VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA  (V.I.H.) DIAGNOSTICO LABORATORIAL
PRUEBAS LABORATORIALES <ul><li>Diagnóstico  de la Infección del VIH </li></ul><ul><ul><li>Screening (tamizaje) </li></ul><...
DIAGNOSTICO DE LA INFECCION POR EL VIH
METODOS <ul><li>METODOS DIRECTOS </li></ul><ul><li>-  Aislamiento viral:  Cultivo viral H9 </li></ul><ul><li>- PCR : Detec...
TAMIZAJE SEROLOGICO ELISA Negativo  Positivo/Indeterminado Repetidamente Correr una nueva muestra Repetidamente POSITIVO E...
TEST  VENTAJAS  DESVENTAJAS PRUEBAS RAPIDAS Buena sensibilidad Económicas y rápidas Baja  Especificidad CULTIVOS  VIRALES ...
PRUEBA RAPIDA PARA VIH (INMUNOCROMATOGRAFIA) Gaby Fabiola Mamani V. BIOQUIMICA
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Prueba rápida para VIH
Prueba rápida para VIH
Prueba rápida para VIH
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ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA)
TEST DE ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA) <ul><li>Objetivo </li></ul><ul><li>“  Detectar anticuerpos anti-VIH ½  y  no  component...
FUNDAMENTO  H 2 SO 4 Antígenos VIH1/2 Anticuerpos Suero o Plasma Conjugado Antígenos HIV1/2 marcado con Enzima HPR Sustrat...
PLACA  DE  ELISA POSITIVO Presencia de anticuerpos HIV 1/2 (color amarillo) NEGATIVO Ausencia de Anticuerpos  para VIH1/2 ...
L   E C  T  O R  D E       E   L   I   S   A Lectura de la reacción final Se lee a 450/630 nm
INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA CALCULOS  (Organón Teknika) <ul><li>Validación del Test </li></ul><ul><li>* CN  <   0.250  (Co...
WESTERN BLOT (TEST CONFIRMATORIO)
TEST DE WESTERN BLOT <ul><li>Objetivo - Detectar anticuerpos específicos contra el VIH1/2 </li></ul><ul><li>Fundamento </l...
<ul><li>POSITIVO </li></ul><ul><ul><li>Si dos bandas presentan intensidad >1+ en relación al control ,  </li></ul></ul><ul...
<ul><li>INDETERMINADO </li></ul><ul><ul><li>Si dos o mas bandas presentan intensidad +/- </li></ul></ul><ul><ul><li>Si una...
PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PARA EL SEGUIMIENTO DE PACIENTES POSITIVOS
PRUEBAS COMPLEMENTARIAS <ul><li>Test para el seguimiento de pacientes VIH Positivos </li></ul><ul><ul><li>Recuento de Linf...
RECUENTO DE LINFOCITOS CD4/CD8 <ul><li>Citometría  de flujo </li></ul><ul><ul><li>Tamaño celular  </li></ul></ul><ul><ul><...
CITOMETRO DE FLUJO   EPICS XL  PECKMAN COULTER
Fundamento del Citómetro de Flujo
<ul><li>El Recuento de CD4/CD8,  tiene como finalidad de evaluar el estado inmunológico de la persona infectada </li></ul>...
<ul><ul><li>Superiores a 500 celulas CD4+ (Buen estado de salud) </li></ul></ul><ul><ul><li>Entre 200 y 500 celulas CD4+ <...
CARGA VIRAL
DETECCIÓN  DE RNA VIRAL <ul><li>AMPLICOR HIV MONITOR TM  Test </li></ul><ul><li>  (Roche Diagnostic Systems) </li></ul><ul...
<ul><li>La carga viral  nos indica la actividad del virus  </li></ul><ul><li>Herramientas </li></ul><ul><ul><li>Niveles de...
<ul><li>Muestra de sangre (plasma sanguíneo) </li></ul><ul><li>Múltiples copias del virus presente en la muestra </li></ul...
<ul><li>Los niveles altos de RNA Viral se correlacionan con bajos recuentos de Linfocitos CD4+ </li></ul><ul><li>Niveles s...
