concentración de sal, asiendo selectivo para
Staphylococci.
Es coagulasa positivo Staphylococci produce colonias amarillas con
zonas amarillas, mientras que coagulasa negativa Staphylococci
producen colonias rojas o ligeramente rosadas sin cambio alguno del
medio.
Su composición es la siguiente:
-5,0 g/L enzima digestiva de cafeína.
-5,0 g/L enzima digestiva de tejido animal.
-1.0 g/L extracto de carne de vaca.
-10,0 g/L D-manitol.
-75,0 g/L NaCI.
-0,025 g/L rojo de fenol.
-15,0 g/L agar.
En es te medio se logra apreciar lo s iguiente:
1. Su color es rosado eso refiere s er coagulasa
negativo.
2. Su color es amarillo refiere ser coagulasa
pos i tivo.

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Seguidamente de esta explicación detallada de cada medio ahora si
indicaremos cual fue el procedimiento que utilizamos para hacer el
medio de AGAR SANGRE.
1. Como todo medio para hacer las medidas exactas pesamos en
una Balanza Granataria el peso específico del papel aluminio
para poder pesar correctamente el medio, el peso total del
medio fue de 5,00 gramos menos el peso específico del papel
aluminio que fue de 1,00 gramo y 4,00 gramos de medio.
2. Este paso solo fue disolver el medio en un matraz, con una
solución salina, lo mezclamos bien.
3. Cuando lo estábamos mezclando, lo acercamos al mechero
para que hirviera y a si se tornara líquido.
4. Lo tapamos con un tapón hecho de algodón y gasas por la
técnica ya conocida.
5. Posteriormente lo llevamos a la autoclave con una
temperatura de 100 ° C durante una hora.
6. Cuando se completó la hora sacamos los medios de la
autoclave y pues obvias razones estaba caliente, lo dejamos
enfriar para tener un mejor manejo.
7. Cuando ya estaba listo para su manejo, como el medio que nos
toco fue AGAR SANGRE y como sabemos este medio necesita
un porcentaje de sangre humana. Como paso principal fue
extraer 5 mililitros de sangre a uno de mis compañeros e
inmediatamente con la jeringa sin aguja, disolvimos la sangre
por las paredes del matraz y a si mezclarlo hasta que esté bien
mezclado.

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8. Ya que se mezcló bien, proseguimos a disolver el medio en las
cajas de Petri en la Campana de Extracción, a si preparamos 5
cajas de este medio.
9. Y como último paso las dejamos guardadas, selladas y
rotuladas las cajas de Petri con dicho medio.
-Resultado: Como cada equipo hiso un medio especifico los cuales
fueron AGAR SANGRE, AGAR NUTRITIVO, AGAR MACCONKEY, SAL Y
MANITOL Y AGAR SALMONELLA SHIGELLA; se repartió una caja de
medio a cada equipo para proseguir con la siguiente practica de
Sembrado.
AGAR SANGRE AGAR NUTRITIVO AGAR MACCONKEY AGAR SAL Y MANITOL AGAR SALMONELLA
SHIGELLA
AGAR AZUL DE METILENO
(EMB)
-Conclusión: Por medio de esta práctica se logró aprender, que
técnicas se utilizan para poder hacer un medio de cultivo, sea cual
sea el que se utilice.

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Practica Numero 2: Exudado Faríngeo.
-Introducción: Los cultivos de exudado faríngeo son importantes
para determinar el diagnostico el diagnostico de infecciones como:
amigdalitis y faringitis producidas por estafilococos y estreptococos,
para establecer el foco infeccioso de enfermedades como fiebre
reumática, glomerulonefritis así como para determinar el estado de
portador de microorganismos como Staphylococcus Aureus,
Streptococcus Beta Hemolíticos, etc.
La obtención de resultados confiables depende en gran parte de una
buena toma de muestra que se le haga al paciente, a quien se le
deben dar las instrucciones correspondientes para que se presente
a la toma de muestra.
Algunos de las Morfologías Bacterianas característicos del tracto
respiratorio son los siguientes:
Klebsiella Pneumoniae (AGAR MACCONKEY) Staphylococcus Aureus (AGAR SANGRE)
Colonias grandes planoconvexa, mucoides,
brillantes, forma irregular, también se
observan redondas, bordes ondulados,
lactosa positivo (consume el carbohidrato
lo cual acidifica el medio y el indicador rojo
de fenol cambia rojo-rosado, por ello las
colonias se ven de este color).
Colonias medianas, convexas, de color
blanco, forma circular, bordes redondos.

