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Verano 2011

  1. 1. UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTALFRANCISCO DE MIRANDAAREA CIENCIAS DEL AGRO Y DEL MARPROGRAMA DE CIENCIAS VETERINARIASDEPARTAMENTO DE SANIDAD ANIMALCATEDRA : BIOQUIMICA ITRABAJO PRÁCTICO INTRODUCTORIONORMAS DE FUNCIONAMIENTO Y MEDIDAS DE SEGURIDAD QUE RIGENEL USO DEL LABORATORIO DE BIOQUIMICA.OBJETIVOS: Que el estudiante comprenda la importancia de conocer y seguir las instrucciones generales que rigen el comportamiento de trabajo en el laboratorio. Conocer las características e identificar las diferentes áreas de trabajo del laboratorio de bioquímica. Que el estudiante conozca el lugar y modo de funcionamiento de los dispositivos de seguridad y equipo de primeros auxilios, así como las medidas de seguridad.INTRODUCCION.La cátedra de bioquímica del Programa de Ciencias Veterinarias, contempla dentrode su contexto programático la realización de actividades prácticas de laboratorio queson de suma importancia para el complemento de los conocimientos adquiridosdurante las sesiones de clases teóricas. Dichas actividades están basadasfundamentalmente en el desarrollo de pruebas y ensayos experimentales ejecutadospor los estudiantes, bajo la supervisión del profesor de la asignatura encargado dedicha actividad. Estas pruebas requieren del uso de reactivos químicos que pueden serpeligrosos para el manipulante máximo cuando los mismos son usados en presencia defuego o en lugares donde pasa corriente eléctrica; así como de instrumentos delicadosque pueden ser dañados sino se siguen las instrucciones precisas de trabajo o se tomanlas medidas preventivas o pertinentes. En tal sentido, la actividad introductoria delprograma práctico de bioquímica está orientada a suministrar al estudiante lasnormas e instrucciones generales de comportamiento, así como las medidas deseguridad que rigen el uso y funcionamiento de laboratorio.INSTRUCCIONES GENERALES.1. Por las características propias que posee el laboratorio de bioquímica, el trabajo que se realiza en su interior debe estar regido por la seguridad y la seriedad por parte del ejecutante; de lo contrario se puede convertir en un sitio de peligro. No debe confundirse la precaución con el temor pues este último puede ser causa también de accidentes al no manipularse con seguridad los reactivos y equipos que requieren el trabajo práctico.
  2. 2. 2. Debe conocerse la ubicación del equipo de seguridad y primeros auxilios3. Todas las sustancias químicas deben ser consideradas “peligrosas”, es decir, corrosivas, venenosas y sus vapores tóxicos a menos que se sepa o este comprobado lo contrario.4. Proceda a realizar los experimentos siguiendo fielmente las instrucciones de su guía de laboratorio; no practique experimentos no autorizados.5. En caso de derramar sobre la piel u ojos alguna sustancia química corrosiva, debe proceder a lavar la zona afectada con abundante agua. Señale seguidamente el hecho al profesor quien indicara las medidas a tomar; en caso de no estar cerca el profesor, proceda a lavar la zona afectada con una solución de bicarbonato de sodio si la sustancia derramada es un ácido ó de acido bórico si la sustancia es una base. Estas soluciones se deben encontrar en el equipo de primeros auxilios.6. No tocar los reactivos directamente con las manos o colocarlos sobre la piel, sin la autorización del responsable de la actividad. No frotar los ojos con las manos después de manipular sustancias químicas.7. No degustar ninguna sustancia química del laboratorio de bioquímica.8. No oler directamente de la boca de los recipientes los vapores emanados por las sustancias químicas. Si desea hacerlo, la manera indicada es ventear con la mano sobre la boca de los recipientes que la contienen hasta la nariz, desde una distancia prudente.9. Antes de utilizar un reactivo, verifique cuidadosamente si las indicaciones señaladas en el rotulo del envase, se corresponden con las de la sustancia requerida.10. Evite contaminar las sustancias contenidas en los frascos de origen; para