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Revista Asebir junio 2006
 

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    Revista Asebir junio 2006 Revista Asebir junio 2006 Document Transcript

    • ASOCIACIÓN PARA EL ESTUDIO DE L A BIOLOGÍA DE L A REPRODUCCIÓN N° 1 • REVISTA ASEBIR Junio 2006 Vol. 11 III CONGRESO ASEBIR Actualidad Es Tiempo de Cambios: La Directiva Europea sobre Tejidos y Células. 17-18 Noviembre 2005 Artículos Organización y Recursos Físicos en los Laboratorios de FIV de los Centros de Reproducción Asistida: Encuesta Nacional. Nuevos Avances en el Estudio de la Integridad del DNA Espermático. Debates ¿Qué esperas de ASEBIR? Formación Continuada Cambios de Expresión del Receptor de Andrógenos con la Subfertilidad del Varón. Noticias Agenda Imágenes para el Recuerdo Boletín de Inscripción
    • Í N D I C E Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 3 ASEBIR A S O C I A C I Ó N PA R A E L E S T U D I O D E L A B I O L O G Í A D E L A R E P RO D U C C I Ó N SUMARIO Pág. Vol. 11 • N° 1 • Junio 2006 EDITORIAL 5 M.Grossmann EDITA. ACTUALIDAD Asociación para el Estudio de la Es Tiempo de Cambios: La Directiva Biología de la Reproducción (ASEBIR) Europea sobre tejidos y células 6 A. Veiga y J.A. García Velasco JUNTA DIRECTIVA. ARTÍCULOS Presidente: Antonio L. González-Utor Vicepresidenta: Carmen Ochoa Organización y recursos físicos en los laboratorios de FIV Secretaria: Begoña Arán de los centros de reproducción asistida: Encuesta Nacional 9 Tesorero: Manuel Ardoy C.González-Varea, J. Aguilar, C. Fernández, A. Garrido, M. Sánchez, Vocales: Nieves Cremades, Mark M.Hernández, S. Calderón, R. Martínez y J. A. Castilla. Grossmann, Mª Victoria Hurtado de Mendoza, Jorge Cuadros, Juan Nuevos Avances en el Estudio de la Integridad del Manuel Moreno, Mª José de los DNA Espermático 14 Santos, Fernando Marina y Jorge Ten. J. G. Álvarez. DEBATES COORDINACIÓN Introducción al debate 24 DE LA REVISTA. ¿Qué esperas de Asebir? 24 Nieves Cremades I.Solvás y M.C.Pons Mark Grossmann ¿Qué esperas de Asebir? 24 F. Marina Mª Victoria Hurtado de Mendoza ¿Qué esperas de Asebir? 28 A. Urries ¿Qué esperas de Asebir? 29 PUBLICIDAD Y COLABORACIONES. M.V. Hurtado de Mendoza, M. Grossmann y N.Cremades. ASEBIR Secretaría ASEBIR: IN MEMORIAN 31 c/ Cronos , nº 20, Bloque 4 , Local 6 J.A. Castilla MADRID 2029 FORMACIÓN CONTINUADA Tel. 91 367 89 94 - Fax 91 377 49 65 Cambios de Expresión del Receptor de Andrógenos con la Subfertilidad del Varón 32 DISEÑO, MAQUETACIÓN e IMPRESIÓN. E.D. Galo, P. González-Peramato, R. Gómez-Pérez, M.Nistal y J. Regadera RECCO Imagen y Desarrollo, S.L.L. c/ Albarracín, 56 - 28037 Madrid NOTICIAS 40 Tel. 91 754 00 26 - Fax 91 754 16 05 AGENDA 46 E-mail: recco@recco-sll.com INFORMACIÓN PARA LOS AUTORES 50 Depósito Legal: M-18873-1996 BOLETÍN DE INSCRIPCIÓN 51 ISSN: 1136-4424 Soporte Válido: 78-R-CM IMAGEN DE PORTADA: III Congreso Asebir
    • E D I T O R I A L Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 5 Josep Egozcue: in memoriam El pasado día 7 de Febrero falleció, en Barcelona, Josep Egozcue Cuixart. Quienes le conocieron “sólo” como moderador en alguna sesión científica o de divulgación seguro que recor- daran sus ojos curiosos escudriñando a través de las grandes gafas, o quizás su ironía. Quienes le conocieron “sólo” como ponente en algún curso de postgrado o seminario seguro que recordaran su racionalismo, su concisión, y su formación humanista antagónica a las súper-especializaciones actuales. Quienes le conocieron “sólo” como profesor universitario seguro que recordaran sus precisos esquemas de la resolución de los quiasmas dibujados a mano con pedazos diminutos de tiza, y su trato bondadoso. Y quienes “sólo” le tuvieron de oponente en algún debate seguro que recordaran la demoledora potencia de sus argumentos (tuvie- se o no razón). Desde que ocupó la primera cátedra de Biología Celular creada en España (1984), el profesor Egozcue supo gestar un amplio equipo de titulares e investigadores en las áreas de conocimiento de Biología Celular, Citogenética y Genética Humana. Lector incansable y acé- rrimo promotor de los enfoques multidisciplinarios, impulsó los proyectos que se le propusieron y luego “dejó hacer” sin perderse ni un detalle. Siempre dispuesto para interpretar resultados y argumentar conclusiones, en las más de 170 actuaciones como ponente o mode- rador en congresos de toda índole, infatigablemente promovió a sus discípulos. Pero para elogiar su capacidad docente, mucho más que el número de ponencias deberíamos valorar la magnitud y diversidad de las líneas de investigación abiertas en su equipo... y que en todas ellas participaba y corregía trabajos: ¿quién de entre sus pupilos no recor- dará sus correcciones? Devolvía los manuscritos con sus anotaciones en una letra minúscula escrita en líneas ligeramente ascendentes hacia la esquina derecha y plagadas de flechas que entrelazaban unas ideas con otras y podían llenar hasta el último rincón de una pági- na (que eso ocurriera dependía de la habilidad/inhabilidad de cada autor, claro). Para los que aprendimos de él y trabajamos con él... su muerte nos deja huérfanos. Huérfanos de ese genuino trato afable y siempre respetuoso; huérfanos de ese característico espíritu libre-pensador que buscaba incan- sablemente la sana controversia; huérfanos de ese elegante estilo de rigurosidad y de honestidad propio de los mejores investigadores; huérfanos de esa enorme capacidad de trabajo y animosidad que inspiraba a todos los miembros de su equipo; huérfanos, en fin, de Josep. Eminente científico y cálida persona, en el 2000 fue nombrado Ceretano del año (desde pequeño mantuvo un fuerte vínculo con las poblaciones de Puigcerdà i Llívia, La Cerdanya), a pesar de que, según cuentan las crónicas, dejó las competiciones de esquí para dedi- carse a los hobbies de coleccionar estatuillas de monos y primates e imágenes de Marilyn Monroe. Sus pasiones actuales (que compar- tía con su esposa Marta) eran el golf y sus nietos. Todos echaremos en falta su erudición y su carácter. Trayectoria profesional Doctor en Medicina y Cirugía y Catedrático emérito de Biología Celular de la Universitat Autònoma de Barcelona, inició su formación como investigador en 1965 en el Regional Primate Research Center de Beaverton (Oregon, USA). A lo largo de su dilatada carrera el profesor Egozcue fue responsable del laboratorio de citogenética del Institut Vicent Villar i Palasí (UAB) y de la Red Temática sobre Reproducción (Generalitat de Catalunya); fue miembro fundador y vicepresidente de la Asociación de Genética Humana; miembro fundador y presidente de la Sociedad Española de Andrología y de la European Society of Human Reproduction, así como promotor de la Sociedad Española de Diagnóstico Prenatal. Autor o coautor de más de 500 artículos científicos participó, como miembro editorial, de prestigiosas revistas como Andrología, Int. Journal of Andrology, Folia Primatologica, Journal of Human Evolution, Human Reporoduction, Int. Journal of Developmental Biology, Human Evolution, Medicine... Asesor de numerosas organizaciones como Ministerio de Sanidad, National Institutes of Health, UCLA, Ford Fundation, CIRIT, CAICYT, UNESCO, WHO, SEF, ANEP, CE, The Kyoto prize, EMBO, Col·legi Oficial de Metges de Barcelona, National Fonds voor Wetenschappellik Onderzoek..., recibió la Medalla Narcís Monturiol al mérito científico y tecnológico (1989); el Premio Fundació Catalana per a la Recerca (1996), la Medalla de oro del Departamento de Obstetricia y Ginecología del Intitut Universitari Dexeus (1997) y el premio a la trayectoria humana y profesional de la Asociación de Genética Humana (1999). En su última etapa profesional dedicó muchos esfuerzos a los temas de bioética. Promotor y miembro del comité científico de la Sociedad Internacional de Bioética; patrono y Vicepresidente de la fundació Víctor Grífols i Lucas y miembro del Observatorio de Bioética y Derecho de la Universitat de Barcelona, trabajó con ahínco para difundir información veraz sobre temas con posible “con- flicto” ético (investigación con embriones, selección de género, células madre...) y procuró el debate público incluso mediante premi- sas deliberadamente provocadoras. Académico numerario de la Reial Academia de Ciències i Arts de Barcelona (1999) y primer socio honorífico de ASEBIR (2001), tam- bién fue designado miembro de honor de ESHRE (2003). Mark Grossmann i Camps Junta Directiva ASEBIR
    • A C T U A L I D A D Anna Veiga et al. Es tiempo de cambios 6 ES TIEMPO DE CAMBIOS: LA DIRECTIVA EUROPEA SOBRE TEJIDOS Y CÉLULAS. Anna Veiga (1)* y Juan A. García Velasco (2)* 1 Institut Universitari Dexeus, Barcelona y 2IVI-Madrid. *Representantes españoles en la European Assisted Conception Consortium (EACC). Han transcurrido ya 30 años desde cobrar una relevancia hasta ahora en lo que respecta a la calidad y la el primer embarazo conseguido desconocida. El 31 de marzo del seguridad de los tejidos y las células, mediante FIV y obviamente son 2004, el Parlamento Europeo publicó y regularía: a) la acreditación, asigna- muchos los cambios a los que hemos una directiva sobre los estándares de ción o autorización de los centros, b) asistido. Sin duda, muchos de estos calidad y seguridad para la donación, la obtención de tejidos y células, c) cambios han estado basados bien en obtención, evaluación, procesamien- un sistema de calidad, incluyendo la el empirismo o bien en la evidencia to, congelación, almacenaje y distri- formación, d) los criterios para la científica que nos ha ido guiando en bución de tejidos y células de origen selección de donantes de tejidos y la dirección que tomaban estas modi- humano, y el plazo para su aplicación células, e) las pruebas a realizar a ficaciones en el método, las condicio- son dos años desde su publicación, es los/las donantes, f) los procedimien- nes y en definitiva, en la forma de tra- decir, Abril de 2006 (Directiva tos tanto para la obtención como para bajar. Curiosamente, al menos en 2004/23/EC del Parlamento y el con- la recepción de tejidos y células, g) nuestro país, la legislación siempre sejo de Europa de 31 de Marzo set- los procedimientos