CARGA VIRAL 2000 ul  1000 ul 200 ul Volumen de plasma 240 400 200 Nivel de detección mínimo (Sensibilidad copias/ml) 500-8...
<ul><li>DIAGNOSTICO </li></ul><ul><li>PEDIATRICO </li></ul>
<ul><li>La presencia de IgG materna en el recién nacido dificulta el diagnóstico. </li></ul><ul><li>Seguimiento durante 15...
Factores que pueden influir en los resultados: <ul><ul><li>Laboratorio </li></ul></ul><ul><ul><li>Reactivos </li></ul></ul...
<ul><li>Para el diagnóstico de la Infección por el VIH </li></ul><ul><ul><li>PRUEBA RAPIDA, nos permite realizar el tamiza...
<ul><li>Para el seguimiento de pacientes con la infección, es importante: </li></ul><ul><ul><li>El Recuento de Linfocitos ...
PREVENCIÓN <ul><li>Promoción a todo nivel social del uso del preservativo </li></ul><ul><li>Tratamiento y prevención de ot...
BIOSEGURIDAD <ul><li>TODO MATERIAL BIOLOGICO DEBE SER CONSIDERADO Y MANIPULADO COMO POTENCIALMENTE INFECCIOSO </li></ul>
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Diagnóstico Laboratorial VIH

  1. 1. VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (V.I.H.) DIAGNOSTICO LABORATORIAL
  2. 2. PRUEBAS LABORATORIALES <ul><li>Diagnóstico de la Infección del VIH </li></ul><ul><ul><li>Screening (tamizaje) </li></ul></ul><ul><ul><li>Confirmatorio </li></ul></ul><ul><li>Pruebas complementarias para el seguimiento de paciente con la infección </li></ul><ul><ul><li>Recuento de de Linfocitos CD4/CD8 </li></ul></ul><ul><ul><li>Carga Viral </li></ul></ul><ul><li>Pruebas de Rutina </li></ul><ul><ul><li>Hemograma </li></ul></ul><ul><ul><li>Orina </li></ul></ul><ul><ul><li>Baciloscopia </li></ul></ul><ul><ul><li>Parasitológico </li></ul></ul><ul><ul><li>Otros </li></ul></ul>leucopenia linfopenia trombocitopenia VSG elevada
  3. 3. DIAGNOSTICO DE LA INFECCION POR EL VIH
  4. 4. METODOS <ul><li>METODOS DIRECTOS </li></ul><ul><li>- Aislamiento viral: Cultivo viral H9 </li></ul><ul><li>- PCR : Detección de fracciones antigénicas </li></ul><ul><li>del virus ó genoma viral </li></ul><ul><li>METODOS INDIRECTOS </li></ul><ul><li>- Detectan la presencia de anticuerpos específicos contra el VIH por medio de técnicas serológicas. </li></ul><ul><li>* TEST RAPIDOS * IFI * ELISA </li></ul><ul><li>* WESTERN BLOT * LIA </li></ul>La técnica mas utilizada actualmente para el screening serológico es el test de ELISA y en menor proporción los Test Rápidos (OMS)
  5. 5. TAMIZAJE SEROLOGICO ELISA Negativo Positivo/Indeterminado Repetidamente Correr una nueva muestra Repetidamente POSITIVO Etapa (1) WESTERN BLOT Negativo Indeterminado Positivo Correr una nueva muestra 30 a 60 días después Repetir etapas 1 y 2 Etapa (2)
  6. 6. TEST VENTAJAS DESVENTAJAS PRUEBAS RAPIDAS Buena sensibilidad Económicas y rápidas Baja Especificidad CULTIVOS VIRALES Buena especificidad Lentas, baja sensibilidad Complicado. Costo ELISA Buena Sensibilidad y Especificidad Sencillo y rápido Periodo de Ventana Costo WESTERN BLOT Confirmatorio, alta Sensibilidad y Especificidad. Seguro Elevado Costo Contaminación Especificidad Costo Genotipificación Periodo de Ventana PCR
  7. 7. PRUEBA RAPIDA PARA VIH (INMUNOCROMATOGRAFIA) Gaby Fabiola Mamani V. BIOQUIMICA
