BpSM 2013.05 - Pomozi Viola: Az egerek és az érelmeszesedés: az ABCC6 transzporter szerepe

380 views

Published on

Budapest Science Meetup: 2013. május

Published in: Education
0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total views
380
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
2
Actions
Shares
0
Downloads
0
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

BpSM 2013.05 - Pomozi Viola: Az egerek és az érelmeszesedés: az ABCC6 transzporter szerepe

  1. 1. Az egerek és az érelmeszesedés: az ABCC6transzporter szerepePomozi ViolaMTA TTK Enzimológiai Intézet2013.05.09.
  2. 2. Az ABC transzporterekEmberben 7 alcsalád, 48 fehérjeMinden élőlényben megtalálhatóak!ABCBalcsaládABCCalcsaládABCGalcsalád
  3. 3. ABC transzporterek és betegségekABCA1ABCA1 Tangier diseaseTangier diseaseABCA4 (ABCR)ABCA4 (ABCR) Stargardt syndromeStargardt syndrome andand Age rel. macular dystrophyAge rel. macular dystrophyABCA3ABCA3 Fatal surfactant deficiencyFatal surfactant deficiencyABCA12ABCA12 Lamellar ichthyosis type 2Lamellar ichthyosis type 2 andand Harlequin ichthyosisHarlequin ichthyosisABCB1(MDR1,Pgp)ABCB1(MDR1,Pgp) Multidrug resistance in cancerMultidrug resistance in cancerABCB3 (TAP2)ABCB3 (TAP2) HLA class I deficiencyHLA class I deficiencyABCB4 (MDR3)ABCB4 (MDR3) Progressive intrahepatic cholestasis type 3Progressive intrahepatic cholestasis type 3ABCB7ABCB7 X-linked sideroblastic anemia and ataxiaX-linked sideroblastic anemia and ataxiaABCB11 (sPgP)ABCB11 (sPgP) Progressive intrahepatic cholestasis type 2Progressive intrahepatic cholestasis type 2ABCC1 (MRP1)ABCC1 (MRP1) Multidrug resistance in cancerMultidrug resistance in cancerABCC2 (MRP2)ABCC2 (MRP2) Dubin-Johnson syndromeDubin-Johnson syndromeABCC6 (MRP6)ABCC6 (MRP6) Pseudoxanthoma elasticumPseudoxanthoma elasticumABCC7 (CFTR)ABCC7 (CFTR) Cystic fibrosisCystic fibrosisABCC8 (SUR1)ABCC8 (SUR1) Persistent hyperinsulinemic hypoglycemiaPersistent hyperinsulinemic hypoglycemiaABCC9 (SUR2)ABCC9 (SUR2) Idiopathic dilated cardiomyopathyIdiopathic dilated cardiomyopathyABCC11 (MRP8)ABCC11 (MRP8) Earwax typeEarwax typeABCD1 (ALD)ABCD1 (ALD) AdrenoleukodystrophyAdrenoleukodystrophyABCG2 (MXR/BCRP)ABCG2 (MXR/BCRP) Multidrug resistance in cancerMultidrug resistance in cancerABCG5 and G8ABCG5 and G8 SitosterolemiaSitosterolemia andand Mediterranean stomatocytosis/macrothrombocytopenia
  4. 4. ABCC6Organikus anion transzporterPlazmamembránban helyezkedik elMájban, vesében expresszálódikPlazmamembrán
  5. 5. Organikus anion transzporterPlazmamembránban helyezkedik elMájban, vesében expresszálódikMutációk → PXE (Pseudoxanthoma elasticum)→ GACI (Generalized Arterial Calcification of Infancy)→ Rizikófaktor szívkoszorúér megbetegedésbenABCC6Plazmamembrán
  6. 6. Organikus anion transzporterPlazmamembránban helyezkedik elMájban, vesében expresszálódikMutációk → PXE – közepesen súlyos→ GACI – nagyon súlyos / halálosABCC6PXE GACI(Abcc6-/-mice: Gorgel et al 2005;Klement et al, 2005)Rutsch F et al. Circ Cardiovasc Genet 2008;1:133-140
  7. 7. Metabolikus betegségABCC6PXE és GACI
  8. 8. • Megérteni, hogyan vezet egy adott mutáció a betegség kialakulásáhozCélkitűzésekPlazmamembrán• Olyan betegséget okozó misszensz mutánsok azonosítása, amelyekmegőrizték transzport aktivitásukat, de hibás sejten belüli lokalizációtmutatnak• Ezen mutánsok hibás lokalizációjának farmakológiai korrekciója• “Meggyógyított” mutánsok tesztelése in vivo rendszerben (egér)
  9. 9. ABCC6 mutációk(betegek)Transzportfunkció méréseinaktívaktívSejten belüli lokalizációvizsgálataSejtmembrán (✔)Sejten belül (✖)“gyógyszeres”kezelésSejtmembránba jut(“megjavul”)Nincs hatásIn vivofunkcionálisellenőrzésIdeális jelölt gyógyszereskezelésreMunkaterv