para prepararlos, ha ido por detrás en lo que a requeri- ting standards of quality and safety h) su procesamiento, almacenamien- mientos y normativas se refiere. for the donation, procurement, tes- to y distribución, y i) la asignación y ting, processing, preservation, storage distribución a los receptores de estos Desde la primera ley de reproduc- and distribution of human tissues and tejidos y/o células. ción asistida del año 1988 hasta la cells). El objetivo era establecer unos última de 2003 y actualmente vigen- criterios uniformes para todos los paí- Es interesante resaltar que la direc- te, se le ha dedicado poco o ningún ses miembros de la UE para la impor- tiva engloba por igual los criobancos espacio a los estándares requeridos tación/exportación de determinados (semen, ovocitos, tejido ovárico), los para la práctica de la reproducción tejidos (como por ejemplo, válvulas centros de inseminación artificial y asistida. La normativa vigente clara- cardíacas), la abierta disponibilidad los laboratorios de FIV. Algunos mente establece cómo debe organi- de tejidos donados, pero también evi- aspectos concretos y específicos del zarse y los controles mínimos que tar errores procedentes de múltiples y campo de la Reproducción Asistida deben realizarse en un quirófano o en variados sistemas de codificación y (RA) no fueron contemplados por la un banco de sangre, y en cambio esto clasificación. Esta directiva se aplica- Directiva, por lo que está previsto que no ocurre para un laboratorio de ría a todos los tejidos y células huma- se elaboren documentos anexos que semen, de fecundación in vitro, de nas (células madre procedentes de lo cubran de manera específica. La biopsia embrionaria o incluso para un sangre periférica, médula ósea o cor- Comisión Europea es consciente de la banco de embriones, óvulos o tejido dón umbilical, células madre adultas especificidad de nuestro ámbito de ovárico o testicular. En la actualidad, y embrionarias, células y tejidos feta- trabajo y asume la necesidad de esta- la SEF está preparando unas reco- les, y células reproductivas), exclu- blecer pautas de funcionamiento mendaciones o guías en este sentido, yéndose sangre y derivados y órganos especiales para ello. que ayuden posteriormente a los humanos. No se aplicaría a tejidos y legisladores a elaborar las normas de células usadas como autoinjertos rea- Por otra parte, cabe destacar la cre- obligado cumplimiento. lizados en el mismo acto quirúrgico - ación de un Consorcio ESHRE sin necesidad de ser almacenadas (European Society for Human A medida que nuestro país se incor- temporalmente en un banco de teji- Reproductiona and Embryology) - pora a la Unión Europea (UE), las dos-. HFEA (Human Fertilisation and directivas que legislan -o al menos Embryology Authority, UK), el aconsejan y ayudan a su implementa- Lo que pretende esta directiva es European Assisted Conception ción- en determinadas áreas como promover el mayor nivel de protección Corsortium (EACC) que pretende faci- puede ser la nuestra, empiezan a posible para asegurar la salud pública litar la implantación de la Directiva
    • A C T U A L I D A D Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 7 en los países miembros así como ase- del aire de los establecimientos de documento de requerimientos técni- sorar a la Comisión Europea en lo tejidos y células. A pesar de que las cos. referente a la Reproducción Asistida primeras propuestas eran altamente (http://www.eshre.com/emc.asp?page exigentes en cuanto a la necesidad de Los firmantes de este artículo junto Id=678). Brevemente, podríamos trabajar con calidad de aire de tipo A, con la Dra. Blanca Miranda de la decir que el principal objetivo de la este requerimiento ha sido eliminado Organización Nacional de EACC es reunir a los legisladores y a de los anexos de la Directiva. Transplantes (ONT) (autoridad com- los profesionales en Reproducción petente en España en la implementa- Asistida de la Unión Europea con el Otro de los aspectos importantes a ción de la Directiva) son los represen- fin de promover cooperación profesio- tener en cuenta es que la normativa tantes españoles en la EACC. Tanto la nal y acciones conjuntas en torno a la obliga a disponer de un sistema de Sociedad Española de Fertilidad Directiva 2003/24. Existe ya aparta- control de calidad en los estableci- (SEF) como la Asociación para el do EACC en la web de ESHRE donde mientos de tejidos y células, hasta Estudio de la Biología de la se puede obtener información. ahora no prescriptivo en los laborato- Reproducción (ASEBIR), a los que rios de Reproducción Asistida ni en mantendremos debidamente informa- Objetivos específicos: los bancos de gametos, tejido germi- dos, deben jugar un importante papel nal o embriones. en el proceso de implementación de * Promover un marco organizativo esta normativa, sobretodo a la hora de para desarrollar y presentar posturas Contrariamente a lo que se pueda proporcionar a sus asociados la infor- conjuntas a la CE en aspectos relacio- pensar, hay puntos muy positivos en mación necesaria para su correcta nados con la regulación de la RA. esta Directiva: 1) el control de calidad interpretación y cumplimiento. que gobernaría el proceso y su imple- * Compartir conocimientos durante mentación permitiría mediante la sis- la implementación de la Directiva y tematización del trabajo, la identifica- BIBLIOGRAFÍA desarrollar soluciones a los problemas ción y eliminación o minimización de que se presenten factores adversos; 2) el análisis de los Department of Health 2001. A codeof riesgos tanto para los trabajadores practice for tissue banks providing * Ayudar a mejorar la consistencia y como para los gametos y embriones y tissues of human origin for therapeu- compartir métodos de buenas practi- su adecuado manejo, permitiría un tic purposes. Department of Health, cas para promover la seguridad y la regulación mucho más eficaz que la London, 26 páginas. calidad a través de la comunicación basada en medidas arbitrarias; y 3) entre estados miembros. los riesgos y beneficios percibidos, Directive 2004/23/EC of the European tanto técnicos como biológicos, se Parliament and of the Council of 31 * Concienciar de la necesidad dee analizarían y contrastarían con los of March 2004 on setting standards mejoras continuadas en la asunción datos actuales, permitiendo un análi- of quality and safety for the donation, de los requerimientos de la Directiva sis de la calidad mucho más preciso. procurement, testing, processing, y cooperar en el desarrollo de eviden- preservation, storage, and distribution of human tissues and cells. Official cias que apoyen nuevas medidas. La Directiva, por tanto, plantea una Journal of the European Union, L necesidad y pretende resolverla garan- 102/48. * Proporcionar soporte a los estados tizando la seguridad de los tratamien- miembros mediante colaboración con tos de reproducción asistida. Es Mortimer D. A critical assessment of los organismos competentes. imprescindible que los centros de RA the impact of the European Union de nuestro país sean conscientes de Tissues and Cells Directive (2004) on * Desarrollar posiciones oficiales a los cambios que puede suponer la laboratory practices in assisted con- través de publicaciones en temas ception. RBM Online 2005; 11: 162- implementación de esta normativa en científicos, legales de regulación y a 1761 la práctica diaria. A pesar de que la nivel ético referentes al ámbito de la RA en la Directiva. fecha de cumplimiento obligatorio se había establecido en Mayo de 2007, Uno de los temas importantes que es posible que esta fecha se retrase al se trata en esta directiva es la calidad no estar listo todavía el segundo
    • A R T Í C U L O S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 9 ORGANIZACIÓN Y RECURSOS FÍSICOS EN LOS LABORATORIOS DE FIV DE LOS CENTROS DE REPRODUCCIÓN ASISTIDA: ENCUESTA NACIONAL Organization and physic resurces in IVF laboratories from assited reproduction centers: national poll Carolina González-Varea1, Jesús Aguilar2, Carmen Fernández3, Antonio Garrido4, María Sánchez4, María Hernández4, Sonia Calderón4, Rocío Martínez5, José Antonio Castilla4. 1 H.U. La Paz, Madrid. 2Clínica Avicena, Jaén; 3U. Reproducción, Clínica Santa Elena, Málaga, 4U. Reproducción, H.U. Virgen de las Nieves Granada y 5 Clínica D. Enciso, Puerto Santa María, Cádiz. RESUMEN: Con objeto de conocer cuáles son los recursos físicos y cómo se organizan los laboratorios que hacen FIV en los cen- tros de reproducción nacionales se elaboró y distribuyó una encuesta no anónima con veintiocho preguntas que versaban sobre actividad, recursos técnicos y espacios físicos. La encuesta se publicó en la revista y en la página web de ASEBIR. De los cen- tros españoles, contestaron a la encuesta 21 laboratorios, lo que supone aproximadamente un 10% de tasa de respuesta del total; de los cuales 5 (24%) tenían exclusivamente prestación pública y el resto (76%) tenían prestación privada. Los datos reco- gidos son de los ciclos realizados en el año 2003. De los laboratorios participantes, el 80-90% poseen un sistema de filtrado de aire para la incubadora, tienen un generador de energía de emergencia y usan pipetas automáticas. El 81% de los centros poseen un área diferenciada para el laboratorio de andrología del laboratorio de FIV/ICSI. En el 76,5% de los centros los labo- ratorios están próximos al lugar donde se realiza la recuperación de ovocitos. Y aproximadamente el 72% tenían zonas especí- ficas de obtención y recepción de las muestras de semen. En el 66% de los centros realizan un almacenamiento de semen y embriones en contenedores independientes. El 60% posee un sistema de filtrado de aire del laboratorio de FIV independiente. Y en el 33% se pipetea con la boca. De los 7 laboratorios (33%) que atienden a pacientes con enfermedades infecciosas trans- misibles, 4 tienen contenedores independientes para estos pacientes. El número medio de ciclos de FIV/ICSI por incubador de CO2 fue 158, por equipo de micromanipulación 274 ciclos y por cabina de flujo laminar fue 233. Los resultados comentados se comparan entre centros públicos y privados. Podemos concluir que existe