  8. 8. PRUEBA RAPIDA PARA VIH (INMUNOCROMATOGRAFIA) <ul><li>Objetivo </li></ul><ul><li>“ Detectar anticuerpos anti-VIH ½ y no componentes virales ” </li></ul><ul><ul><li>Fundamento </li></ul></ul><ul><ul><li>- Método cualitativo indirecto basado en el principio de adsorción selectiva de inmunoglobulinas. </li></ul></ul>
  9. 9. Prueba rápida para VIH
  10. 10. Prueba rápida para VIH
  11. 11. Prueba rápida para VIH
  12. 12. Prueba rápida para VIH 8. Coloque la muestra de sangre completa colectada en el capilar en la superficie absorbente, y espere un minuto
  13. 13. Prueba in Vitro Tarjetas de ensayo recubiertas de antígeno recombinante del VIH 1 y VIH 2 y de péptidos sintéticos. Laboratorios Abbott
  14. 15. ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA)
  15. 16. TEST DE ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA) <ul><li>Objetivo </li></ul><ul><li>“ Detectar anticuerpos anti-VIH ½ y no componentes virales ” </li></ul><ul><ul><li>Fundamento </li></ul></ul><ul><ul><li>- Método enzimático, cualitativo indirecto basado en el principio de “Sandwich” en un solo paso </li></ul></ul>
  16. 17. FUNDAMENTO H 2 SO 4 Antígenos VIH1/2 Anticuerpos Suero o Plasma Conjugado Antígenos HIV1/2 marcado con Enzima HPR Sustrato (Sustrato Enzimático + Cromógeno)
  17. 18. PLACA DE ELISA POSITIVO Presencia de anticuerpos HIV 1/2 (color amarillo) NEGATIVO Ausencia de Anticuerpos para VIH1/2 (Sin color)
  18. 19. L E C T O R D E E L I S A Lectura de la reacción final Se lee a 450/630 nm
  19. 20. INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA CALCULOS (Organón Teknika) <ul><li>Validación del Test </li></ul><ul><li>* CN < 0.250 (Control Negativo) </li></ul><ul><li>* CP1 - CNx > 0.400 (Control Positivo) </li></ul><ul><li>* El CP2 - CNx > 0.400 </li></ul><ul><li>* El Cutt Off = CNx + 0.100 = valor “x” </li></ul><ul><li>Valores mayores al Cutt Off, son Positivos </li></ul><ul><li>Valores menores al Cutt Off, son Negativos </li></ul><ul><li>Valores +/- 10% del Cutt Off, Indeterminados </li></ul>
  20. 21. WESTERN BLOT (TEST CONFIRMATORIO)
  21. 22. TEST DE WESTERN BLOT <ul><li>Objetivo - Detectar anticuerpos específicos contra el VIH1/2 </li></ul><ul><li>Fundamento </li></ul><ul><ul><li>Test Inmunolineal o ELISA en banda, que detecta anticuerpos </li></ul></ul><ul><ul><li>Lisado viral de células infectadas, sometidos a electroforésis en gel de poliacrilamida y transferido a hojas de nitrocelulosa </li></ul></ul>
  22. 23. <ul><li>POSITIVO </li></ul><ul><ul><li>Si dos bandas presentan intensidad >1+ en relación al control , </li></ul></ul><ul><ul><li>Una banda de envoltura y la p24 </li></ul></ul><ul><ul><li>Presencia de bandas gp120, gp41, p31, p24 y p17 para HIV1 </li></ul></ul><ul><ul><li>Proteínas gp105 y gp36 para HIV2 </li></ul></ul>Criterios de interpretación gp120 gp41 p31 p24 p17 3+ 1+ +/- Control gp105 gp36
  23. 24. <ul><li>INDETERMINADO </li></ul><ul><ul><li>Si dos o mas bandas presentan intensidad +/- </li></ul></ul><ul><ul><li>Si una banda presente intensidad <1+ y el resto son negativos en relación al control </li></ul></ul>Criterios de interpretación Gp120 p24 <ul><ul><li>NEGATIVO </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Si todas las bandas presentan valoración <+/- </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Ausencia de proteínas </li></ul></ul></ul>3+ 1+ +/- Control 3+ 1+ +/- Control