  10. 10. ABCC6 mutációk(betegek)Transzportfunkció méréseinaktívaktívSejten belüli lokalizációvizsgálataSejtmembrán (✔)Sejten belül (✖)“gyógyszeres”kezelésSejtmembránba jut(“megjavul”)Nincs hatásIn vivofunkcionálisellenőrzésIdeális jelölt gyógyszereskezelésreABCC6 transzport aktivitás
  11. 11. ABCC6 mutációk(betegek)Transzportfunkció méréseinaktívaktívSejten belülilokalizáció vizsgálataSejtmembrán (✔)Sejten belül (✖)“gyógyszeres”kezelésSejtmembránba jut(“megjavul”)NincshatásIn vivofunkcionálisellenőrzésIdeális jelölt gyógyszereskezelésreABCC6 lokalizációSejten belüli lokalizációPiros:Sejtmembrán(NaK-ATPase)Zöld:ABCC6Sejtvonal + humán fehérje
  12. 12. ABCC6 mutációk(betegek)Transzportfunkció méréseinaktívaktívSejten belülilokalizáció vizsgálataSejtmembrán (✔)Sejten belül (✖)“gyógyszeres”kezelésSejtmembránba jut(“megjavul”)NincshatásIn vivofunkcionálisellenőrzésIdeális jelölt gyógyszereskezelésreABCC6 hibás lokalizáció kijavíásaGyógyszeres kezelés4-phenylbutyrate (4-PBA)• FDA által jóváhagyott, az urea-ciklus megbetegedéseibenrutinszerűen használt gyógyszer• CFTR (ABCC7)  cisztikus fibrózis∆F508 mutáns érésének segítése sejvonalakon + klinikai kipróbálás
  13. 13. A 4PBA kezelés hatásaABCC6 wt- 4PBA + 4PBAABCC6R1314WPiros:Sejtmembrán(NaK-ATPase)Zöld:ABCC6
  14. 14. A 4PBA kezelés hatásaABCC6 wt- 4PBA + 4PBAABCC6R1314WPiros:Sejtmembrán(NaK-ATPase)Zöld:ABCC6
  15. 15. A 4PBA kezelés hatásaR1114PQ1347HPiros:Sejtmembrán(NaK-ATPase)Zöld:ABCC6- 4PBA + 4PBAT1301I
  16. 16. In vitroSejtvonalIn vivoEgér máj+ 4PBAEredmények ellenőrzése egérben- 4PBA
  17. 17. ABCC6 mutációk(betegek)Transzportfunkció méréseinaktívaktívSejten belüli lokalizációvizsgálataSejtmembrán (✔)Sejten belül (✖)“gyógyszeres”kezelésSejtmembránba jut(“megjavul”)Nincs hatásIn vivofunkcionálisellenőrzésIdeális jelölt gyógyszereskezelésreIn vivo funkcionális teszt kidolgozásaABCC6 működésével összefüggő biomarkerKálcium lerakódás a lágy szövetekben(valami gyorsabb kéne…)
  18. 18. Kalcifikáció kiváltása Abcc6-hiányos egerekbenC3H/He, Abcc6 KOSzívizom kis területének fagyasztása4 nap múlva a a szív kivétele,Lerakódott kálcium meghatározása
  19. 19. C3H/He, Abcc6 KOSzívizom kis területének fagyasztása4 nap múlva a a szív kivétele,Lerakódott kálcium meghatározásaKalcifikáció kiváltása Abcc6-hiányos egerekben
  20. 20. Kalcifikálódott terület lemetszéseKálcium lerakódás kvantitatív meghatározásaKalcifikáció kiváltása Abcc6-hiányos egerekben
  21. 21. Hogyan használható ez a modell az ABCC6 működés tesztelésére?“Normál” egér nincs kalcifikációKO egér  kalcifikációKO egér + ABCC6 (farokvénán keresztül)  csökkenti a kalcifikációt??1. lépés: wt ABCC6 expressziója KO egérbenszív fagyasztásakálcium lerakódás megméréseAz ABCC6 képescsökkenteni a kálciumlerakódást!!!(77%!)n=4 n=4 n=7
  22. 22. 2. lépés: mutáns ABCC6 expressziója KO egérben(Nem számítunk a kalcifikáció csökkenésére)3. lépés: mutáns ABCC6 expressziója KO egérben + 4PBA kezelésCsökkent kalcifikáció ?További tervek
  23. 23. Összefoglalás• ABCC6 fehérje (wt és mutánsok) expressziója sejtvonalakban• ABCC6 fehérje (wt és mutánsok) expressziója egér májban in vivo A módszer alkalmaslkalmas más máj-fehérjék vizsgálatára is• Kalcifikációs in vivo modell kidolgozása Betegséget okozó mutációk funkcionális vizsgálata Potenciális gyógyszerek tesztelése
  24. 24. KöszönetnyílvánításVáradi AndrásFülöp KrisztiIliás AttilaSzabó ZalánDemeter GyörgyiGyergyák HellaTőkési NatáliaSzakács GergelySarkadi BalázsHomolya LászlóOlivier Le SauxYukiko YamaguichiChristopher N. BramptonPaku SándorKöszönöm a figyelmet!MTA TTK Enzimológiai IntézetUniversity of HawaiiNIH R01AR055225 USA, PXE International USA, OTKA CK 80135, OTKA NK 81204SE I. Sz. Patológiai IntézetKorányi Intézet, Tumorbiológiai OsztályTóvári JózsefDöme BalázsCserepes Mihály

×