una alta variación en el grado de cumplimiento de las recomendaciones de las diferentes sociedades científicas respecto a los recursos físicos de los laboratorios de Reproducción Asistida nacionales. El análisis de estos datos creemos que es el punto de partida para una adecuada planificación de los labo- ratorios de reproducción asistida. Palabras Clave: Recursos Físicos, Organización de los Laboratorios, Actividad asistencial. ABSTRACT: In order to know which are the physic resources and how IVF laboratories are organized in national reproduction cen- tres, we elaborated and distributed a non anonymous opinion poll with twenty-eight questions about activity, technical resources and physic spaces. The poll was published in ASEBIR journal and web. Twenty-one laboratories of the Spanish centres answered the poll, which means approximately a 10% of the total answering rate; A 24% had public service exclusively and the rest (76%) had private services. The collected data comes from cycles carried out in 2003. From the participating laboratories, 80-90% have an air filtration system for the incubator, an emergency energetic generator and use automatic pipettes. An 81% of the cen- tres have a differentiated area for the andrology laboratory of IVF/ICSI laboratory, and 76,5% of them are situated near the oocy- te recovery area. Approximately 72% of the centres have specific areas for reception and recollection of semen. A 66% of the centres store semen and embryos in independent containers. An independent air filtration system in IVF laboratories is posses- sed in 60% of the centres. A 33% pipettes with the mouth. Of the 7 laboratories (33%) that attends patients with infectious dise- ases, 4 have independent containers for these patients. The mean numbers of FIV/ICSI cycles by CO2 incubator was 158 cycles, by micromanipulation equipment was 274 cycles and by flow laminar cabinet 233 cycles. The discussed result are compared bet- ween public and private centres. We can conclude that there are a high variation between the grade of observance of the recom- mendations of scientific societies and the physic resources of national assisted reproduction laboratories. We believe that these data analysis is the starting point for an adequate planning of assisted reproduction laboratories. Key words: physic resources, laboratory organization, asistencial activity.
    • A R T Í C U L O S Carolina González-Varea et al. Organización de los recursos físicos.... 10 INTRODUCCIÓN nicos y espacios físicos. La encuesta (16). A las variables cualitativas se se publicitó en la revista y página les hizo un análisis estadístico básico Diferentes sociedades científicas WEB de ASEBIR. Respondieron a la obteniendo los porcentajes de cada han editado recomendaciones sobre encuesta 21 centros. Los aspectos categoría analizada; las variables de organización, seguridad y recursos sobre los cuales se solicitó informa- tipo cuantitativo fueron analizadas físicos y humanos necesarios en los ción fueron: Nombre del Centro; tipo con estadística descriptiva (media, laboratorios de reproducción humana de prestación (pública o privada); mediana, mínimo y máximo). (Núñez y Suárez, 2003; Aguilar et número de ciclos FIV/ICSI que reali- al., 2004). Recientemente, a nivel zaron en el año 2003; si atiende a RESULTADOS nacional la Asociación para el parejas con enfermedades infeccio- Estudio de la Biología de la sas transmisibles; si hay proximidad De los centros españoles, contesta- Reproducción (ASEBIR, 2006) y la entre el laboratorio de embriología y ron a la encuesta 21 laboratorios, lo Sociedad Española de Fertilidad el habitáculo donde se realiza la que supone aproximadamente un (SEF, 2006) han editado recomenda- recuperación de ovocitos, y si poseen 10% de tasa de respuesta del total ciones sobre este tema. No obstante, equipos móviles de transporte de de centros autorizados en España se han descrito grandes discrepan- ovocitos y embriones en caso de (203 centros). En cuanto al tipo de cias a la hora de aplicar las recomen- laboratorio y zona de punción aleja- prestación de los centros encuesta- daciones de sociedades científicas das; si están diferenciados el labora- dos, 5 (24%) tenían prestación en los centros de reproducción, tanto torio de FIV del laboratorio de andro- pública exclusivamente y el resto, 16 a nivel de recursos humanos logía; si utilizan sistema de análisis (76%) tenían prestación privada. (Gonzalvo et al., 2001; Núñez et al., automático de semen; si existen 2002) como en aspectos clínicos zonas específicas de obtención y En cuanto al laboratorio de (Conrad et al., 1996). recepción de las muestras de semen; Andrología comentar que el 81% de la facilidad de acceso para la limpie- los centros poseen un área diferen- A la hora de establecer las necesi- za de todo el laboratorio de embriolo- ciada para el laboratorio de androlo- dades físicas de cualquier laboratorio gía; presencia de un generador de gía del laboratorio de FIV/ICSI, sien- es fundamental conocer el volumen energía de emergencia; si utilizan do ese porcentaje superior en los de actividad con el objeto de dimen- pH-metro; conocimiento de que tipo centros públicos que en los privados sionar éste al nivel de actividad de aporte de gas reciben las incuba- (100% versus 63%, respectivamen- (Castilla et al., 2001). Por otra parte, doras y tipo de filtro; tipo de cabina te). Aproximadamente el 72% de los es fundamental tener en cuenta en de flujo laminar que hay en el labora- laboratorios participantes tienen los laboratorios de reproducción torio, y número de inspecciones; zonas específicas de obtención y determinadas peculiaridades (escasa número de contenedores de nitróge- recepción de las muestras de semen, automatización, imposibilidad de no líquido; si existen contenedores siendo ese porcentaje superior en los programación de actividad) que van a de nitrógeno líquido exclusivos para centros privados. Aproximadamente influir en su organización y necesi- semen en cuarentena, embriones y el 66% de los centros realizan un dad de recursos físicos. Todos estos pacientes con enfermedades infec- almacenamiento independiente de elementos serán claves para la ciosas transmisibles; si se utiliza semen y embriones en contenedores implantación de sistemas de calidad algún sistema de pipeteo con la boca de nitrógeno, contando con bombo- en los laboratorios de reproducción y uso de pipetas automáticas; núme- nas de cuarentena el 24% de los (Wikland and Sjöblom, 2000). ro de contenedores de nitrógeno laboratorios. De los 7 laboratorios Cualquier propuesta de planificación líquido; número de microscopios con que atienden a pacientes con enfer- de recursos físicos hace necesario un sistema de micromanipulación del medades infecciosas transmisibles, 4 análisis previo de la situación actual, laboratorio de FIV; calibraciones tienen contenedores independientes con el objeto de delimitar puntos crí- anuales de material, y existencia o no para estos pacientes (Tabla I). Sólo ticos donde centrar nuestra actua- de sistema de filtración de aire. aproximadamente un 10% posee un ción. sistema de análisis automático de Con toda esta información se pro- semen. En este trabajo presentamos los cedió a la recogida de los datos en resultados de una encuesta realizada una tabla del programa estadístico Respecto al laboratorio de a profesionales del laboratorio de Statistica 5.0 (StatSoft, Tulsa, USA), Embriología destaca que el 24% de reproducción que realizan FIV con el calculándose algunos índices como los laboratorios de embriología objeto de conocer la estructura física número medio de ciclos de FIV/ICSI encuestados están alejados del habi- y equipos de cada laboratorio. por: incubadora, cabina de flujo táculo donde se realiza la recupera- laminar, equipo de micromanipula- ción de ovocitos, teniendo todos MATERIAL Y MÉTODOS ción o bombonas de almacenamiento estos laboratorios equipos móviles de de material biológico crioconservado. transporte de ovocitos y embriones. Se diseñó una encuesta no anóni- El 80-90% de los centros poseen un ma con veintiocho preguntas que ver- Todas las variables se calcularon sistema de filtrado de aire para la saban sobre actividad, recursos téc- para centros públicos (5) y privados incubadora, tienen un generador de
    • A R T Í C U L O S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 11 TA B L A I : L A B O R AT O R I O A N D R O L O G Í A Y PA R E J A S C O N E N F E R M E D A D E S I N F E C C I O S A S T R A N S M I S I B L E S CENTROS PÚBLICOS CENTROS PRIVADOS TOTAL Están diferenciados el laboratorio 100% 62,5% 81% de FIV del laboratorio de andrología. 5/5 12/16 17/21 20% 6,3% 9,5% Sistema analizador automático de semen 1/5 1/16 2/21 Existen zonas específicas de obtención y 40% 81,3% 71,4% recepción de las muestras de semen 2/5 13/16 15/21 Existen contenedores de nitrógeno líquido 20% 25% 23,8% 1/5 4/16 5/21 exclusivos para semen en cuarentena 68,7% 66,7% Almacenamiento independiente de 60% 14/21 3/5 11/16 semen y embriones 37,5% 33,3% Atiende a parejas con enfermedades 20% 7/21 1/5 6/16 infecciosas transmisibles 50% 19% Contenedores de nitrógeno líquido exclusivos 100% 3/6 4/21 para pacientes con enfermedades 1/1 infecciosas transmisibles Ta b l a I I : A S P E C T O S O R G A N I Z AT I V O S Y D E C O N T R O L D E C A L I D A D C.PÚBLICO C. PRIVADOS TOTAL Proximidad entre el laboratorio de embriología 100% 68,8% 76,5% y el habitáculo donde se realiza la recuperación de ovocitos. 5/5 11/16 16/21 - 100% 100% Equipos móviles de transporte de ovocitos y embriones en caso de labo- 5/5 5/5 ratorio y zona de punción alejadas. Presencia de un generador de energía de emergencia. 80% 81,3% 81% 4/5 13/16 17/21 Posee pH-metro. 80% 31,3% 42,9% 4/5 5/16 9/21 Sistema de válvulas intercambiables en las bombonas de CO2 40% 75% 75% 2/5 12/16 12/16 Posee filtro de aire para la incubadora 100% 81,3% 85,7% 5/5 13/16 18/21 HORZ. HORZ. Tipo de cabina de flujo laminar 100% 56,3% (3/16) HORZ. 66,6% (14/21) AMBAS AMBAS 25% (4/16) 19,1% (4/21) Uso de pipeteo con la boca 20% 37,5% 33,3% 1/5 6/16 7/21 Uso de pipetas automáticas 100% 87,5% 90,5% 5/5 14/16 19/21 Sistema de filtración de aire 40% 68,7% 61,9% 2/5 11/16 13/21 energía de emergencia y usan pipetas cabina de flujo laminar, se observa Si consideramos las calibraciones automáticas, siendo todo lo anterior más frecuentemente cabinas de flujo de material al año obtenemos valores similar en centros públicos y privados. laminar vertical en los centros priva- medios de 1,2 calibraciones (de 0 de Un 66% de laboratorios posee un sis- dos y sistemas de filtrado de aire del mínima y 2 de máxima) en los cen- tema de válvulas intercambiables de laboratorio de FIV independiente. Y tros participantes. Y de 1,1 inspec- las bombonas de gas que reciben las en el 33% del total de laboratorios se ciones de cabina de flujo laminar por incubadoras. En cuanto al tipo de pipetea con la boca (Tabla II). año (1-2 anuales). El número medio
