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Diagnóstico Laboratorial VIH

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Diagnostico Laboratorial Vih Colegio Medico Pando

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Transcript

  • 1. VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (V.I.H.) DIAGNOSTICO LABORATORIAL
  • 2. PRUEBAS LABORATORIALES
    • Diagnóstico de la Infección del VIH
      • Screening (tamizaje)
      • Confirmatorio
    • Pruebas complementarias para el seguimiento de paciente con la infección
      • Recuento de de Linfocitos CD4/CD8
      • Carga Viral
    • Pruebas de Rutina
      • Hemograma
      • Orina
      • Baciloscopia
      • Parasitológico
      • Otros
    leucopenia linfopenia trombocitopenia VSG elevada
  • 3. DIAGNOSTICO DE LA INFECCION POR EL VIH
  • 4. METODOS
    • METODOS DIRECTOS
    • - Aislamiento viral: Cultivo viral H9
    • - PCR : Detección de fracciones antigénicas
    • del virus ó genoma viral
    • METODOS INDIRECTOS
    • - Detectan la presencia de anticuerpos específicos contra el VIH por medio de técnicas serológicas.
    • * TEST RAPIDOS * IFI * ELISA
    • * WESTERN BLOT * LIA
    La técnica mas utilizada actualmente para el screening serológico es el test de ELISA y en menor proporción los Test Rápidos (OMS)
  • 5. TAMIZAJE SEROLOGICO ELISA Negativo Positivo/Indeterminado Repetidamente Correr una nueva muestra Repetidamente POSITIVO Etapa (1) WESTERN BLOT Negativo Indeterminado Positivo Correr una nueva muestra 30 a 60 días después Repetir etapas 1 y 2 Etapa (2)
  • 6. TEST VENTAJAS DESVENTAJAS PRUEBAS RAPIDAS Buena sensibilidad Económicas y rápidas Baja Especificidad CULTIVOS VIRALES Buena especificidad Lentas, baja sensibilidad Complicado. Costo ELISA Buena Sensibilidad y Especificidad Sencillo y rápido Periodo de Ventana Costo WESTERN BLOT Confirmatorio, alta Sensibilidad y Especificidad. Seguro Elevado Costo Contaminación Especificidad Costo Genotipificación Periodo de Ventana PCR
  • 7. PRUEBA RAPIDA PARA VIH (INMUNOCROMATOGRAFIA) Gaby Fabiola Mamani V. BIOQUIMICA
  • 8. PRUEBA RAPIDA PARA VIH (INMUNOCROMATOGRAFIA)
    • Objetivo
    • “ Detectar anticuerpos anti-VIH ½ y no componentes virales ”
      • Fundamento
      • - Método cualitativo indirecto basado en el principio de adsorción selectiva de inmunoglobulinas.
  • 9. Prueba rápida para VIH
  • 10. Prueba rápida para VIH
  • 11. Prueba rápida para VIH
  • 12. Prueba rápida para VIH 8. Coloque la muestra de sangre completa colectada en el capilar en la superficie absorbente, y espere un minuto
  • 13. Prueba in Vitro Tarjetas de ensayo recubiertas de antígeno recombinante del VIH 1 y VIH 2 y de péptidos sintéticos. Laboratorios Abbott
  • 14.  