ello es imprescindible hacer uso de las técnicas adecuadas de trabajo que implican entre otros aspectos, no pipetear directamente del recipiente en cuestión, introducir espátulas sucias para obtener muestra de la referida sustancia. Tampoco debe devolver los sobrantes de compuestos utilizados al citado frasco de origen.11. Cuando desee verter una sustancia química desde su frasco de origen a otro recipiente, hágalo de manera tal que evite el “chorreado” por la parte donde se encuentra el rótulo, pues este podría deteriorarse y se perdería la identificación de la sustancia.12. Si coloca materiales de vidrio a calentar, deje reposar suficiente tiempo, recuerde que el vidrio caliente posee el mismo aspecto que el vidrio frío.13. No manipule aparatos ni equipos si no conoce su mecanismo de funcionamiento.14. Al finalizar la actividad de laboratorio debe dejar limpio el material y el sitio de trabajo. Los desperdicios sólidos deben ser dispuestos en un recipiente adecuado y los líquidos vertidos en el lavadero, dejando correr suficiente agua.15. Chequear las tuberías de gas, aire y agua de manera que no queden abiertas si no se van a utilizar.16. Recuerde como requisito indispensable el uso de la bata de laboratorio, no fumar, no comer, ni ingerir ningún tipo de bebida en el área de trabajo del laboratorio.
  3. 3. Universidad Nacional ExperimentalFrancisco de MirandaÁrea Ciencias del Agro y del MarPrograma de Ciencias VeterinariasDepartamento de Sanidad AnimalCátedra : Bioquímica IPRACTICA Nº 1RECONOCIMIENTO DE MATERIALES Y USODE LA BALANZA.A. OBJETIVOS Reconocimiento de los materiales del laboratorio y uso de cada uno de ellos. Como se determinan: Apreciación Capacidad Error relativo Error absoluto Manejo de instrumentos para muestras sólidas y líquidas. Uso de la balanza analítica.B. DESCRIPCION DE LOS MATERIALES DE LABORATORIO Y SU USO MAS COMUN:B.1 Vaso de precipitación:Es un recipiente de vidrio, también denominado “beacker”; tiene forma de un vaso pero conuna depresión en la parte superior que permite trasvasar un líquido a otro recipiente de bocamás pequeña.Se utiliza para contener líquidos, disolver compuestos, efectuar reacciones de precipitación,titular soluciones, calentar líquidos, recoger líquidos de filtrado, etc..La capacidad varíaentre 5 y 3000 ml. Los más usuales para trabajos de rutina son de 50, 100, 250, 500 y1000ml. De capacidad.B.2 MATRAZ ERLENMEYER O FIOLA:Recipiente de vidrio de forma cónica, se utiliza para calentar líquidos, preparar soluciones,titular. Existen dos clases:B.2.1 Sin tapa; que se usan para trabajos de rutina, especialmente la titulación y contenersoluciones.B.2.2 Con tapa esmerilada; tiene su uso para realizar reacciones donde uno de loscomponentes es volátil. Su capacidad en general, varía de 10 a 1000 ml. Que son los másusuales.B.3 CILINDRO GRADUADO:
  4. 4. Es un cilindro de vidrio con una base hexagonal, o redonda generalmente, que le permitemantenerse vertical. Se utiliza para medir volúmenes de líquido que no requieran mayorprecisión. Su capacidad varía desde 10 a 2000 ml., entre los más usuales.También se le denomina probeta, existen con tapa esmerilada para usos especiales.B.4 PIPETAS: Son tubos de vidrio, se clasifican en dos tipos: Pipeta volumétrica óaforada, y Pipeta graduada.B.4.1 Pipeta volumétrica ó aforada: Existen de simple aforo y de doble aforo, las desimple aforo tienen una marca en la parte superior que sirve para medir líquido desde elaforo hasta la parte inferior. Las de doble aforo, miden el volumen desde el aforo de laparte superior hasta el aforo de la parte inferior.B.4.2 Pipeta graduada: A diferencia de la pipeta aforada, las graduadas tienen divisionesmenores entre los extremos. Las graduaciones pueden ser décimas de ml. (1/10),centésimas de ml. (1/100),y en milésimas de ml.