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  1. 1. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
  2. 2. Condiciones para el crecimiento microbiano Medios de cultivo agua fuente de energía Nutrientes Crecimiento fuentes de C, N, otros elementos micronutrientes, factores de crecimiento temperatura Condiciones de cultivo pH luz aireación actividad de agua potencial redox
  3. 3. Diagnóstico Investigaciones Clínico No microbiológicas Tomar correctamente Rotular y embalar adecuadamente Almacenar y transportar correctamente No teñidos o teñidos con Gram u otra tinción Característica de colonia, morfología, hemólisis, pigmento, etc. Por difusión en discos o MIC Serología Tecnologías de DNA
  4. 4. Medios de Cultivo
  5. 5. • Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. INTRODUCCIÓN
  6. 6. Temperatura Grado de humedad Presión de oxígeno Alcalinidad Acidez
  7. 7. Solidificante Licúa agua hirviendo Solidifica a 40°
  8. 8. Medios de Cultivo
  9. 9. • Los medios de cultivo son mezclas de substancias nutritivas que se combinan para favorecer el crecimiento, aislamiento e identificación de microorganismos. Medio de Cultivo Cultivo • Material alimenticio en el que crecen los microorganismo. • Crecimiento de microorganismos
  10. 10. Artificial Líquida Semisólida Solida Nutrientes
  11. 11. En un estudio bacteriológico in-vitro se demostró que con una sola aplicación de campos magnéticos naturales a través de la mano del Doctor Wilhelm "Willy" Frinta durante 10 minutos y a una distancia de 1 1/2 pulgada sobre un recipiente de petri con agar sangre, hubo una inhibición de crecimiento de gérmenes, (estreptococo, estafilococos) CONTROL ESTUDIO Dato Interesante
  12. 12. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO BASÁNDOSE EN SU COMPOSICIÓN QUÍMICA
  13. 13. Fuente de C, N Sales suplen iones Estimuladores del crecimiento Concentraciones conocidas siempre! A. Medios Sintéticos
  14. 14. Extracto de levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne. Nutrientes en abundancia Sin saber con exactitud la composición “Composición indefinida” B. Medios Complejos
  15. 15. Complejos Aditivos adicionales Sangre, suero Microorganismos exigentes Extractos de tejidos de animales y plantas C. Medios de Enriquecimiento
  16. 16. Microorganismo en particular A partir de población mixta + cristal violeta: inhibe los Gram+ CO2: Fuente de C para autótrofos Maltosa: solo usen maltosa D. Medios selectivos
  17. 17. Facilitan discriminación de microorganismos Propiedades diferenciales Mc Conkey: lactosa + / lactosa- E. Medios diferenciales Agar sangre: hemolíticos / no hemolíticos
  18. 18. No son rápidos: muerte rápida de células + glucosa: producen ácidos No se usa!! F. Medios de mantenimiento Acidifique el medio
  19. 19. Agar-Agar
  20. 20. Propósitos generales Poco exigentes Análisis de alimentos, agua Poca importancia sanitaria Agar Nutritivo
  21. 21. Características del medio: ámbar claro a medio ligeramente opalescente. • No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. • La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. Xanthomonas campestris
  22. 22. • Medio para propósitos generales • Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes • Como para la observación de reacciones de hemólisis. También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate. Base Agar Gelosa Sangre
  23. 23. Infusión de músculo de corazón y la peptona: alto valor nutritivo Fundamento Agregado de sangre: detectar hemolisis El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
  24. 24. • Medio preparado: ámbar. • Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza. Características del Medios
  25. 25. • Aislamiento selectivo de bacilos Gramnegativos de rápido desarrollo • Escasas exigencias nutricionales. • Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. E.M.B. Agar
  26. 26. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacterspp. = característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa = centro oscuro con periferia azulada o rosada Las que no lo hacen = incoloras. Fundamento
  27. 27. E. Coli Klebsiella Shigella Proteus Enteroccocus Salmonela
  28. 28. • • • • Bacilos Gramnegativos de fácil desarrollo Aerobios y anaerobios facultativos Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa Muestras clínicas, de agua y alimentos. Mac Conkey Agar
  29. 29. sales biliares disminuye el pH alrededor de la colonia. Los no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras Lactosa Peptonas Fundamento el indicador de pH rojo neutro
  30. 30. • Base a: • La producción de pigmentos. • La fermentación de manitol. • La hidrólisis de gelatina. • A partir de alimentos y otras muestras. Estafilococo 110 Agar
  31. 31. El extracto de levadura y la tripteína aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de Na: inhibir el desarrollo de la flora acompañante excepto Staphylococcusspp. Fundamento
  32. 32. cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano. Prueba positiva El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio. 1-Fermentación de manitol Prueba negativa Resultados No hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la zona sin inocular.
  33. 33. Positiva Halo transparente alrededor de las colonias Negativa Ausencia de halo transparente alrededor de las colonias 2. Hidrólisis de la gelatina
  34. 34. Estafilococos Muestras clínicas Alimentos Productos cosméticos Cultivo de especies halófilas de Vibrio Especies pueden no desarrollar Sal y Manitol Agar
  35. 35. Producen ácidos: Color rojo al amarillo. Los estafilococos coagulasa (N): colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Cloruro de Na: agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante. Los estafilococos coagulasa (P): zona amarilla brillante. Rojo fenol: indicador de pH. Fundamentos
  36. 36. Características del medio Medio preparado: rojo
  37. 37. Aureus Epidermidis Saprophyticcus
  38. 38. Aislamiento de salmonella y shigella Alimentos Heces Salmonella Shigella Agar
  39. 39. Selectividad: Sales biliares y verde brillante Diferencial: fermentación lactosa; prod. acido sulfhídrico No lactosa: transparente Acido Sulfhídrico: Negro Fundamentos Lactosa: rojo
  40. 40. Características del medio Medio preparado: rojo naranja. A. Klebsiella pneumoniae. Acid + Lac + B. B. Escherichia coli.Acid + Lac + C: Salmonellasp.. H2S D: Proteus mirabilis H2S E: Pseudomona aeruginosa
  41. 41. Universal para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Es útil con el agregado de sangre Muller Hinton Agar Cultivo y aislamiento microorganismos nutricionalmente exigentes
  42. 42. Mayoría Crecen Suplementa con sangre de carnero al 5% Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) Inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos Fundamento
  43. 43. • Chromobacterium violaceum Streptococcus pyogenes Pseudomona aeruginosa Características del medio
  44. 44. Aerobias/Anaerobias Líquido Exigentes/ difícil desarrollo 20Ul de Penicilina y 100μg/ml de amicacina: hongos Cerebro Corazón Infusión
  45. 45. Cerebro de ternera, corazón vacuno y la peptona La glucosa El cloruro de sodio • Carbono • Nitrógeno • Vitaminas • Hidrato de Carbono fermentable • Balance osmótico 20Ul de Penicilina • Hongos patógenos y 100μg/ml de amicacina Fundamento

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