Práctica De Cariotipo
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Presentación realizada por la Biol. Varenka Martínez Toledo sobre Cariotipos Humanos. Clase presentada al grupo 5180 de Genética I.

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  • En la diapositiva 13, arriba de células que no se dividen dice G0, ¿A eso te refieres?
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  • que significa CC? lo escribiste en la diapositiva 13
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  • 1842- primeras observaciones de cromosomas se realizaron en plantas y lombrices. Entre 1879 y 1882- Las primeras observaciones de la división celular fueron hechas por Flemming. Fue Flemming quien definió inicialmente a la cromatina como la sustancia que constituye los núcleos interfásicos y que demuestra determinadas propiedades de tinción. Posteriormente se vio que la cromatina era la que formaba a los cromosomas durante la fase de división celular. Por lo tanto las definiciones (etílomologicas) de cromosomas (cuerpo que se tiñe) y cromatina (sustancia que se tiñe) son puramente citológicas La definición biológica solo se alcanzó a principios del siglo XX con el redescubrimiento de las leyes de mendel hechas por Sutton y Boveri en 1902, ya que se pudo asociar a los factores de Mendel (genes) con los cromosomas (teoría cromosómica de la herencia) Pero quien en verdad estableció las bases de la teoría cromosómica de la herencia fue Thomas H. Morgan en 1910 quien publica sus estudios sobre los rasgos genéticos ligados al sexo.
  • Qué es un cromosoma: Máximo grado de compactación del DNA. Estas estructuras son visibles en la fase M del CC La función de los cromosomas aparte de transmitir la información de una generación a otra es la repartición equitativa de dicha información genética.
  • Cada cromosoma consta de 2 cromátidas hermanas unidas por el centrómero. Cada cromátida va a contiene 1 molécula de DNA El centrómero es una región especializada en donde se enganchan las fibras del huso en la división celular. Además divide al cromosoma en 2 brazos Brazo corto llamado P (petit) Brazo lago llamado q (por ser q la letra sig en el alfabeto) Telómeros. Son los extremos de los cromosomas Regiones NOR (región del organizador nucleolar (en ella se sitúan los genes que se transcriben a RNAr Satélite (SAT). Es el segmento del cromosoma entre el NOR y el telomero solo lo encontramos en aquellos cromosomas que tienen NORs.
  • Las parejas de cromosomas homólogos tienen una semejanza genética imp: Tienen genes idénticos situados en los mismos lugares a lo largo del cromosoma que se denominan locus. En los organismos con reproducción sexual, uno de los miembros de cada pareja proviene de la madre y el otro del padre. Excepción::: en muchas especies, los cromosomas que determinan el sexo (cromosomas sexuales) no tienen normalmente el mismo tamaño, posición del centrómero, proporción entre los brazos o el mismo potencial genético. Y, es mas pequeño, es acrocéntrico y carece de la mayoría de los loci que se encuentran en el cromosomas X. No obstante en la meiosis se comportan como homólogos.
  • El número de cromosomas 2n varía mucho de unas especies a otras y no existe relación entre el número de cromosomas y la complejidad evolutiva.
  • De acuerdo con la posición del centrómero, los cromosomas pueden ser de tres tipos: METACENTRICOS: Brazos iguales. SUBMETACENTRICOS: El centrómero esta más cerca de uno de los extremos que del otro, determinándose así claramente un brazo corto y uno largo ACROCENTRICO: Cuando el centrómero esta situado muy próximo a uno de los extremos, quedando un brazo corto muy reducido. Noten que la forma del cromosoma en la anafase viene determinada por la posición del centrómero
  • A la izquierda tenemos una metafase de células somáticas y si esa metafase la ordeno, entonces lo que formo es un cariotipo, que es lo que tenemos del lado derecho. - El brazo largo ¨q¨de cada cromosoma se sitúa hacia abajo. - Los autosomas se disponen en orden decreciente, mientras que los cromosomas sexuales deben ir por separado.