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-Objetivo: Identificar los microorganismos presentes en la muestra
problema (exudado faríngeo).
-Fundamento: El sistema respiratorio se divide en vías altas o
superiores, que comprenden las áreas anteriores a la laringe,
incluyendo la nasofaringe, orofaríngea, laringe, epiglotis, oído
externo y medio, y los senos paranasales, y vías bajas o inferiores
que incluyen todas las estructuras posteriores a la laringe.
El tracto respiratorio habitual (la faringe) está formado por distintos
microorganismos entre los que destacan los siguientes grupos y
especies: estreptococos, estafilococos, micrococos, neisserias,
Moraxella catarrhalis, corinebacterias, Haemophilus spp,
Porphyromonas, Prevotella, Fusobacterium, Veillonela,
Peptostreptococcus, Actinomyces, etc.
Sin embargo, cuando encontramos una patología en la faringe, el
agente etiológico más frecuentemente aislado es el Streptococcus
pyogenes, pero también, otros microorganismos patógenos que
podemos hallar son: Streptococcus pneumoniae.
Para poder identificar el agente microbiano de la muestra problema,
se procederá a la siembra del mismo en el medio de cultivo.
-Material:
Hisopos Estériles
(1).
Abatelenguas (1). Guantes (2). Placas de Agar Sal y
Manitol (1).
Asas Bacteriológicas
(1).
Mechero (1). Cinta Mástil (1). Plumón
Permanente (1).

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-Procedimiento:
1. Para la toma de la muestra: Se tomó un hisopo estéril, se froto
y raspo suavemente en la parte posterior de la garganta,
tomando la muestra de las amígdalas.
2. Descargamos el hisopo en la caja de Petri de Sal y Manitol,
siempre cerca del mechero, como medida de precaución.
3. Se descargó el hisopo en una parte de la caja de Petri y así se
fue girando a 90° grados la caja de Petri y con ayuda del aza
bacteriológico se fue arrastrando la descarga en forma de
zigzag.
4. Posteriormente serramos la caja de Petri y la rotulamos, para
así guardarla y esperar si creció o no la bacteria.
-Resultado: Como resultado final, después de dejar crecer la
bacteria nos percatamos que creció Staphylococcus Áureos, donde
sus colonias presentaron un color amarillo que esto nos dice que es
coagulasa positivo. También queriéndose mostrar un color rosado
identificado como coagulasa negativo, pero no se extendió como
debería de ser, así que nos quedamos con el amarillo.
-Conclusión: En esta práctica que podría decirse sencilla pero muy
importante pudimos observar como se muestra una colonia, su
forma color de Staphylococcus.

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Practica Numero 3: Siembra en Medios de Cultivo.
-Introducción: Un cultivo es un método para la multiplicación de
microorganismos, tales como hongos, bacterias y parásitos, en el
que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado.
Un cultivo es deseado como un método fundamental para el estudio
de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades
en medicina humana.
Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o solido
de agar. Los medios de cultivo contiene distintos nutrientes que van,
desde azúcares simples asta sustancias complejas como la sangre o
el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie
bacteriana a partir de una muestra de forma por muchos tipos de
bacterias, se siembra en un medio de cultivo solido donde las células
que se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos
reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria
una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de
células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a
su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo
de bacteria.
La principal diferencia entre en un medio de cultivo sólido y uno
liquido es que el medio de cultivo contiene 1,5-2% de agar-agar,
mientras que el líquido no contiene agar-agar.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente
que es imposible diferenciarlas solo con el uso del microscopio. En
este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus
características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo

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especiales. Así, algunos medios contienen un producto que inhibe el
crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero no la del
tipo que se desea averiguar si está presente. Otra veces, el medio de
cultivo contiene determinados azucares especiales que solo pueden
utilizar algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores
de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio
es fermentado y se generan catabolismos ácidos. Si las bacterias son
capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser
detectados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.
Con otros cultivos se puede identificar si las bacterias producen
determinación de enzimas que digieren los nutrientes. Así, algunas
bacterias con enzimas hemolíticas (capaces de romper glóbulos
rojos) producen hidrolisis y cambios apreciables prosaicamente en
las placas de agar-sangre.
Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en un
laboratorio de microbiología de un hospital, pues sirven para
identificar las bacterias causadas de las enfermedades infecciosas y
los antibióticos a los que son sensibles esas bacterias. Los cultivos
suelen usarse en medicina para determinar agentes patógenos en
fluidos corporales (como por ejemplo la sangre y orina).
Los medios de cultivo, para poder ser utilizados y garantizar que los
resultados obtenidos a partir de ellos sean confiables, deben cumplir
con los siguientes requisitos:
-Disponibilidad de nutrientes.
-Consistencia adecuada del medio.
-Presencia o ausencia de oxígeno y otros gases.

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-Condiciones adecuadas de humedad (mantener en frigorífico).
-Luz ambiental.
-pH adecuado.
-Temperatura.
-Esterilidad.
En la siembra en medios de cultivo estos son algunos ejemplos de lo
que se puede observar en cada uno de ellos:
AGAR SANGRE: Enterococcus cultivo en agar sangre
donde creció a las 24 horas colonias de
Enterococcus faecalis. Tienen un tamaño entre 0.5 y
1 mm, a menudos opacos y blancos, que suelen ser
α hemolíticos o no hemolíticas, aunque algunos
casos aparecen β hemolíticas.
AGAR MACCONKEY: Es un medio diferencial porque
contiene lactosa y un indicador de pH (rojo neutro).
Las bacterias capaces de fermentar lactosa
producirán un cambio en el pH del medio por
liberación de productos ácidos. Como consecuencia
sus colonias aparecerán de color fucsia/violeta,
contrastando con la coloración amarillenta de las
colonias incapaces de fermentar la lactos a.
AGAR AZUL DE METILENO (EMB): Las colonias
fermentadoras son de color rosado. Escherichia Coli
fermenta los azucares y forma colonias verdes con
brillo metálico. Las colonias no fermentadoras son
incoloras
AGAR SALMONELLA SHIGELLA: Las cepas de Shigella
y la mayoría de Salmonella presentan colonias
incoloras. Colonias trasparentes con centro negro:
Proteus y algunas Salmonellas. Las bacterias
fermentadoras de Lactosa presentan colonias rojas
a rosadas.

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-Objetivo: Practicar el aislamiento de bacterias en el Laboratorio
utilizando la técnica de siembra en cajas de Petri.
-Fundamento: En el manejo de muestras contaminadas o cultivos
mixtos en los que se encuentran diversos microorganismos, el
primer paso para proceder a su estudio es el aislamiento, es decir la
separación de cada uno de los posibles integrantes microbianos de
la muestra.
Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría
de ellos basados en la inmovilización de las células microbianas en la
superficie de los medios de cultivo sólidos. Al depositar una célula
bacteriana o una levadura en un punto del medio de cultivo, ésta
quedará inmovilizada en ese punto y en él se reproducirá por
absorción de los nutrientes del medio. Las nuevas células generadas
permanecerán igualmente inmóviles y tras sucesivas generaciones
conformarán lo que denominamos una "colonia" que no es más que
un montón de células derivadas de una sola célula madre inicial, es
decir, un clon de la bacteria o levadura depositada al sembrar. Esta
colonia es visible al ojo humano y presenta diferentes características
según el microorganismo que la genera. Esto nos permite distinguir
las diferentes poblaciones microbianas que se encuentran en la
muestra sembrada y separarlas transfiriendo una colonia de cada
tipo a un nuevo medio de cultivo estéril, a estos cultivos los
consideraremos "puros" por poseer un sólo tipo de microorganismo.
(El fundamento es válido teniendo en cuenta sólo microorganismos
cultivables)
-Material:
Cajas de Petri con
Caja de Petri con
Cepas de
Agar Sangre (2).
Agar Macconkey (1).
Streptococcus.
Cepas de
Staphylococcus
áureos.
Mechero (1). Asa Bacteriológica
(1).
Cinta Mástil (1). Marcador (1).