  • 15. ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA)
  • 16. TEST DE ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA)
    • Objetivo
    • “ Detectar anticuerpos anti-VIH ½ y no componentes virales ”
      • Fundamento
      • - Método enzimático, cualitativo indirecto basado en el principio de “Sandwich” en un solo paso
  • 17. FUNDAMENTO H 2 SO 4 Antígenos VIH1/2 Anticuerpos Suero o Plasma Conjugado Antígenos HIV1/2 marcado con Enzima HPR Sustrato (Sustrato Enzimático + Cromógeno)
  • 18. PLACA DE ELISA POSITIVO Presencia de anticuerpos HIV 1/2 (color amarillo) NEGATIVO Ausencia de Anticuerpos para VIH1/2 (Sin color)
  • 19. L E C T O R D E E L I S A Lectura de la reacción final Se lee a 450/630 nm
  • 20. INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA CALCULOS (Organón Teknika)
    • Validación del Test
    • * CN < 0.250 (Control Negativo)
    • * CP1 - CNx > 0.400 (Control Positivo)
    • * El CP2 - CNx > 0.400
    • * El Cutt Off = CNx + 0.100 = valor “x”
    • Valores mayores al Cutt Off, son Positivos
    • Valores menores al Cutt Off, son Negativos
    • Valores +/- 10% del Cutt Off, Indeterminados
  • 21. WESTERN BLOT (TEST CONFIRMATORIO)
  • 22. TEST DE WESTERN BLOT
    • Objetivo - Detectar anticuerpos específicos contra el VIH1/2
    • Fundamento
      • Test Inmunolineal o ELISA en banda, que detecta anticuerpos
      • Lisado viral de células infectadas, sometidos a electroforésis en gel de poliacrilamida y transferido a hojas de nitrocelulosa
  • 23.
    • POSITIVO
      • Si dos bandas presentan intensidad >1+ en relación al control ,
      • Una banda de envoltura y la p24
      • Presencia de bandas gp120, gp41, p31, p24 y p17 para HIV1
      • Proteínas gp105 y gp36 para HIV2
    Criterios de interpretación gp120 gp41 p31 p24 p17 3+ 1+ +/- Control gp105 gp36
  • 24.
    • INDETERMINADO
      • Si dos o mas bandas presentan intensidad +/-
      • Si una banda presente intensidad <1+ y el resto son negativos en relación al control
    Criterios de interpretación Gp120 p24
      • NEGATIVO
        • Si todas las bandas presentan valoración <+/-
        • Ausencia de proteínas
    3+ 1+ +/- Control 3+ 1+ +/- Control
  • 25. PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PARA EL SEGUIMIENTO DE PACIENTES POSITIVOS
  • 26. PRUEBAS COMPLEMENTARIAS
    • Test para el seguimiento de pacientes VIH Positivos
      • Recuento de Linfocitos CD4/CD8
      • Carga Viral
  • 27. RECUENTO DE LINFOCITOS CD4/CD8
    • Citometría de flujo
      • Tamaño celular
      • Complejidad interna o gránulos internos
      • Intensidad relativa de la Fluorescencia
    • ELISA (Enzimoinmunoensayo)
    • Inmunofluorescencia (IFI)
  • 28. CITOMETRO DE FLUJO EPICS XL PECKMAN COULTER
  • 29. Fundamento del Citómetro de Flujo
  • 30.
    • El Recuento de CD4/CD8, tiene como finalidad de evaluar el estado inmunológico de la persona infectada
    • Valores de referencia:
      • Células CD4+ varían entre 600 a 1500 células por mm3 de sangre
      • Células CD8+ varia entre 300 a 800 células por mm3 de sangre
      • Relación de células CD4+ vs. CD8+ es de 2:1
    PARAMETROS DEL RECUENTO DE CELULAS CD4/CD8
  • 31.
      • Superiores a 500 celulas CD4+ (Buen estado de salud)
      • Entre 200 y 500 celulas CD4+
        • Incrementa riesgo de Herpes, Aftas, Infecciones en piel, Infecciones pulmonares, TB
        • Enfermedades Oportunistas Pneumonia por Pneumocistis Carini, Citomegalovirus
      • Entre 50 y 200 células CD4+
        • Se incrementa el riesgo por PCP y otras enfermedades oportunistas
        • Se recomienda ya el tratamiento preventivo
        • Inferiores a 100, considerar el tratamiento preventivo para enfermedades oportunistas e infecciones masivas por hongos.