  • Obtención de la muestra. Con una jeringa de 3ml heparinizada se toma una muestra de 2ml de sangre periférica Siembra. - En condiciones estériles, se preparan tubos cónicos con 4.5ml de medio McCoy 5A suplementado con aminoácidos esenciales, estretomicina-penicilina y fitohemaglutinina. A cada tubo se le agregan 0.5ml de sangre (5 a 8 gotas). Se flamean, se cierran y se etiquetan. Finalmente se mantienen en una incubadora a 37ºC por 72 horas.
  • ¿Por qué se agrega fitohemaglutinina?, y por que se dejan incubar por 72 horas? Los linfocitos en la sangre periférica no se encuentran dividiéndose. Ellos se encuentran en la fase G0 del CC. La manera de inducirlos a que nuevamente se dividan es exponerlos a un agente mitógeno como por ejemplo la fitohemaglutinina (extracto de P haseolus vulgaris ). Este agente estimula la formación de RNA una hora después de su adición al medio de cultivo y de DNA 24 horas después. ¿por qué 72 horas?? Para tener una cantidad optima de células, por que no todas entran al mismo tiempo al CC y por que más tiempo no alcanza (se acaban los nutrientes).
  • Antes de cumplir las 72 horas. A los tubos se les agrega colchicina (10ug/ml) y se deja incubar por 1 hora a 37ºC. Transcurrido ese tiempo, se centrifugan durante 10 min a 1500rpm. Se retira el sobrenadante y se adiciona 7ml de solución hipotónica previamente calentada a 37ºC, se resuspende y se incuban por 20 min a 37 ºC. Se prefijan adicionando 1ml de fijador (3:partes de metanol:1 parte ác. Acético. Y se resuspende perfectamente. @ 10 min 1500rpm Aspirar y poner fijador. Este paso se repite hasta que el sobrenadante quede transparente. Poner video. Laminillas Dejar poco fijador. Resuspender bien y dejar caer unas 2 gotas en un portaobjetos frío y húmedo. Se secan a la flama y se analizan en contraste de fase para monitorear la dispersión de los cromosomas en la metafase. Las laminillas se introducen en un vaso de Koplin con colorante Giemsa al 4% por 10min. Ver al microscopio.
  • Bandas C : Desnaturalizar por calor y teñir con Giemsa-- se tiñen las regiones centroméricas (heterocromatina constitutiva) Bandas G: digestión de los cromosomas con la enzima proteolítica tripsina y y tinción con giemsa y wright MAS UTILIZADO, PARA DETECTAR ALTERACIONES CROMOSOMICAS. bandas G oscuras: DNA rico en AT, replicación tardía, pocos genes. Bandas G pálidas: DNA rico en GC, replicación temprana, muchos genes. Bandas R: opuesto opuesto al bandeo G- útil para teñir los extremos distales de los cromosomas (deleciones o reorganizaciones distales) Bandas T: tiñen regiones teloméricas. Bandas NOR: utiliza como colorante al nitrato de plata. Tiñe los tallos de los satélites de los cromosomas acrocéntricos. Cromosomas 13,14,15 21 y 22 En 1971 se realizó una reunión en Paris para establecer la nomenclatura de estos diversos patrones.
  • FISH: Hibridación in situ fluorescente. Células fijas---sonda específica (DNA o RNA marcado con biotína--- se hace la hibridación y se utiliza otra molécula para que se peque a la biotina (avidina) y que tiene unida una molécula fluorescente (fluoresceina)
  • Representación esquemática y nomenclatura de los cromosomas humanos en el estadio de 1000 bandas, procesados para visualizar bandas G. Los diferentes colores representan diferentes intensidades de las bandas. Las áreas ralladas (cromosomas 1,9 16 y Y) representan regiones heterocromáticas.
  • Cada cromosoma en las células somáticas humanas está formado por una serie de bandas continuas. Las bandas se ubican en regiones a lo largo de los brazos cromosómicos y las regiones tienen límites definidos que pueden ser los extremos de los brazos, los centrómeros y ciertas bandas. Las regiones y las bandas se enumeran desde el centrómero hacia el telómero del brazo correspondiente. Una banda considerada como límite pertenece en su totalidad a la región distal a ese límite y es la banda 1 de esa región. Para definir una banda en particular se requiere: Número del cromosoma Símbolo del brazo Número de la región y Número de la banda dentro de la región.