    • A R T Í C U L O S Carolina González-Varea et al. Organización de los recursos físicos.... 12 de sistemas para calibrar el CO2 y vidad que soportan los distintos equi- lar entre centros públicos y privados. Temperatura de los incubadores que pos del laboratorio de FIV/ICSI por Sin embargo, el número de ciclos/año poseen los centros fue de 1,2 (1 o 2 año en los distintos centros. El núme- por incubadora de CO2 y por cabina por laboratorio). ro de ciclos/año por cada equipo de de flujo fue superior en los centros micromanipulación y por cada conte- públicos que en los privados. En la Tabla III se presentan la acti- nedor de nitrógeno líquido, fue simi- Tabla III: ACTIVIAD SOPORTADA POR APARATO EN LOS LABORATOTIOS NACIONALES DE REPRODUCCIÓN CENTROS CENTROS TOTAL PÚBLICOS PRIVADOS 328 380 380 Número de ciclos FIV/ICSI (256) (320) (320) realizados en 2003 (214-537) (74-1101) (74-1101) 274 274 274 Número de ciclos por equipo de (256) (270) (256) micromanipulación (214-380) (74-500) (74-500) Número de ciclos por incubadores 189 148 158 (190) (130) (142) de CO2 (190-268,5) (37-446,5) (37-446) 290 216 233 Número de ciclos por cabina de flujo (256) (227) (235) (190-537) (74-349) (74-537) Número de ciclos por 72,1 76,7 83,5 contenedores de nitrógeno líquido (71,3) (54) (63) (63,3-85,3) (31,5-174) (31,5-174) Media (Mediana) (Mínimo-Máximo) DISCUSIÓN La participación obtenida en esta laboratorios participantes no cumplí- a los lugares de punción sea mayor en encuesta fue escasa, ya que 21 cen- an dicha recomendación. No obstan- los públicos que en los privados. Sin tros representan algo más del 10% de te, estos laboratorios poseían todos embargo, la privacidad de los pacien- los centros autorizados para FIV por el equipos móviles de transporte de tes parece mantenerse más en los Ministerio de Sanidad y Consumo. No material biológico reproductivo, tal centros privados pues solo el 40% de obstante, ha quedado reflejada per- como recomiendan distintas los centros públicos, frente al 80% fectamente el porcentaje real de cen- Sociedades Científicas (ASRM, de los privados poseía zonas específi- tros públicos frente a privados, ya que 2002; Gianaroli et al., 2000; ACE, cas de obtención y recepción de las del total de centros autorizados en 2003; FSA, 2001; CAP, 2002; ASE- muestras de semen. España el 19% pertenecen a la sani- BIR, 2006). De igual manera, un dad pública (Ministerio Sanidad y 20% de los centros no siguen la reco- El sistema de filtrado de aire en el Consumo, 2003) porcentaje similar al mendación (ASRM, 2002; Gianaroli laboratorio de reproducción es esen- de centros públicos que participaron et al., 2000; NAMSI, 2002; FSA, cial para todas las Sociedades en nuestra encuesta (24%). 2001; NFS, 2002; ASEBIR, 2006) Científicas (LARA, 1998; ASRM, A pesar de que todas las de diferenciar el laboratorio de FIV 2002; Gianaroli et al., 2000; ACE, Sociedades Científicas que han edita- del de Andrología. 2003; NAMSI, 2002; FSA, 2001; do guías sobre laboratorio de repro- CAP, 2002; NFS, 2002; ASEBIR, ducción (LARA, 1998; ASRM, 2002; Parece existir una mayor disponibi- 2006), sin embargo un 20% de los Gianaroli et al., 2000; ACE, 2003; lidad de espacio físico en los centros laboratorios participantes contestó no NAMSI, 2002; FSA, 2001; CAP, públicos que privados, como lo poseerlo, porcentaje similar al de 2002; NFS, 2002; ASEBIR, 2006) demuestra el hecho de que el porcen- laboratorios que no siguen la reco- recomiendan proximidad entre el taje de centros con laboratorio de mendación de tener generador de laboratorio de embriología y el área de andrología y embriología separados y energía de emergencia (Gianaroli et punción folicular, un 25% de los de centros con laboratorios próximos al., 2000; ACE, 2003; NAMSI,
    • A R T Í C U L O S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 13 2002; CAP, 2002; ASEBIR, 2006). tros que solo realizan inseminación in IVF laboratories. Hum Reprod El número medio de ciclos que sopor- artificial. Sería interesante conocer la 2000; 15-10:2241-46. tan cada equipo en los distintos cen- evolución de los recursos físicos en tros de reproducción no superó a lo los laboratorios de reproducción FSA, The Fertility Society of Australia recomendado por ASEBIR (2006). nacionales, en especial tras la recien- Reproductive Technology Accreditation Committee, Code of Sin embargo, el hecho de que la te edición de las recomendaciones practice for centres using assisted carga de trabajo por incubadora o para el laboratorio de reproducción de reproductive technology (RTAC). Abril cabina de flujo laminar sea un 20% ASEBIR (ASEBIR, 2006). 2002. www.fsa.au.com/rtac. mayor en los centros públicos que en los privados, sugiere, que los centros Gonzalvo MC, Vergara F, Yoldi A, Carrión privados están mejor dotados en apa- BIBLIOGRAFÍA M, Muñoz M, Castilla JA, Ramírez JP. rataje que los públicos. La influencia Organización de un laboratorio de de estas diferencias en los resultados ACE, Acreditation Standards and guide- reproducción. Aspectos legales sobre es desconocida. lines for IVF laboratories. Clinical el personal adscrito. Rev. ASEBIR pathology Accreditation (UK), 2003 2001; 2:34-36. En cuanto al cumplimiento de nor- www.ivf.net/ace/accred.htm. mas de seguridad biológica, llama la LARA, Red Latinoamericana de Aguilar J, Castilla JA, Magan R, Ortiz A, Reproducción Asistida. Manual de atención que en un tercio de los labo- González E, Ortiz-Galisteo JR, Peralta procedimientos laboratorio de repro- ratorios se pipetee con la boca, pues ducción asistida.1998. www.redla- L. Recursos físicos en el laboratorio dicha práctica es desaconsejada ra.com/esp/pec_database.asp de Reproducción Asistida. Análisis (FSA, 2002) o prohibida (CAP, 1998; Comparativo de Guidelines de ASRM, 2002; ACE, 2003) por dife- Sociedades Científicas. Rev. ASEBIR Ministerio Sanidad y Consumo, Centros rentes Sociedades Científicas. Otras 2004; 9:24-6. de Reproducción Asistida, 2003, guías sobre laboratorio de reproduc- http://www.msc.es/ciudadanos/pres- ción, si bien, no lo prohíben expresa- ASEBIR, Recomendaciones sobre taciones/centrosServiciosSNS/centro mente, recomiendan el uso del pipe- recursos humanos y físicos para el ReproHumAsist.htm teado mecánico (Gianaroli et al., laboratorio de reproducción. 2000; NFS, 2002). De igual manera, Cuadernos de Embriología Clínica. NAMSI, National Academy of Medical Ed. Asociación para el Estudio de la Sciences of India. National no parece seguirse totalmente en los Biología de la Reproducción, 2006. Guidelines for accreditation, supervi- laboratorios nacionales la recomenda- sion and regulation of ART clinics in ción realizada por diferentes socieda- India.2002. www.icmr.nic.in. ASRM, Revised minimun standards for des (Gianaroli et al., 2000; ACE, in vitro fertilization, gamete intrafa- 2003; ASRM, 2004; ASEBIR, 2006) llopian transfer, and related procedu- NFS, Nordic Fertility Society, Quality e incluida en la Directiva res. American Society of Guide. Checklist for ART clinic and 2006/17/CE de la Comisión Europea Reproductive medicine, 2002. ART laboratory, 2002 de 8 de Febrero de 2006 sobre Banco www.asrm.org. www.nordicfs.org. de tejidos de almacenar el material biológico reproductivo de parejas con ASRM, The Practice Committee of the Núñez AI, García ML, Blanco M, enfermedades infecciosas transmisi- American Society for Reproductive Fernández A, Ardoy M, Bassas L, bles en contenedores independientes, Medicine. Hepatitis and Castilla JA. Organización y recursos Reproduction. Fertil Steril 2004; humanos de los laboratorios de FIV pues de los 7 centros que atienden a 82:1754-64. de los centros del SNS. Rev. ASEBIR estas parejas solo 4 disponen de 2002; 7(1): 25-30. estas bombonas para almacenamien- CAP, College of American Pathologist . to independiente. Núñez AI, Suárez II. Seguridad en el Reproductive laboratory: proposed CAP check list 1998. www.cap.org. Laboratorio de Embriología Clínica: Desconocemos si esta encuesta es Castilla JA, Núñez AI, Suárez I, Clavero análisis comparativo de diferentes representativa de la situación real de A, García ML. “Dimensión” del labo- “guidelines” de Sociedades los laboratorios de reproducción ratorio de FIV. Boletín SEF Científicas. En Seguridad Biológica nacionales, pues pudiera ser que 2001;10:9-10. en el Laboratorio de Reproducción estuviera sesgada al existir la posibili- Asistida. Eds: Castilla JA, Magán R. dad de que los mejores laboratorios Conrad EA, Fine B, Hecht BR, Granada: Gráficas Fernando, 2003. sean los que tiendan a participar en Pergament E. Current practices of commercial cryobanks in screening SEF, Recomendaciones sobre recursos este tipo de estudios, y que laborato- prospective donors for genetic disea- humanos y físicos para el estudio y rios menos dotados participen en tratamiento de la pareja estéril. se and reproductive risk. Int J Fertil menor proporción por miedo a mos- Sociedad Española de Fertilidad, Menopausal Stud 1996; 41:298- trar sus deficiencias. Además esta 303. 2006 encuesta estaba encaminada hacia centros que hicieran FIV, descono- Gianaroli L, Plachot M, van Kooij R, Al- Wikland M, Sjöblom C. The application ciendo si alguna de las conclusiones Hasani S, Dawson K, De Vos A, et al., of quality systems in ART programs. obtenidas pueden extrapolarse a cen- ESRHE guidelines for good practice Moll Cell Endocr 2000; 166: 3-7.