(1/1000).Existen pipetas para análisis específicos que miden cantidades menores y pueden seradaptadas a aparatos micrométricos especiales para fines analíticos que requieren muestrasde muy pequeño volumen.Existen dos clases de pipetas graduadas:B.4.2.1 Pipeta terminal; mide el volumen del líquido desde el cero al extremo inferior.B.4.2.2 Pipeta no terminal; mide el volumen del líquido desde el cero hasta la últimagraduación del extremo inferior. Entre las dos graduaciones extremas existen las décimas,centésimas y milésimas.B.5 BURETA: Son tubos de vidrio graduados en mililitro, en su parte inferior presentauna llave de plástico o teflón, que nos permite controlar gradualmente la salida de líquido,su capacidad oscila entre 1 y 100 ml. las más comunes. Para trabajos de rutina se usan de25 y 50 ml. de capacidad. Las hay también de divisiones mucho menores y se denominanmicroburetas.B.6 BALÓN: Es un recipiente de vidrio de forma esférica, los hay con tapa y sin tapaesmerilada, también existen de fondo plano y fondo redondo. El primero se usa paradestilación en combinación con otros materiales de laboratorio (Tubo de refrigeración,columna de reflujo, entre otros), el segundo sobre rejilla metálica, manta de calentamiento,o plancha de calentamiento. Existen balones especiales de paredes mas espesas quesoportan vacíos elevados, su capacidad varía entre 25 y 2000 ml. Los mas usualesB.7 MATRAZ AFORADO: Tiene forma aproximada a la de una pera, con un cuelloestrecho y alargado que permite efectuar una lectura exacta en el aforo (marca en el cuello)cuando se mide el volumen de un líquido contenido en él. Es con tapa esmerilada, o deteflón, se usa exclusivamente para preparar soluciones que exigen bastante exactitud. Lascapacidades más usuales varían desde 10 a 2000 ml., este recipiente se utiliza paracontener una cantidad exacta de líquido y no para medir soluciones.B.8 TUBOS DE ENSAYO: Son tubos de vidrio de diferente largo y diámetro, de usosmúltiples en química analítica; para cada tipo de análisis existe un tipo de tubo que llevanincluso nombres específicos.
  5. 5. B.9 CÁPSULA: Recipiente de forma aproximada a una semi-esfera, con un pico paraverter líquidos, se usa para calentar líquidos, evaporar soluciones y se puede trabajardirectamente sobre el mechero. Puede ser de porcelana, acero inoxidable, cuarzo, níquel yplatino.B.10 CRISOL: Recipiente de forma ovoide capaz de soportar altas temperaturas. Se usaentre otras cosas, para fundir sólidos. El material puede ser porcelana, cuarzo, aceroinoxidable, platino, etc., se puede usar directamente sobre la llama o en hornos especialesllamados muflasB.11 KITASATO: Es un recipiente de vidrio cónico parecido a la fiola, con un conductoen la parte lateral para conectar mangueras que provengan de trompas de vació o bombas yen la parte superior un embudo de filtración o crisol Guch. Generalmente se ha conectadocon un embudo de Buchner con base perforada donde se coloca un papel filtro de calibreespecífico de acuerdo al análisis que se desea efectuar.B.12 GRADILLAS: Instrumentos metálicos, de madera o polietileno que tienen porfunción el soporte de tubos de ensayo de material frágil, que por su diseño no puedensostenerse en posición vertical (fondo romo).B.13 PIZETA O FRASCO LAVADOR: Son recipientes generalmente elaborados conmaterial sintético a los cuales se les adapta un sifón con tapa o tapón del mismo materialque cierra herméticamente.B.14 EMBUDOS: Son conos de vidrio o plástico con pico terminal en forma de bisel delongitud variable. Conjuntamente con el papel filtro se usa para filtración, y también nospermite trasvasar líquidos de un material de boca ancha a otro de boca mucho mas estrechacon suma facilidad.B.15 MORTERO CON MASO: Son recipientes de porcelana, vidrio o ágata, los cualesllevan un mazo del mismo material que se utilizan para la preparación de soluciones oreactivos y en condiciones estériles para triturar material sólido.B.16 ESPÁTULA: Generalmente de material inoxidable o de porcelana, con mangoresistente al calor y a los agentes químicos se utilizan para agregar sustancias que van a serpesadas.B.17 Pinza porta tubos: Pieza metálica o de madera accionada por un resorte que sirvepara sujetar tubos de ensayo, especialmente cuando estos van a ser sometidos al calor, ocontienen sustancias calientes.