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-Procedimiento:
1. Esterilizamos el asa bacteriológica, enfriamos en el medio en
un lado del cultivo, con el asa levantar la bacteria, para llevarla
al nuevo cultivo, pero nunca separar el asa del mechero para
un mejor funcionamiento.
2. Levantamos la tapa de la placa donde se va a sembrar,
depositamos el inoculo en el primer sector (descarga) hacer un
zigzag, pero solo tocando 2 o 3 veces la descarga.
3. Y a si nuevamente esterilizamos el asa la dejamos enfriar en
una parte de la placa sin tocar el inocuo, giramos e 90 grados e
hicimos estrías en zigzag y así lo repetimos dos veces más,
cerramos la placa.
4. Las rotulamos y las dejamos incubar durante 24 horas, para así
ver si creció alguna bacteria.
-Resultados: En esta tabla se muestra que nos creció en los medios
que nos tocó:
AGAR MACCONKEY: En esta podemos
observar que torno un color rosado esto
quiere decir que es fermentadora de
lactosa y esto también hace que su pH baje
a menos de 6,8 y ase este color
característico.
AGAR SANGRE: En este medio podemos
observar un color blanquecino
característico de Staphylococcus áureos y
son β hemolíticas, también podemos
observar que sus colonias son redondas
unas separadas y otras juntas.
AGAR SANGRE: En este medio podemos
observar que es un Streptococcus β
hemolíticos con un color como amarillento
y en colonias redondas separadas y juntas.
-Conclusión: En esta práctica podemos observar cómo se
manifiestan las bacterias en los diferentes cultivos bacteriológicos.

21. 21
Practica Numero 4: Antibiograma.
-Introducción: Es la prueba microbiológica que se realiza para
determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de
una bacteria a un grupo de antibióticos. Las técnicas de antibiograma
son las utilizadas en el laboratorio de microbiología para estudiar la
actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos
responsables de las infecciones.
Se considera como antimicrobiano cualquier sustancia con
capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los
microorganismos y que sea susceptible de utilización como
tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintéticos o
semisintéticos (modificación química de un compuesto natural). La
historia moderna de los antibióticos comienza con el descubrimiento
de sustancias presentes en unos microorganismos capaces de matar
a otros microorganismos. La utilización de antibióticos supuso un
avance enorme en la esperanza de vida de las personas que padecían
procesos infecciosos, aunque también supuso un aumento en los
niveles de resistencia antibiótica.
El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:
La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un
tratamiento antibiótico correcto al paciente. Es necesario conocer si
el microorganismo responsable de la infección posee mecanismos
que le confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no
incluirlo como terapia.
En cuanto al tratamiento el antibiograma no sólo es necesario en la
instauración, también resulta útil en el seguimiento e incluso en la
confirmación de tratamientos empíricos. En ocasiones la
enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento
antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El

22. 22
antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el
tratamiento.
Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la
epidemiología. Es necesario detectar el aumento de los niveles de
resistencia en los aislamientos clínicos para tomar medidas
correctoras.
Por otro lado también puede tener utilidad diagnóstica porque el
perfil de resistencia puede en algún caso orientar en la identificación
bacteriana.
Existen multitud de antimicrobianos en el mercado y el número sigue
creciendo porque el desarrollo de más mecanismos de resistencia
por parte de los microorganismos se traduce en un esfuerzo mayor
por fabricar más y mejores antibióticos. No es necesario contrastar
la eficacia de todos los antibióticos para cada aislamiento bacteriano.
Los criterios que se siguen para seleccionar que antimicrobianos se
ensayan respondes a factores de diversa índole:
Factores microbiológicos: Tipo de agente infeccioso y mecanismos
de resistencia descritos previamente en su especie.
Factores farmacológicos: Tipo de antimicrobiano y parámetros de
absorción, distribución y eliminación.
Factores del paciente: Tipo de infección. Factores de riesgo y estado
general de salud. Situación inmunológica e hipersensibilidad.
Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia
antibiótica más habituales para cada especie.
Estos son los resultados que deberían de aparecer en un
antibiograma:

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Resultado del Disco anterior:
PLANTAS DE ESTUDIO RESISTENCIA SUSCEPTIBLE
CUACHALALATE X Se observan cambios de coloración.
ESTAFIATE X
EUCALIPTO X Se observan cambios de coloración.
QUINA AMARILLA X Se observan cambios de coloración.
TOMILLO X
ANTIBIÓTICOS RESISTENCIA SUSCEPTIBLE
AMIKACINA XXX
AMPICILINA XXX
CARBENICILINA XXX
CEFOTAXIMA XXX
CEFTRIAXONA XXX
CLORANFENICOL XXX
GENTAMICINA XXX
NETILMICINA XXX
NITROFURANTOINA XXX
TRIMETROPIM SULFAMEROXAZOL XXX
-Objetivo: Observar la sensibilidad de bacterias a la acción de
diversos antibióticos.
-Fundamento: El antibiograma lo que hace es evaluar la
sensibilidad de un microorganismo a ciertos medicamentos.
Los parámetros para elegir los antibióticos a probar son los
siguientes:
Factores microbiológicos: Tipo de agente infeccioso y mecanismos
de resistencia descritos previamente en su especie.

24. 24
Factores farmacológicos: Tipo de antimicrobiano y parámetros de
absorción, distribución y eliminación.
Factores del paciente: Tipo de infección. Factores de riesgo y estado
general de salud. Situación inmunológica e hipersensibilidad.
Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia
antibiótica más habituales para cada especie.
-Material:
Cepas de Streptococcus y
Staphylococcus en placa de
agar nutri tivo.
Caja de Petri con agar
Muel ler-Hinton en placa de
agar nutri tivo.
Di s cos de antibióticos para
gran pos i tivos .
Di s cos de antibióticos para
gran negativos .
Pinzas metálicas. Tubos con solución salina
es téri l .
Hi sopos es téri les . Mecheros .
Asas Bacteriológicas Tuvo 0.5 del Nefelómetro
de McFarland.
Cinta Más ti l . Plumón permanente.
-Procedimiento:
1. Con el asa bacteriológica previamente esterilizada y enfriada,
se tomó una pequeña porción de la colonia bacteriana a
estudiar.
2. En un tubo conteniendo solución salina estéril, hicimos una
suspensión al tubo 0.5 del Nefelómetro
3. Con un hisopo estéril tomamos bacterias de la suspensión,
mojando y presionando el hisopo sobre las paredes del tubo de
ensaye para evitar el exceso de suspensión.
4. Se tomó la placa de Mueller-Hinton, se sostuvo con la mano
izquierda, se levantó la tapa ligeramente y se procedió a
realizar el extendido de la suspensión bacteriana rotando el

25. 25
hisopo uniformemente por toda la superficie de la placa,
girando la placa varias veces.
5. Se desechó el hisopo en un recipiente ya flameado en el
mechero.
6. Con ayuda de la pinza, se colocó los discos individuales, sobre
la superficie de la placa de cultivo de Mueller-Hinton, este
procedimiento se hiso teniendo encendido un mechero para
poder evitar cualquier tipo de contaminación.
7. Incubamos las placas en un promedio de 24 horas, para así
poder observar las reacciones.
-Resultado: En este apartado tuvimos la mala suerte de no poder
observar las reacciones correspondientes, esto fue por un mal
manejo y un mal extendimiento de la suspensión.
-Conclusión: En esta práctica debíamos de haber observado un gran
funcionamiento de lo que son las reacciones antibióticas, pero por
un mal funcionamiento, no logramos hacerlo, pero esto nos llevó a
pensar que si llega a haber otra práctica de este tipo ahora si hacerlo
bien.