Práctica De Cariotipo Práctica De Cariotipo Presentation Transcript

  • CARIOTIPO Biól. Varenka Martínez Toledo
  • Flemming Walter sutton Thomas H. Morgan
  • Estructuras que sirven de vehículo para la transmisión de la información genética. Están formadas por DNA y proteínas. Cromosómas
  •  
  • 2n= 46
  • Excepción…..
  • 2n= 46
  • Especie Hormiga Myrmecia pilosula, macho Hormiga Myrmecia pilosula, hembra Mosca de la fruta (Drosophila melanogaster) Centeno (Secale cereale) Caracol (Helix) Gato (Felis silvestris catus) Cerdo (Sus scrofa) Ratón (Mus musculus) Trigo (Triticum aestivum) Rata (Rattus rattus) Conejo (Oryctolagus cuniculus) Liebre (Lepus europaeus) Humano (Homo sapiens sapiens) Chimpancé (Pan troglodytes) Patata, Papa (Solanum tuberosum) Oveja (Ovis aries) Vaca (Bos taurus) Asno (Equus asinus) Mula (Equus asinus) Caballo (Equus caballus) Camello ( Camelus bactrianus) Llama (Lama glama) Perro (Canis lupus familiaris) Gallina (Gallus gallus) Paloma Columbia livia Pez Carassius auratus Mariposa Helecho Ophioglussum reticulatum Protozoario Aulacantha scolymantha Número de cromosomas 1 2 8 14 24 38 40 40 42 42 44 46 46 48 48 54 60 62 63 (estéril) 64 74 74 78 78 80 94 ~380 1260 1600
  •  
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  • CARIOTIPO Es un arreglo ordenado de los cromosomas de acuerdo a la forma y patrón de bandeo de los mismos. Representa el conjunto de cromosomas característicos de una especie.
  • Siembra
  • Células que no se dividen G1 Telofase Anafase Metafase Profase G2 S
  • Cosecha
    • Colchicina:
    • Alcaloide que impide la formación del huso acromático.
    • Tratamiento de la enfermedad de la gota y la cirrosis hepática
    Colchicina
  • KCl - solución hipotónica a 37ºC por 20 min
  • Bandeo Cromosómico Los cromosomas mitóticos vistos con el microscopio óptico no pueden diferenciarse claramente considerando sólo sus tamaños relativos o por la posición del centrómero; en estos casos se debe recurrir a técnicas citológicas para la tinción de los cromosomas, que evidencian bandas transversales (oscuras y claras) a la largo de los mismos y que corresponden a distintos tipos de cromatina. En una especie dada, estas variantes de la cromatina presentan un tamaño y disposición constante.
  • Bandas C Bandas T Bandas G Bandas R
  • FISH
  • 19
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  • 23 46,XX 46,XY 1 2 2 1 8p11.2 indica la subbanda 2, de la banda 1, de la región 1 del brazo corto del cromosoma 8 1p33 indica banda 3, de la región 3 del brazo corto del cromosoma 1 Nomenclatura
  • Fórmula cromosómica: 46,XX 46,XY Se registra el número de cromosomas (incluidos los sexuales) seguido de una coma, luego de la cual se escriben los cromosomas sexuales. Si existen aberraciones numéricas o estructurales de los autosomas, éstas se escriben a continuación, luego de otra coma.
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  • Cariotipo
    • Individuos con dos o más malformaciones incluyendo falla en el crecimiento prenatal o posnatal
    • Con retraso mental de origen desconocido
    • Con síndromes cromosómicos reconocidos fenotípicamente
    • En parejas con problemas de fertilidad
    • Presencia de más de un aborto espontáneo
    • En individuos con malformaciones sexuales o anormalidades del desarrollo sexual
    • Pacientes con malignidades.
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