  24. 25. PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PARA EL SEGUIMIENTO DE PACIENTES POSITIVOS
  25. 26. PRUEBAS COMPLEMENTARIAS <ul><li>Test para el seguimiento de pacientes VIH Positivos </li></ul><ul><ul><li>Recuento de Linfocitos CD4/CD8 </li></ul></ul><ul><ul><li>Carga Viral </li></ul></ul>
  26. 27. RECUENTO DE LINFOCITOS CD4/CD8 <ul><li>Citometría de flujo </li></ul><ul><ul><li>Tamaño celular </li></ul></ul><ul><ul><li>Complejidad interna o gránulos internos </li></ul></ul><ul><ul><li>Intensidad relativa de la Fluorescencia </li></ul></ul><ul><li>ELISA (Enzimoinmunoensayo) </li></ul><ul><li>Inmunofluorescencia (IFI) </li></ul>
  27. 28. CITOMETRO DE FLUJO EPICS XL PECKMAN COULTER
  28. 29. Fundamento del Citómetro de Flujo
  29. 30. <ul><li>El Recuento de CD4/CD8, tiene como finalidad de evaluar el estado inmunológico de la persona infectada </li></ul><ul><li>Valores de referencia: </li></ul><ul><ul><li>Células CD4+ varían entre 600 a 1500 células por mm3 de sangre </li></ul></ul><ul><ul><li>Células CD8+ varia entre 300 a 800 células por mm3 de sangre </li></ul></ul><ul><ul><li>Relación de células CD4+ vs. CD8+ es de 2:1 </li></ul></ul>PARAMETROS DEL RECUENTO DE CELULAS CD4/CD8
  30. 31. <ul><ul><li>Superiores a 500 celulas CD4+ (Buen estado de salud) </li></ul></ul><ul><ul><li>Entre 200 y 500 celulas CD4+ </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Incrementa riesgo de Herpes, Aftas, Infecciones en piel, Infecciones pulmonares, TB </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Enfermedades Oportunistas Pneumonia por Pneumocistis Carini, Citomegalovirus </li></ul></ul></ul><ul><ul><li>Entre 50 y 200 células CD4+ </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Se incrementa el riesgo por PCP y otras enfermedades oportunistas </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Se recomienda ya el tratamiento preventivo </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Inferiores a 100, considerar el tratamiento preventivo para enfermedades oportunistas e infecciones masivas por hongos. </li></ul></ul></ul><ul><ul><li>Inferiores a 50 células CD4+ </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Se incrementa riesgo de enfermedades oportunistas </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Continuar con terapias preventivas </li></ul></ul></ul>VALORES ABSOLUTOS
  31. 32. CARGA VIRAL
  32. 33. DETECCIÓN DE RNA VIRAL <ul><li>AMPLICOR HIV MONITOR TM Test </li></ul><ul><li> (Roche Diagnostic Systems) </li></ul><ul><li>Quantiplex TM HIV RNA Assay </li></ul><ul><li>(Chiron Corporation) </li></ul><ul><li>NASBA HIV-1 RNA QT </li></ul><ul><li>(Organon Teknika) </li></ul>CARGA VIRAL
  33. 34. <ul><li>La carga viral nos indica la actividad del virus </li></ul><ul><li>Herramientas </li></ul><ul><ul><li>Niveles de RNA Viral </li></ul></ul><ul><ul><li>Nivel de riesgo del desarrollo de la enfermedad </li></ul></ul><ul><ul><li>Reacción a la terapia antirretroviral: </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Iniciar, modificar o incrementar medicamentos </li></ul></ul></ul><ul><ul><li>Si la droga o medicamento esta dando o no resultado y cuando empieza a perder su efectividad </li></ul></ul>CARGA VIRAL