    • A R T Í C U L O S Juan G. Álvarez et al. Nuevos avances en el estudio de.... 14 NUEVOS AVANCES EN EL ESTUDIO DE LA INTEGRIDAD DEL DNA ESPERMÁTICO New advances in the study of sperm nuclear DNA integrity Juan G. Álvarez. Centro de Infertilidad Masculina ANDROGEN, La Coruña. Instituto Marqués, Barcelona. Harvard Medical School, Boston, MA Resumen: La integridad del genoma paterno es de vital importancia en el inicio y mantenimiento de un embarazo a término tanto in vivo como in vitro. La presencia en el genoma del embrión de roturas en las cadenas del DNA y/o modificaciones a nivel de nucleótidos del DNA provenientes del genoma paterno, que pueden ser reparadas o no por el ovocito tras la fecundación, no es compatible con un desarrollo embrionario y fetal normal. Recientemente se ha demostrado que la fragmentación del DNA esper- mático es una causa potencial de infertilidad de causa desconocida. En esta revisión, los mecanismos responsables de frag- mentación de DNA en espermatozoides humanos, incluyendo la apoptosis en el epitelio de los túbulos seminíferos durante el proceso de espermatogénesis, defectos en el remodelado de la cromatina durante la espermiogénesis, el daño inducido por radi- cales libres (ROS) durante el transporte de los espermatozoides a través del epidídimo, la activación de caspasas y endonucle- asas espermáticas y el daño inducido por la quimio y radioterapia, serán discutidos. Además, los diferentes tipos de tests utili- zados para determinar la fragmentación del DNA espermático y sus aplicaciones al diagnóstico y tratamiento de la infertilidad, serán descritos. Por último, se plantearán preguntas frecuentemente formuladas sobre tests de fragmentación de DNA. Palabras clave: fragmentación de DNA, fecundación in vitro, radicales libres, estrés oxidativo, caspasas, endonucleasas, qui- mioterapia, radiación ionizante. Abstract: The integrity of the paternal genome is of paramount importance in the initiation and maintainance of a viable preg- nancy in vivo and in vitro. The presence in the embryonic genome of DNA strand breaks and/or modifications at the level of DNA nucleotides coming from the paternal genome, that have not been repaired by the oocyte after fertilization, is not compatible with normal embryo and fetal development. DNA fragmentation in human spermatozoa has been recently shown to be a potential cause of unexplained infertility. In this review, the mechanisms responsible for DNA fragmentation in human sperm, including apopto- sis in the seminiferous tubules epithelium, defects in chromatin remodeling during the process of spermiogenesis, and oxygen- radical (ROS)-induced DNA damage during sperm migration from the seminiferous tubules to the epididymis, the activation of sperm caspases and endonucleases and damage induced by chymo and radiotherapy, are discussed. Also the different tests used to determine DNA fragmentation in human sperm and their applications to the diagnosis and treatment of infertility, are presen- ted. Finally, answers to frequently asked questions about DNA fragmentation testing are also included. Key words: DNA fragmentation, in vitro fertilization, oxygen radicals, oxidative stress, caspases, endonucleases, chemotherapy, ionizing radiation. Introducción La integridad del genoma paterno radas por el ovocito después de la fer- to, y (ii) del grado de daño en las es de vital importancia en el inicio y tilización), es incompatible con un cadenas de DNA del espermatozoide mantenimiento de un embarazo a tér- desarrollo embrionario y fetal normal. que haya fecundado al ovocito. Dado mino tanto in vivo como in vitro. que la capacidad del ovocito de repa- Espermatozoides con DNA dañado Se estima que un 25% de las cau- rar este tipo de daño disminuye con la pueden fecundar ovocitos en metafa- sas de infertilidad masculina son de edad y que, al mismo tiempo, el nivel se II con la misma eficacia que esper- origen idiopático. La etiología de algu- de fragmentación de DNA en los matozoides con DNA intacto (Aitken nas de estas causas podría estar rela- espermatozoides aumenta, ello podría et al., 1998). Sin embargo, la presen- cionada con daño de DNA en los explicar, al menos en parte, la dismi- cia en el embrión de ciertas modifica- espermatozoides. Sin embargo, este nución significativa en la tasa de ciones a nivel de nucleótidos y/o frag- daño podría ser reparado por el ovoci- embarazo que se observa en parejas mentación en las cadenas del DNA to después de la fecundación. Esto va de edad avanzada. Este tipo de daño procedentes del complemento genó- a depender sobre todo (i) de la calidad en las cadenas de DNA podría encon- mico paterno (que no hayan sido repa- citoplasmática y genómica del ovoci- trarse en embriones con un comple-
    • A R T Í C U L O S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 15 mento cromosómico normal. Es decir, remodelado de la cromatina que tiene si se ha constatado es que cuando la presencia de daño de DNA no repa- lugar durante el proceso de espermio- existe oligospermia, la probabilidad de rado por encima de un umbral crítico génesis, (iii) fragmentación de DNA a que un espermatozoide con morfolo- en embriones generados tanto in vivo nivel post-testicular inducida por ROS gía normal sea aneuploide es mucho como in vitro, podría explicar el paro y caspasas/endonucleasas durante el mayor que si existe normozoospermia en el desarrollo embrionario que se paso de los espermatozoides a través (Burrello et al., 2004). Esto probable- produce tras la implantación de del epidídimo, (iv) fragmentación de mente esté relacionado con un blo- embriones con un cariotipo normal. DNA inducida por caspasas y endonu- queo madurativo parcial asociado a Estudios recientes sugieren que este cleases espermáticas, y (v) fragmenta- alteraciones meióticas. Por último, el tipo de daño se expresa a partir del día ción de DNA inducida por radio y qui- hecho de que un porcentaje variable 3 de desarrollo embrionario y ha sido mioterapia. De estos cinco mecanis- de espermatozoides en el eyaculado caracterizado como late paternal mos, quizás en el que juega un papel expresan marcadores apoptóticos del effects (Tesarik et al., 2004). más importante sea la fragmentación tipo de Fas, fosfatidilserina, Bcl-XL, de DNA a nivel post-testicular durante p53 (Sakkas et al., 2002) podría uti- Cabría puntualizar que el daño de el transporte de los espermatozoides a lizarse para seleccionar espermatozoi- DNA que pudiera encontrarse en el través del epidídimo. Esto viene avala- des no apoptóticos en muestras de embrión no tiene por qué estar exclu- do por estudios previos que demues- semen. Un método desarrollado sivamente relacionado con el daño de tran que la fragmentación de DNA es recientemente en esta dirección es el DNA en el espermatozoide que haya más alta en espermatozoides del epi- utilizado para separar espermatozoi- fecundado al ovocito. Este daño dídimo (Steele et al., 1999) y eyacu- des apoptóticos de espermatozoides podría provenir también del ovocito ó lados (Greco et al., 2005; Ollero et no-apoptóticos mediante el uso de las de ambos. Sin embargo, dado que (i) al., 2001) que en espermatozoides columnas de ANnexin-conjugated el análisis de fragmentación de DNA testiculares (Greco et al., 2005). MicroBeads (ANMB Microbead Kit, en gametos es destructivo, (ii) este Miltenyi Biotec, Germany). El princi- daño podría variar de un ovocito a 1. Inducción de apoptosis durante pio en el que están basadas estas otro, y (iii) el número de ovocitos es el proceso de espermatogénesis. columnas es que los espermatozoides limitado, esto no nos ha permitido Durante el proceso de espermatogéne- apoptóticos expresan fosfatidilserina estudiar hasta ahora la presencia de sis tiene lugar un screening celular en la hemicapa externa de la membra- esta patología en ovocitos. En cambio, importante que resulta en la induc- na y se unen a la anexina V. Al aplicar el uso de pruebas que permitan el ción de apoptosis en un 50-60% de un campo magnético a las columnas, estudio del grado de fragmentación de las células germinales que entran en los espermatozoides unidos a la anexi- DNA (especialmente cuando se trata la meiosis I. Estas células earmarked na V conjugada con las micropartícu- de daño de DNA de cadena doble) en con marcadores apoptóticos tipo Fas las magnéticas serían retenidos en la blastómeras de embriones obtenidas deberían ser fagocitadas y eliminadas columna, mientras que los no-apoptó- para Diagnóstico Genético por la célula de Sertoli a la cual se ticos pasarían a través de la misma Preimplantacional (DGP), podría apli- encuentran asociadas (Billig et al., (Grunewald et al., 2001). Otro méto- carse al estudio de la integridad de la 1996; Pentikainen et al., 1999; do, quizás más específico, sería la cromatina embrionaria. El uso combi- Sakkas et al., 1999). Sin embargo, selección de espermatozoides apoptó- nado de PCR , de sondas cromosómi- esto no siempre va a ocurrir y un por- ticos por técnicas de inmunoadsorción cas y de tests de fragmentación de centaje variable de estas células