  6. 6. B.18 PROPIPETAS: Instrumento elaborado de goma sintética o cualquier otro materialflexible que se usa para succionar líquidos, principalmente cuando esta se realiza con lapipeta, y en caso de que la sustancia a succionar emana gases tóxicos o cáusticos de altasconcentraciones.C. Uso de la balanza. La balanza analítica tiene su uso en las determinaciones de masa y peso en los laboratorios de química analítica y bioquímica, cuando se requieren preparar soluciones de compuestos sólidos y líquidos, por lo que se hace de importancia el conocimiento de la misma. Hoy día existen varios tipos de balanza: Manipulación mecánica en el tarado. Balanza de un solo plato. Balanza de dos platos. Balanza de un solo plato y de cuchillas. Tarado automático.Los mismos tipos de balanza, la única diferencia es más rápida y exacta, porque trabaja conun circuito de compensación de peso.Las determinaciones gravimétricas también son realizadas con el uso de la balanza.PRECAUCIONES.1. Lo primero que se debe saber para utilizar una balanza es su capacidad máxima, esto porque si se agrega un peso mayor al de la capacidad máxima puede crear daños en el equipo.2. Se debe tener en cuenta que la balanza debe estar nivelada antes de usarla para evitar errores de pesada por gravedad.3. Observar antes y después de cada pesada que el tarado de la balanza esté calibrado.4. Verificar que el plato o platillo de la balanza este limpio.5. No dejar cargada con peso la balanza.6. No pesar directamente sobre el platillo de la balanza.7. No tocar el platillo con las manos.8. El objeto a pesar debe ser colocado en el centro del platillo para equilibrar el peso.9. Se debe manipular primeramente los controles que manejen las escalas mayores e irgraduando si es necesario hasta alcanzar el peso deseado.10. La balanza debe quedar completamente limpia después de cada pesada.
  7. 7. UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL FRANCISCO DE MIRANDA AREA CIENCIAS DEL AGRO Y MARPROGRAMA DE CIENCIAS VETERINARIAS CATEDRA: BIOQUÍMICA I PRACTICA 2 VALORACIÓN ACIDO – BASE Y TITULACION DE LA LECHE.OBJETIVOS: 1. Adquirir conocimientos sobre el uso de los diferentes métodos para determinar pH. 2. Comprender y adquirir conocimientos sobre los procesos de titulación. 3. Comprender la importancia de los análisis cuantitativos para fines veterinarios, específicamente en la evaluación del grado de acidez de la leche.INTRODUCCIÓN:Existen sustancias o compuestos que en la naturaleza se clasifican como ácido debido a susabor agrio y hay sustancias alcalinas que neutralizan a los ácidos. Desde el punto de vistaquímico, un ácido es una sustancia con tendencia a perder protones (H+) y una base (álcali)es una especie que tiende a aceptar protones.Para el estudio de los ácidos tenemos como ejemplo el HCl, el cual en una solución acuosalo encontramos de la siguiente forma: HCl + H2O H3O + Cl-Teniendo en solución iones hidronio y aniones de cloruro.La capacidad que tiene un ácido o una base de disociarse por completo o parcialmente losclasifican como fuertes o débiles.Existen muchos métodos para determinar si una sustancia es ácida y básica: Métodos cuantitativos: Se puede utilizar el papel pH, que de acuerdo al color que indique dará una cantidad especificada para ese color, y también está un aparato llamado peachimetro que mide la cantidad de protones (H+) disueltos en la sustancia, transformando ese impulso eléctrico que generan los protones en cantidades de pH que van desde el 0 al 14 (escala de pH) Métodos cualitativos: Se fundamentan en cambios de color según la basicidad o acidez de la solución, como el papel tornasol, naranja de metilo, fenolftaleína y otros.