  34. 35. <ul><li>Muestra de sangre (plasma sanguíneo) </li></ul><ul><li>Múltiples copias del virus presente en la muestra </li></ul><ul><li>Proceso matemático se da el número estimado de las partículas virales presentes en la muestra (200 –1.000.000 copias/ml) </li></ul><ul><li>Margen de error del 20% </li></ul><ul><li>Utilizar el mismo laboratorio y examen para el seguimiento y los cambios de la carga viral </li></ul>CARGA VIRAL
  35. 36. <ul><li>Los niveles altos de RNA Viral se correlacionan con bajos recuentos de Linfocitos CD4+ </li></ul><ul><li>Niveles superiores a 100.000 copias/ml propensas a desarrollar la enfermedad SIDA </li></ul><ul><li>Niveles inferiores a 10.000 copias/ml disminuye el riesgo a la enfermedad </li></ul>CARGA VIRAL
  36. 37. CARGA VIRAL 2000 ul 1000 ul 200 ul Volumen de plasma 240 400 200 Nivel de detección mínimo (Sensibilidad copias/ml) 500-800.000 400-10.000.000 200-750.000 Rango de detección QUANTIPLEX HIV-1 RNA NASBA HIV-1 RNA QT Amplificación isotérmica de RNA AMPLICOR (Roche) RT-PCR METODO
  37. 38. <ul><li>DIAGNOSTICO </li></ul><ul><li>PEDIATRICO </li></ul>
  38. 39. <ul><li>La presencia de IgG materna en el recién nacido dificulta el diagnóstico. </li></ul><ul><li>Seguimiento durante 15 a 18 meses con WB en forma seriada. </li></ul><ul><li>Detección de antígeno, aislamiento viral y la PCR son de utilida, pero debe ser evaluado con: </li></ul><ul><ul><li>Clínico </li></ul></ul><ul><ul><li>Inmunológico </li></ul></ul>
  39. 40. Factores que pueden influir en los resultados: <ul><ul><li>Laboratorio </li></ul></ul><ul><ul><li>Reactivos </li></ul></ul><ul><ul><li>Tiempo de procesamiento </li></ul></ul><ul><ul><li>Horario de la toma de muestra </li></ul></ul><ul><ul><li>Presencia de infecciones </li></ul></ul><ul><ul><li>Falta de sueño </li></ul></ul><ul><ul><li>Estrés </li></ul></ul><ul><ul><li>Otros factores biológicos </li></ul></ul>
  40. 41. <ul><li>Para el diagnóstico de la Infección por el VIH </li></ul><ul><ul><li>PRUEBA RAPIDA, nos permite realizar el tamizaje serológico, mediante la detección de anticuerpos Anti -VIH1/2, con buena sensibilidad. </li></ul></ul><ul><ul><li>ELISA, nos permite detectar los anticuerpos Anti-VIH1/2, con una alta sensibilidad y especificidad </li></ul></ul><ul><ul><li>Es importante realizar el Test Confirmatorio de Western Blot, para dar un resultado final </li></ul></ul>CONCLUSIONES
  41. 42. <ul><li>Para el seguimiento de pacientes con la infección, es importante: </li></ul><ul><ul><li>El Recuento de Linfocitos CD4/CD8, debe ir paralelo a la prueba Carga Viral </li></ul></ul><ul><ul><li>Evaluar el estado clínico del paciente </li></ul></ul><ul><li>Realizar seguimiento al paciente VIH positivo, en coordinación de: </li></ul><ul><ul><li>Médico-Clínico, </li></ul></ul><ul><ul><li>Laboratorio y </li></ul></ul><ul><ul><li>Consejería </li></ul></ul><ul><ul><li>Adherencia permanente </li></ul></ul>CONCLUSIONES
  42. 43. PREVENCIÓN <ul><li>Promoción a todo nivel social del uso del preservativo </li></ul><ul><li>Tratamiento y prevención de otras enfermedades de transmisión sexual </li></ul><ul><li>Programa de reparto de jeringas para drogadictos </li></ul>
  43. 44. BIOSEGURIDAD <ul><li>TODO MATERIAL BIOLOGICO DEBE SER CONSIDERADO Y MANIPULADO COMO POTENCIALMENTE INFECCIOSO </li></ul>
  44. 45. Gracias
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