ger- fase sólida mediante el uso de anti- DNA nos permitiría estudiar de forma minales entran en el proceso de remo- cuerpos anti-Fas adheridos a placas simultánea la presencia de enferme- delado celular de la espermiogénesis de Petri. dades monogénicas, aneuploidías y el (que es el que determina la morfología grado de fragmentación de DNA en el espermática) apareciendo posterior- 2. Roturas de DNA durante el proce- embrión permitiéndonos así seleccio- mente en el eyaculado. Con relación a so de espermiogénesis. Alteraciones nar los embriones de mejor calidad este proceso de screening fallido, los en el proceso de remodelado de la cro- genómica. resultados de un estudio reciente matina espermática durante la esper- sugieren que existe una disociación miogénesis podrían resultar en frag- Mecanismos de fragmentación de DNA entre la calidad genómica de la célula mentación de DNA. McPherson y en espermatozoides germinal y el remodelado espermático Longo han postulado que la presencia que tiene lugar durante la espermiogé- de roturas en el DNA podría ser indi- ¿Cómo se produce la fragmentación nesis (Burrello et al., 2004). Es decir, cativa de maduración incompleta de DNA en los espermatozoides? El una célula germinal puede tener el durante la espermiogénesis. Para que daño de DNA en los espermatozoides núcleo “pulverizado” por apoptosis o se produzca el empaquetamiento de la puede afectar tanto el DNA mitocon- ser aneuploide y sin embargo el esper- cromatina del espermatozoide, es drial como el nuclear y puede ser matozoide resultante tener una morfo- necesaria la actividad de nucleasas inducido por cinco mecanismos prin- logía normal. De ahí que cuando se endógenas que corten y liguen el DNA cipales: (i) apoptosis durante el proce- microinyecte un espermatozoide de durante su protaminación. Estos cor- so de espermatogénesis, (ii) roturas de morfología normal, esto no nos garan- tes proporcionarían una liberación de DNA o nicks producidos durante el tiza que el genoma sea normal. Lo que estrés torsional ayudando así al empa-
    • A R T Í C U L O S Juan G. Álvarez et al. Nuevos avances en el estudio de.... 16 quetamiento de la cromatina durante segundo caso este tratamiento carece- espermatozoides eyaculados la tasa el desplazamiento de las histonas por ría de eficacia. Esto viene avalado por de embarazo evolutivo fue del 0% las protaminas (McPherson and los resultados recientemente publica- (Greco et al, 2005). Longo, 1992, 1993a, 1993b). dos por Greco et al., donde el uso de Cabe destacar que la fragmentación Alteraciones en el control de este pro- antioxidantes produjo una reducción de DNA inducida por el radical hidro- ceso podrían resultar en roturas de significativa en los niveles de frag- xilo resulta en la formación de 8-OH- DNA no reparadas. Estas alteraciones mentación de DNA (Greco et al., guanina y 8-OH-2´-deoxiguanosina en se producirían antes de la espermia- 2005). un primer estadio seguido de fragmen- ción. tación de DNA de cadena doble (Cui Probablemente, los espermatozoi- et al., 2000). Mientras que el daño de 3. Fragmentación de DNA a nivel des que expresen un mayor daño de DNA del primer tipo pudiera ser repa- post-testicular. Estudios recientes DNA sean aquellos que adquieran un rado por el ovocito, la fecundación de demuestran que espermatozoides menor grado de crosslinking de puen- un ovocito por un espermatozoide con inmaduros que producen niveles ele- tes disulfuro en la cromatina espermá- fragmentación de DNA de cadena vados de ROS pueden inducir daño de tica durante su maduración en el epi- doble es prácticamente irreversible e DNA en espermatozoides maduros. dídimo. En este sentido, estudios incompatible con el desarrollo de un Este daño se produciría después de la recientes han demostrado que, en embarazo a término. Dado que valores espermiación durante la co-migración general, el grado de fragmentación de de fragmentación de DNA en esper- de espermatozoides maduros e inma- DNA en espermatozoides eyaculados matozoides eyaculados >20%, medi- duros desde los túbulos seminíferos al es más alto que en espermatozoides dos por TUNEL (Sergerie et al., epidídimo (Ollero et al., 2001). Dado testiculares (Greco et al., 2005; 2005), o >30%, medidos por el test que los espermatozoides se encuen- Steele et al., 1999) y que en esper- SCSA (Evenson et al., 1999), están tran en íntimo contacto en el epidídi- matozoides del cuerpo y cabeza del asociados a tasas de embarazo <5%, mo, y que la vida media de los ROS es epidídimo (que es donde se completa la pregunta que surge es que ocurre del orden de nano a microsegundos, el proceso de crosslinking) y que la con el 80% y 70% restante de los esto facilitaría el que los ROS induz- inducción de fragmentación de DNA espermatozoides. En estos casos, la can fragmentación de DNA a nivel del en los espermatozoides a su paso por probabilidad de que un espermatozoi- epidídimo, ya sea actuando directa- el epidídimo podría estar relacionada de con un DNA normal fecunde al ovo- mente sobre el DNA o bien indirecta- con la calidad genómica del esperma- cito debería de ser del 80% y 70%, mente mediante la activación de tozoide. Es decir, además del meca- respectivamente y no <5%. Sin endonucleasas y caspasas espermáti- nismo de screening de la célula de embargo, además de que un 20% y cas. Esto es consistente con el hecho Sertoli, al que hacíamos referencia 30% de los espermatozoides tengan de que la co-centrifugación de esper- antes, existiría otro mecanismo de roturas en la cadena de DNA, el resto matozoides inmaduros (que producen screening a nivel del epidídimo dirigi- de los espermatozoides podrían tener niveles elevados de ROS) con esper- do a eliminar espermatozoides genó- modificaciones en las bases de DNA matozoides maduros resulta en la micamente defectuosos (Suganuma et del tipo de 8-OH-guanina y 8-OH-2´- inducción de fragmentación de DNA al., 2005). deoxiguanosina. Por lo tanto, la proba- en estos últimos, ya que en estas con- bilidad de que un espermatozoide con diciones estos espermatozoides tam- El daño potencial de DNA que los DNA normal fecunde al ovocito sería bién se encontrarían en íntimo contac- espermatozoides pueden experimentar mucho más baja que la esperada con to (Twigg et al., 1998). Esto también a su paso por el epidídimo tiene una un valor de fragmentación de DNA del es consistente con el hecho de que la gran trascendencia clínica, ya que en 20% o 30%, respectivamente. Es exposición in vitro de espermatozoides casos de niveles elevados de fragmen- decir, además de la fragmentación de maduros a ROS resulta en daño signi- tación de DNA en semen y fallo en dos DNA determinada del 20% y 30% ficativo de DNA (Aitken et al., 1998; o más ciclos de FIV/ICSI, podría recu- (daño primario), el 80% y 70% res- Lopes et al., 1998). Por otra parte, el rrirse a la microinyección de esperma- tante de los espermatozoides tendrían mismo epidídimo podría también tozoides testiculares obtenidos otro tipo de daño (daño secundario) jugar un papel activo a la hora de mediante técnica de TESA o TESE que no miden los tests habituales de inducir fragmentación de DNA en los (preferiblemente TESA, dado que es fragmentación de DNA y que, de no espermatozoides a su paso por el menos invasiva y gozaría de una mayor ser reparado, no es compatible con el mismo, ya sea producido por radicales aceptación por parte del paciente y desarrollo de un embarazo a término. libres como el anión superóxido del ginecólogo). Esto viene avalado Este concepto ha sido designado (Britan et al., 2006), el radical hidro- por los resultados obtenidos en un como el “efecto iceberg” (Evenson et xilo o el óxido nítrico, o bien median- estudio publicado por Greco et al., al., 1999). te la activación de caspasas y endonu- donde la microinyección de esperma- cleasas espermáticas por agentes tóxi- tozoides testiculares en pacientes con 4. Activación de caspasas y endonu- cos o por factores epididimarios. En el un nivel de fragmentación de DNA en cleasas espermáticas. La activación primer caso, este tipo de daño podría semen >15%, medido por el test de caspasas y endonucleasas en prevenirse mediante el uso de agentes TUNEL, resultó en una tasa de emba- espermatozoides diferenciados por antioxidantes, mientras que en el razo del 44,4%, mientras que con factores físico-químicos puede inducir