  8. 8. NEUTRALIZACIÓN:Cuando un compuesto reacciona con otro compuesto, en la reacción intervienen cantidadesfijas entre sí; es decir, que reaccionan las mismas cantidades equivalentes de un compuestoA con las de un compuesto B. Para el caso de reacciones ácido – base, si se tiene unasolución ácida con una concentración desconocida se le puede agregar una base deconcentración conocida para producir una reacción llamada neutralización. En el punto deneutralización todos los H+ del ácido han reaccionado con los OH- de la base añadida.Quedando en la solución moléculas de sal y agua con un pH neutro.El principio de la neutralización es utilizado para determinar la concentración de ácidos ybases en solución; es decir, obteniendo la cantidad gastada para neutralizar la solución esposible determinar la concentración por medio de la siguiente fórmula:Formula N°1 Va * Na = Vb * NbDonde:Va = volumen del ácidoNa = normalidad (concentración) del ácidoVb = volumen de la baseNb = normalidad (concentración) de la baseINDICADORES:Son compuestos, la mayoría orgánicos de cadena larga que exhiben diferentes coloresdependiendo del pH de la solución donde se encuentren, los más comunes son lafenolftaleína, azul de bromofenol, verde de bromocresol, el rojo de fenol y naranja demetilo.CAMBIO DE COLOR DE LOS INDICADORES SEGÚN LA SOLUCIÓN DONDESE ENCUENTREN INDICADORES SUSTANCIA ACIDA SUSTANCIA BÁSICA FENOLFTALEINA INCOLORA ROSA – PÚRPURA NARANJA DE METILO ROJO AMARILLO – NARANJA ROJO DE FENOL AMARILLO ROJO VERDE BROMOCRESOL AMARILLO AZUL
  9. 9. TRABAJO EXPERIMENTAL: 1. Medidas de pH. Con el uso del papel tornasol determine el pH de las diferentes muestras a estudiar. Anote los resultados. 2. Indicadores ácido – base. Tome cuatro tubos de ensayo para cada muestra, agregue aproximadamente cuatro mililitros de muestra, disuelva con agua si es necesario y agregue unas gotas de indicador. Anote los resultados. 3. Titulación: Titulación de un ácido fuerte con una base fuerte. Con una solución de NaOH al 0.1M, prepare una bureta previamente lavada y curada enrasándola hasta cero. En una fiola tome 1 ml de ácido acético de concentración desconocida y agregue unas gotas de fenolftaleína. Titule el ácido con la base que se encuentra en la bureta hasta obtener un cambio de color. (rosado pálido) Se repite por triplicado. Determine la concentración desconocida del ácido, en normalidad con la formula N°1 4. Determinación del grado de acidez de la leche: Se toman 10ml de leche en una fiola y se le añaden 20ml de agua destilada. Incube en baño de maría a 40°C. Agregue 5 gotas de fenolftaleína. Titule con NaOH. Anote el volumen de base gastado y determine la acidez de la leche con la siguiente fórmula: °Gr de acidez = ml de base gastado * 10 ml de leche.
  10. 10. HOJA DE EVALUACIÓN1. MEDIDAS DE pH MUESTRA 1 MUESTRA 2 MUESTRA 3ACIDABASICANEUTRAIndique con una (X) si las muestras son ácidas, neutras o básicas2. INDICADORES ACIDO – BASEINDICADORES MUESTRA 1 MUESTRA 2 MUESTRA 3Indique el color y si las muestras son ácidas o básicas3. REALICE LOS CALCULOS DE LA TITULACIÓN Y DIGA LACONCENTRACIÓN DEL ACIDO ACETICO.4. REALICE LOS CALCULOS Y DIGA CUAL ES EL GRADO DE ACIDEZ DELA LECHE.
