Citogenética molecular

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Citogenética molecular

  1. 1. CITOGENÉTICA MOLECULAR BÉJAR VILELA ROSARIO
  2. 2. CITOGENETICA MOLECULAR  Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridizarse entre sí.  Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.
  3. 3. CITOGENÉTICA MOLECULAR  Biología molecular y citogenética.  Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación por fluorescencia in situ (FISH).
  4. 4. FISH  Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con sustancias fluorescentes puede observarse la señal inmediatamente después del FISH al microscopio de fluorescencia.  Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas fluorescentes que permiten su observación al microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con la técnica “nick translation
  5. 5. ADNsc
  6. 6. - Reconoce 2 - 3% secuencias centromericas. - Detección de cromosomas concretos - Anormalidades numéricas - Secuencia especifica del ADN: LOCUS DETERMINADO - Reordenamiento estructurales - Anormalidades estructurales Detección de cromosomas concretos Anormalidades numéricas
  7. 7. TECNICA DE FISH  PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA  PREPARACION DE LAS PLACAS  PREPARACION DE LAS SONDAS  HIBRIDACION  LAVADOS POST-HIBRIDACION  DETECCION  TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI)  VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
  8. 8. PCR  Técnica que permite la amplificación in vitro de una secuencia específica de ADN hasta generar millones de copias de una manera rápida y sencilla  Permite analizar muestras con cantidades mínimas de ADN
  9. 9. FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR Separar las hebras molde para la síntesis de nuevas hebras “Aparear” primers a la hebra molde para dirigir la síntesis de DNA . La síntesis de DNA requiere de primers para comenzar. Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra madre como molde A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de forma exponencial, la secuencia diana de ADN
  10. 10.  Sondas marcadas fluorescentemente son para cada cromosoma hechas para marcar DNA específico de cada cromosoma con diferentes fluoróforos.  La diferencia espectral generada por el etiquetado combinatorio son capturadas y analizadas usando un interferómetro agregado a un microscopio de fluorescencia.  El programa de procesamiento de imágenes entonces asigna un pseudocolor a cada combinación espectralmente diferente, permitiendo la visualización de cromosomas coloreados.
  11. 11. SKY
  12. 12. GRACIAS

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