    • A R T Í C U L O S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 17 también fragmentación del DNA potenciales en la cadena de DNA. De bién resulta en fragmentación de DNA espermático. Estudios previos indican hecho, cuando se observa daño de de cadena doble que puede ser detec- que la exposición de espermatozoides DNA en condiciones de pH ácido o tada por el test TUNEL (Negoescu et de ratón in vitro a 40oC resulta en un alcalino y no en condiciones de pH al., 1998). aumento significativo en el grado de neutro se habla de puntos lábiles de fragmentación del DNA (Sailer et al., rotura al tratamiento ácido o alcalino. El test que más se ha estudiado 1997). Más recientemente, Banks et Por el contrario, el test TUNEL hasta ahora desde el punto de vista al., han demostrado la inducción de (Gorczyca et al., 1993), ISNT clínico es el test SCSA desarrollado fragmentación de DNA en espermato- (Gorczyca et al., 1993) y el COMET a por Evenson et al. (Evenson et al., zoides de ratón in vivo tras haber sido pH neutro (Singh et al., 1988), no 1980; 1983; 1985; 1991; 1994; expuestos los testículos a una tempe- requieren un paso previo de desnatu- 1999a; 1999b). El test SCSA mide la ratura de 42oC (Banks et al., 2005). ralización y miden roturas auténticas susceptibilidad del DNA de los esper- Dado que la fragmentación de DNA se de DNA de cadena sencilla (ISNT, matozoides a la desnaturalización in encontró en espermatozoides aislados TUNEL y COMET) y cadena doble situ tras la exposición a un pH ácido. del epidídimo una hora después del (TUNEL y COMET). Dado que el pH El DNA de espermatozoides con una estímulo, los autores concluyeron que intracelular en el ovocito es de 7.0, cromatina normal no se desnaturaliza, el daño observado tendría que haber- roturas de DNA de cadena sencilla o mientras que si el DNA de los esper- se producido en los espermatozoides a la presencia de puntos lábiles de rotu- matozoides está dañado y contiene su paso por epidídimo y que podría ser ra en el DNA no tendrían mayores con- roturas en sus cadenas, se pueden causado por radicales libres o por acti- secuencias en la formación del pronú- alcanzar diferentes grados de desna- vación de caspasas y endonucleasas cleo masculino, ya que a pH neutro turalización. Para determinar el grado espermáticas. las cadenas de DNA no se disocian y, de desnaturalización del DNA esper- por lo tanto, este tipo de daño sería mático, tras el tratamiento ácido, se 5. Fragmentacion de DNA inducida mucho más fácil de reparar. Por lo tiñen las células con naranja de acri- por radio y quimioterapia Tests de tanto, como una primera aproxima- dina (AO). Dado que el AO es un fluo- fragmentación de DNA ción, podrían considerarse dos tipos rocromo metacromático, éste emite en de tests: (i) tests que miden “daño verde cuando se intercala en cadenas Recientemente se han introducido real” de DNA tales como TUNEL, de DNA dobles (DNA intacto), y en una serie de tests para la determina- ISNT o COMET a pH neutro, y (ii) rojo si son de cadena sencilla (es ción de daño de DNA en los esperma- tests que miden “daño potencial” de decir, DNA fragmentado). El grado de tozoides. Estos tests incluyen TUNEL DNA o puntos lábiles de rotura al tra- daño de DNA, es decir la intensidad (TdT-mediated-dUTP Nick-End tamiento ácido o alcalino y susceptibi- de la fluorescencia verde y/o roja en Labelling, Gorczyca et al., 1993), lidad a la desnaturalización de DNA, los espermatozoides se mide de forma COMET (Hughes et al., 1996), CMA3 tales como el SCSA, SCD, cuantitativa por citometría de flujo y (Manicardi et al., 1995), ISNT (in-situ Chromomycin A3 y COMET a pH ácido se expresa como DFI (DNA nick translation, Tomlinson et al., o alcalino (Singh et al., 1989). Tests Fragmentation Index). Estudios pre- 2001), DBD-FISH (DNA Breakage que miden daño real de DNA deberían vios indican que valores de DFI >27% Detection Fluorescence In Situ tener un mayor valor predictivo que están asociados con fallo de embarazo Hybridization o detección de roturas tests que miden daño potencial de en TRA (Larson et al., 2000; Larson- en el DNA por hibridación in situ, DNA. Esto está avalado por el estudio Cook et al., 2003). Sin embargo estu- Fernández et al., 1998, 2000), SCD publicado por Greco et al., en el que dios recientes ponen en tela de juicio (Sperm Chromatin Dispersion Test, se demuestra que la microinyección el valor predictivo del test SCSA, ya Fernández et al., 2003) y el SCSA de espermatozoides eyaculados con que se han reportado casos de emba- (Sperm Chromatin Structure Assay, valores de TUNEL >15% resultaron en razo en técnicas de reproducción asis- Evenson et al., 1980; 1983; 1985; una tasa de embarazo evolutivo por tida con valores de DFI >27% 1991; 1994; 1999a; 1999b). ciclo del 0% mientras que la microin- (Gandini et al., 2004; Bungum et al., yección de espermatozoides testicula- 2004). Un aspecto importante en la deter- res con valores <6% en un segundo minación la fragmentación de DNA es ciclo de ICSI en estos mismos pacien- Quizás en la mayoría de los casos el el relacionado con el tipo de roturas tes resultó en una tasa de embarazo daño de cadena sencilla detectado en que se produce en las cadenas de por ciclo del 44.4% (Greco et al., el DNA espermático por tests como el DNA (cadena sencilla versus cadena 2005). test SCSA no sea incompatible con doble) y la susceptibilidad a la frag- una descondensación normal de la mentación de DNA. Tests de fragmen- Es importante resaltar que si bien el cromatina durante el proceso de tación de DNA como el SCSA, SCD test TUNEL con frecuencia se utiliza fecundación del ovocito y la formación (Fernández et al., 2003), o COMET a para determinar apoptosis en células, del pronúcleo masculino. En este sen- pH ácido o alcalino (Singh et al., la positividad de TUNEL no es siem- tido, el recién desarrollado test SCD 1988; 1989) requieren un paso ini- pre sinónima de apoptosis, ya que el nos puede ayudar a comprender mejor cial de desnaturalización para detec- daño de DNA inducido por el radical este proceso. El test SCD está basado tar los fragmentos de DNA o roturas hidroxilo y la radiación ionizante tam- en el hecho de que en espermatozoi-
    • A R T Í C U L O S Juan G. Álvarez et al. Nuevos avances en el estudio de.... 18 des con las cadenas de DNA intactas Dado que más del 90% del genoma las implicaciones del daño de DNA en se produce un desenrollamiento de los humano está compuesto por intrones el diagnóstico y tratamiento de la bucles de DNA, empaquetados en la con secuencias repetitivas que no infertilidad? La fecundación de ovoci- matriz nuclear, tras haber sido codifican por proteínas celulares, lo tos en metafase II por espermatozoi- expuestos a un tratamiento ácido más probable es que de existir daño des con daño de DNA podría conducir seguido de un tratamiento con agen- en las cadenas de DNA, éste no afec- a alteraciones en el desarrollo del tes reductores y detergentes. Esto te a hot spots o secuencias que codi- embrión, fallo en la implantación, o a desenrollamiento produce un halo fican proteínas (exones) que pudieran un aumento en la tasa de aborto alrededor de la matriz nuclear que se comprometer el desarrollo normal del (Genesca et al., 1992; Parinaud, puede visualizar por microscopía de embrión. Sobre este tema volveremos 1993; Twigg et al., 1998; Evenson, campo claro usando tinciones habi- a hablar más adelante en la sección 1999b: Carrell et al., 2003). Ovocitos tuales como el Diff-Quik. Por el con- de preguntas y respuestas. maduros con los mecanismos de repa- trario, si una de las cadenas de DNA ración de DNA intactos tienen la capa- está dañada, no se produce el halo, Dadas las limitaciones de tests cidad de reparar un daño moderado de observándose núcleos condensados. como el SCSA y SCD, que miden sus- DNA en los espermatozoides (Brandiff Sin embargo, si los espermatozoides ceptibilidad del DNA a la desnaturali- and Pedersen, 1981; Matsuda and no se exponen a este tratamiento zación in vitro, en la predicción de Tobari, 1988). Sin embargo, ovocitos ácido previo, se produce el desenrolla- tasas de fecundación y embarazo en inmaduros u ovocitos cuyos mecanis- miento de los bucles de DNA, inde- técnicas de reproducción asistida, en mos de reparación no funcionen de pendientemente de que el DNA esté la actualidad se recomienda el uso de forma adecuada (p.e., mujeres de fragmentado o no. Dado que, como ya tests como TUNEL o in-situ nick edad avanzada) o que hayan sido indicamos antes, el pH intracelular translation que miden “daño real” de dañados por factores tóxicos endóge- del ovocito es del orden de 7.0, un DNA. La presencia de daño de cadena nos (p.e., radicales libres) o exógenos espermatozoide con DNA fragmentado doble en el espermatozoide podría (p.e., radiación, tóxicos ambientales) que haya fertilizado el ovocito, podría interferir de forma significativa con la no serían capaces de reparar este desenrollar sus bucles de DNA permi- descondensación de la cromatina daño. Esto es consistente con la tiendo que se produzca la desconden- espermática. Esto es consistente con observación de que la inseminación sación de la cromatina y la formación los resultados de estudios que de ovocitos de mujeres de edad avan- del pronúcleo masculino. Sin embar- demuestran la existencia de bajas zada -que previamente habían sido go, todavía cabría preguntarse ¿qué tasas de fecundación asociadas a inseminados in vitro en varios ciclos ocurre con ese pronúcleo masculino niveles de fragmentación de DNA con espermatozoides de baja calidad en el cual existen cadenas de DNA >10% medidos por el test TUNEL de su cónyuge y cuya transferencia potencialmente dañadas? ¿va a afec- (Lopes et al., 1998; Benchaib et al., resultó en fallo repetido de embarazo- tar el desarrollo posterior del embrión? 