  11. 11. UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL FRANCISCO DE MIRANDA AREA CIENCIAS DEL AGRO Y MAR PROGRAMA DE CIENCIAS VETERINARIAS CATEDRA: BIOQUÍMICA I PRACTICA 3 CURVA DE TITULACION DE ACIDOS FUERTES Y DEBILES;DETERMINACIÓN DE LA CONSTANTE DE EQUILIBRIO (Ke) Y DE LA ZONA DE TAMPONAMIENTO.OBJETIVOS: 1. Que el estudiante realice e intérprete una curva de titulación de ácidos débiles y fuertes utilizando una base fuerte. 2. Calcular la Ke y el pK de soluciones ácidas a partir del pH inicial y su concentración. 3. Comprender el mecanismo de tamponamiento de las soluciones buffer. 4. Comprender la importancia de las sustancias tampones presentes en el organismo e identificar las principales.Un ácido es cualquier sustancia o compuesto que cede o dona protones, y una base es todasustancia capaz de aceptar protones, pero la capacidad que tienen estos para disociarse losclasifica en ácidos o bases fuertes o débiles.Bases y ácidos fuertes son aquellas sustancias que pueden disociarse totalmente.Bases y ácidos débiles son aquellas sustancias que pueden disociarse parcialmente.Cuando se agrega un ácido a una base, se produce una reacción llamada neutralización, sedebe recordar que un equivalente de una sustancia ácida siempre reacciona con unequivalente de un compuesto alcalino o básico. Esta reacción que se efectúa agregandocantidades conocidas de ácido o base de concentración también conocida posee el nombrede titulación, cuando han reaccionado todos los equivalentes de la base con los equivalentesdel ácido se dice que ha alcanzado el punto de equivalencia.Por ejemplo se desea conocer la concentración de una solución de ácido clorhídrico (20ml)titulado con una solución de hidróxido de sodio al 0.1 N y se disponen de 20 ml de NaOHhasta alcanzar el punto de equivalencia, la reacción que se produce es: HCl + NaOH NaCl + H2O Ac. Hidróxido Cloruro Agua Clorhídrico de sodio de sodio
  12. 12. Y la concentración desconocida se determinará por la siguiente fórmula: Na = (Vb * Nb)/ VaDonde:Na = concentración de ácido desconocido.Va = Volumen de ácido titulado.Nb = Concentración de base conocida.Vb = Volumen de base gastado en la titulación.En el punto de equivalencia todos los iones H3O+ del ácido habrán sido neutralizados conlos iones OH- de la base y solamente quedarán en solución la especie H2O y el pH de estasolución será de 7, correspondiente al equilibrio iónico del agua; y si se sigue agregandoálcali o base después del punto de equivalencia, se estará aumentando la concentración deOH- y por consiguiente el pH aumentará como se observa en la gráfica: pH Volumen de NaOH agregado (ml)El punto de mayor pendiente en la grafica corresponde al punto de equivalencia (P.E) y porconsiguiente la constante de equilibrio será aproximadamente igual a la unidad (1). Esimportante establecer diferencias entre los ácidos fuertes y débiles, sabiendo que los ácidosfuertes son aquellos que proveen al medio donde se encuentran una concentraciones deiones hidrógeno (H+ ) y que en condiciones de pH fisiológico de aproximadamente 7 todaslas biomoléculas con potencial para existir en forma iónica en realidad existen como tal, eslógico que los organismos vivos tengan la capacidad de prevenir cambios excesivos en elpH de los fluidos corporales intra y extracelulares. Esto se logra con los sistemas tampón.Sustancia tampón: Es toda sustancia capaz de aceptar cantidades considerables de ácidos obases sin producir cambios de pH, es decir, su pH no va a variar de bruscamente si se leagregan ciertas cantidades de ácidos o bases, un buffer siempre se va a formar por la uniónde aun ácido débil y una base fuerte; un ejemplo sería el caso del ácido acético con elhidróxido de sodio: CH3COOH + NaOH CH3COONa + H2O
  13. 13. Produciendo una sal más agua, pero esta sal es de ácido débil y su comportamiento será diferente al del ácido fuerte. La reacción producirá una hidrólisis alcalina con el agua: CH3COONa + H2O CH3COOH + Na+ + OH- Por lo tanto, al producirse esta reacción se podrá seguir agregando más hidróxido hasta que la cantidad de ácido acético en la solución se consuma por completo. La constante de equilibrio (Ke) nos da una relación entre la fracción disociada y la fracción no disociada, por lo tanto al conocer la cantidad de esta se podrá saber si la sustancia es débil o fuerte, si el resultado está cercano a cero estamos en presencia de un ácido o base fuerte. El pK no es más que un pH en el cual una determinada sustancia tampón puede aceptar mayor cantidad de ácido o base sin variar el pH del medio. PROCEDIMIENTO PRÁCTICO:1. Se toma una bureta previamente lavada y curada con una solución de NaOH al 0.1M.2. Se enrrasa la bureta con el NaOH al 0.1 M.3. En una fiola se toman 1 mL de ácido acético (CH3COOH) al 0.1 M.4. Se introduce el electrodo del peachimeto previamente calibrado con una solución buffer.5. Se mide el pH inicial y se determina la Ke y el pK.6. Se comienza a agregar alícuotas de 1 mL en 1 mL, tomando lectura de pH por cada mL de base agregado.7. Se continúa hasta agregar 14 ml de base.8. Se repite el mismo procedimiento para el ácido clorhídrico (HCl).