      • Inferiores a 50 células CD4+
        • Se incrementa riesgo de enfermedades oportunistas
        • Continuar con terapias preventivas
    VALORES ABSOLUTOS
  • 32. CARGA VIRAL
  • 33. DETECCIÓN DE RNA VIRAL
    • AMPLICOR HIV MONITOR TM Test
    • (Roche Diagnostic Systems)
    • Quantiplex TM HIV RNA Assay
    • (Chiron Corporation)
    • NASBA HIV-1 RNA QT
    • (Organon Teknika)
    CARGA VIRAL
  • 34.
    • La carga viral nos indica la actividad del virus
    • Herramientas
      • Niveles de RNA Viral
      • Nivel de riesgo del desarrollo de la enfermedad
      • Reacción a la terapia antirretroviral:
        • Iniciar, modificar o incrementar medicamentos
      • Si la droga o medicamento esta dando o no resultado y cuando empieza a perder su efectividad
    CARGA VIRAL
  • 35.
    • Muestra de sangre (plasma sanguíneo)
    • Múltiples copias del virus presente en la muestra
    • Proceso matemático se da el número estimado de las partículas virales presentes en la muestra (200 –1.000.000 copias/ml)
    • Margen de error del 20%
    • Utilizar el mismo laboratorio y examen para el seguimiento y los cambios de la carga viral
    CARGA VIRAL
  • 36.
    • Los niveles altos de RNA Viral se correlacionan con bajos recuentos de Linfocitos CD4+
    • Niveles superiores a 100.000 copias/ml propensas a desarrollar la enfermedad SIDA
    • Niveles inferiores a 10.000 copias/ml disminuye el riesgo a la enfermedad
    CARGA VIRAL
  • 37. CARGA VIRAL 2000 ul 1000 ul 200 ul Volumen de plasma 240 400 200 Nivel de detección mínimo (Sensibilidad copias/ml) 500-800.000 400-10.000.000 200-750.000 Rango de detección QUANTIPLEX HIV-1 RNA NASBA HIV-1 RNA QT Amplificación isotérmica de RNA AMPLICOR (Roche) RT-PCR METODO
  • 38.
    • DIAGNOSTICO
    • PEDIATRICO
  • 39.
    • La presencia de IgG materna en el recién nacido dificulta el diagnóstico.
    • Seguimiento durante 15 a 18 meses con WB en forma seriada.
    • Detección de antígeno, aislamiento viral y la PCR son de utilida, pero debe ser evaluado con:
      • Clínico
      • Inmunológico
  • 40. Factores que pueden influir en los resultados:
      • Laboratorio
      • Reactivos
      • Tiempo de procesamiento
      • Horario de la toma de muestra
      • Presencia de infecciones
      • Falta de sueño
      • Estrés
      • Otros factores biológicos
  • 41.
    • Para el diagnóstico de la Infección por el VIH
      • PRUEBA RAPIDA, nos permite realizar el tamizaje serológico, mediante la detección de anticuerpos Anti -VIH1/2, con buena sensibilidad.
      • ELISA, nos permite detectar los anticuerpos Anti-VIH1/2, con una alta sensibilidad y especificidad
      • Es importante realizar el Test Confirmatorio de Western Blot, para dar un resultado final
    CONCLUSIONES
  • 42.
    • Para el seguimiento de pacientes con la infección, es importante:
      • El Recuento de Linfocitos CD4/CD8, debe ir paralelo a la prueba Carga Viral
      • Evaluar el estado clínico del paciente
    • Realizar seguimiento al paciente VIH positivo, en coordinación de:
      • Médico-Clínico,
      • Laboratorio y
      • Consejería
      • Adherencia permanente
    CONCLUSIONES
  • 43. PREVENCIÓN
    • Promoción a todo nivel social del uso del preservativo
    • Tratamiento y prevención de otras enfermedades de transmisión sexual
    • Programa de reparto de jeringas para drogadictos
  • 44. BIOSEGURIDAD
    • TODO MATERIAL BIOLOGICO DEBE SER CONSIDERADO Y MANIPULADO COMO POTENCIALMENTE INFECCIOSO
  • 45. Gracias