  14. 14. UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL FRANCISCO DE MIRANDA AREA CIENCIAS DEL AGRO Y MARPROGRAMA DE CIENCIAS VETERINARIAS CATEDRA: BIOQUÍMICA I PRACTICA 4 PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LAS PROTEINASOBJETIVOS: 1. Aislar proteínas por precipitación en solución con el uso de sales neutras, ácidos orgánicos y altas temperaturas. 2. determinar el punto isoeléctrico de la gelatina.Las proteínas son sustancias que forman parte integral en el organismo de los seres vivos ydesempeñan un sin número de funciones, como componentes estructurales de tejidos ycélulas como enzimas, hormonas, etc.Definidas químicamente las proteínas son polímeros constituidos por unidadesmonoméricas de aminoácidos y tienen la siguiente estructura general: (Grupo amino) H2N – CH - COOH (Grupo carboxilo) RLa unión covalente que tiene lugar entre los aminoácidos se denomina enlace peptídico, yocurre entre el grupo amino de un aminoácido y el grupo carboxilo de otro aminoácidosubsiguiente. Los grupos R pueden ser moléculas polares o apolares, grupos ácidos obásicos.Las proteínas que solo están constituidas por aminoácidos se denominan proteínas simples,las que tienen otros materiales se denominan complejas. Las proteínas también se clasificansegún su solubilidad, función biológica y niveles estructurales.La precipitación irreversible de las proteínas se llama desnaturalización, se puede obtenerpor calentamiento o por la adición de ácidos o bases fuertes. La precipitación reversible seobtiene por adición de sales (KCl, NaCl, NH3 (SO4)2) las cuales compiten con el solventejunto a los grupos cargados de las proteínas, dando como consecuencia la desaparición dela solvatación de estos últimos grupos, provocando la agregación molécular.
  15. 15. Los cambios de pH del medio también provoca la precipitación de las proteínas, ya que alalcanzar el punto isoeléctrico se neutralizan sus cargas y se eliminan sus repulsioneselectrostáticas, lo que provoca la agregación proteicaDESRROLLO PRÁCTICO: 1. AISLAMIENTO DE LA CASEÍNA DE LA LECHE. En una fiola de 125 ml se calientan 75 ml de leche a 40 °C por 5 minutos. Se agrega gota a gota y en constante agitación ácido acético preparado al 10% hasta que toda la caseína halla precipitado en forma de pasta blanca. Anote las observaciones del proceso. 2. PRECIPITACIÓN DE ALBÚMINA POR EFECTO DE SALES. Tome 2 mL de solución de albúmina al 0.5% p/v. Añada 2 mL de una solución sobresaturada de sulfato de amonio, anote los resultados. 3. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA GELATINA. Se toman 4 tubos de ensayo y se le agregan 2mL de un buffer de pH 3, en otro 5, en otro 6 y en otro pH 7. En uno de los tubos se agregan 2 ml de gelatina a cada uno. A cada tubo se le añaden 2 ml de etanol absoluto lentamente por las paredes del tubo, se deja reposar por media hora. Anote lo observado.

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