2003). Sin embargo, como cabría con espermatozoides de donante, fre- Obviamente, la respuesta a esta pre- esperar, el test SCSA no se correlacio- cuentemente resulta en un aumento gunta va a depender de varios factores na con las tasas de fecundación in significativo en la calidad embrionaria entre los que cabe destacar el número vitro (Larson et al., 2000; Larson- y en la tasa de embarazo (Genescá et de ovocitos obtenidos, la capacidad Cook et al., 2003). al., 1992; Obasaju et al., 1999). Por del ovocito de reparar este daño, si consiguiente, los tests de fragmenta- existe daño real o daño potencial y de Aplicaciones al diagnóstico y trata- ción de DNA podrían potencialmente si están afectados intrones o exones. miento de la infertilidad¿Cuáles son utilizarse en el diagnóstico de fallo Tabla I. Valores del análisis de semen y fragmentación de DNA en muestras obtenidas en un período de tres meses y resultados clínicos obtenidos con tres de estas muestras. ANÁLISIS DE SEMEN & FRAGMENTACIÓN DE DNA FECHA DE IAC/ICSI FECHA MUESTRA CONCENTRACIÓN* % MOT MORFOLOGÍA† % DFI TRA EMBARAZO ‡§ 18/4/01 10/12/00 56,0 45,0 8 18.5 ICSI Gemelar 18/3/01 10/03/01¶ 53,0 49,0 9 36.9 ICSI NO 26/2/01 26/02/01¶ 58,7 61,6 9 32.6 IAC NO ‡ - 14/01/01 59,4 65,5 8 18.8 - - ‡ - 04/02/01 55,6 59,1 7 30.6 - - *millones/ml †% formas normales por criterios estrictos de Kruger (normal >4%) (Mortimer and Menkveld, 2001). ‡muestras recogidas entre ciclos de TRA. Alícuotas de 0,2 ml fueron congeladas directamente en nitrógeno líquido para análisis por el test SCSA y alícuotas de 0,5 ml fueron criopreservadas en TEST-yolk buffer. §muestra criopreservada el 10/12/00 y usada en el último ciclo de TRA el 18/4/01. ¶muestras recogidas el dia del ciclo de TRA. Alícuotas de 0,2 ml fueron congeladas en nitrógeno líquido para análisis por el test SCSA TRA: técnica de reproducción asistida
    • A R T Í C U L O S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 19 repetido de embarazo y abortos de límites de la normalidad. Es decir, la antes de hacer una vasectomía repetición en TRA. causa de infertilidad de esta pareja 7. Cuando se va a congelar semen pre- pasaría de ser idiopática a ser de fac- vio a tratamientos de quimio/radioterapia Sin embargo, no todas las muestras tor masculino. de semen que se obtengan de un 2. ¿Si una muestra de semen de un paciente van a tener el mismo nivel de Otro aspecto importante de las paciente tiene un valor de fragmenta- fragmentación de DNA. En un trabajo implicaciones clínicas del estudio de ción elevado, es ésta una condición reciente, se ha encontrado que existe la integridad del DNA espermático permanente o pudiera ser que otras gran variabilidad en el grado de frag- está relacionado con el grado de frag- muestras tuviesen valores más bajos? mentación de DNA en muestras de mentación de DNA que se encuentra semen obtenidas de un mismo pacien- en espermatozoides testiculares vs. Si bien en donantes fértiles los valo- te en diferentes ciclos espermatogéni- espermatozoides del epidídimo en oli- res de fragmentación suelen ser relati- cos (Álvarez et al., 2004). Los resulta- gospermias y azoospermias obstructi- vamente bajos y la variación en el dos que se muestran en la Tabla I vas (Steele et al., 2003). En este grado de fragmentación de DNA en corresponden a muestras de semen estudio, Steele et al., demostraron muestras de semen obtenidas en dife- obtenidas de un mismo paciente en que el grado de fragmentación de rentes ciclos espermatogénicos es un período de tres meses. En esta DNA en espermatozoides testiculares también baja (Evenson et al., 1991), pareja, alícuotas de las muestras de de pacientes con procesos obstructi- en pacientes de infertilidad, el grado semen utilizadas en sus ciclos de vos es significativamente inferior al de de fragmentación puede mostrar fluc- reproducción asistida, fueron congela- espermatozoides del epidídimo obte- tuaciones significativas (Álvarez et al., das con TEST-yolk buffer/glicerol y alí- nidos de esos mismos pacientes. 2004). Estas fluctuaciones pudieran cuotas de 0,2 ml de estas mismas Estudios previos sugieren que factores estar relacionadas con alteraciones en muestras, así como de otras tres tóxicos medioambientales, radicales el control de la espermiogénesis (p.e., muestras que se obtuvieron antes de libres producidos por espermatozoides varicocele, proceso inflamatorio sub- empezar sus ciclos de reproducción inmaduros, o bien derivados de un clínico, proceso febril) o con factores asistida, fueron congeladas directa- varicocele testicular o producidos por desencadenantes físico-químicos que mente en nitrógeno líquido y enviadas el propio epidídimo (p.e., óxido nítrico induzcan apoptosis o activen endonu- a un laboratorio de referencia para el producido por iNOS epididimaria), y/o cleasas espermáticas (p.e., proceso análisis de fragmentación de DNA por la presencia de factores proinflamato- febril, tóxicos medioambientales) que el test SCSA. Como muestran los rios, p.e., IL-6, IL-8) podrían resultar podrían inducir fragmentación del resultados, de las cinco muestras que en la inducción de fragmentación de DNA en los espermatozoides después se analizaron, tres tuvieron valores de DNA. Por lo tanto, en lugar de obtener de la espermiación (Evenson et al., DFI >27% (las tres que resultaron en espermatozoides de los túbulos epidi- 2000). Una vez que haya cesado el fallo de embarazo) y dos <27% (una dimarios en casos de procesos obs- estímulo desencadenante, el grado de de ellas resultó en un embarazo geme- tructivos, donde se pueden acumular fragmentación de DNA se normalizaría lar). Dado que en esta pareja no se estos factores y también se puede pro- en el ciclo espermatogénico siguiente. produjo embarazo tras dos ciclos de ducir una obstrucción iatrogénica, se Por ello, en aquellos casos en los que TRA, se decidió utilizar una de las recomienda obtener espermatozoides la muestra de semen analizada tenga muestras que había sido previamente testiculares, ya sea por la técnica de un valor por encima del umbral de criopreservada con TEST-yolk TESA o TESE. normalidad del test utilizado, deberí- buffer/glicerol y que tenía un valor de an recogerse varias muestras de DFI por debajo de 27%. El uso de esta Preguntas frecuentes sobre tests de semen, analizar el grado de fragmen- muestra en un ciclo posterior de ICSI fragmentación de DNA tación de DNA, criopreservarlas, y uti- resultó en un embarazo gemelar a tér- lizar únicamente aquellas muestras mino. 1. ¿A qué pacientes se les debería con valores de fragmentación dentro hacer el test? de la normalidad. Esto sería particu- Si bien estos resultados son todavía larmente útil en aquellos casos en los muy preliminares y habría que confir- El análisis de fragmentación del que las muestras de semen se vayan a marlos en un mayor número de casos, DNA espermático estaría indicado congelar, p.e., pacientes que van a ser sugieren que los tests de fragmenta- solicitarlo en los siguientes casos: sometidos a quimio o radioterapia. ción de DNA espermático podrían uti- lizarse no sólo para el diagnóstico sino 1. Fallo repetido de FIV 3. ¿Qué factores pueden causar también para el tratamiento de la 2. Abortos de repetición (Carrell et al., fragmentación de DNA? infertilidad. Es importante destacar 2003) que a pesar de que la fragmentación 3. Edad del varón >40 años (Singh et al., Una gran variedad de factores han de DNA varió de forma significativa en 2003) sido asociados con la inducción de los dos ciclos espermatogénicos estu- 4. Varicocele (Smith et al., 2006) daño de DNA en los espermatozoides. diados, los parámetros estándar de 5. Episodio de fiebre alta en los últi- Estos factores incluyen procesos infla- semen no mostraron una variación sig- mos tres meses (Evenson et al., 2000) matorios agudos y crónicos, el estrés nificativa y estuvieron dentro de los 6. Cuando se va a congelar semen oxidativo, varicocele, fiebre alta, expo-
    • A R T Í C U L O S Juan G. Álvarez et al. Nuevos avances en el estudio de.... 20 sición del testículo a temperaturas El valor predictivo de un test de dos y de su capacidad de reparar daño >36oC (Banks et al., 2005), tóxicos fragmentación de DNA va a depender de DNA en el espermatozoide. Si se medioambientales, quimioterapia, de varios factores. Estos factores dispone de seis ovocitos en metafase radiación ionizante, edad >40 años, incluyen: II (Fig. 1), la probabilidad de que se consumo excesivo de cafeína (= o > 1. Fragmentación de DNA de cadena produzca un embarazo va a ser mayor tres tazas de café al día) (Schmid et sencilla vs. cadena doble. En general que si se dispone de tan sólo tres ovo- al., Hum Reprod 2006, in press). el daño de cadena sencilla es más citos (Fig. 2). En este último caso, la fácil de reparar por ovocito que el de probabilidad de que un espermatozoi- 4. ¿Si el valor del test es normal, cadena doble. de con el DNA intacto fecunde un garantiza esto un alto nivel de fertili- 2. Porcentaje de espermatozoides que óvulo normal o de que un espermato- dad? están afectados. Cuanto más alto sea zoide con DNA fragmentado fecunde el porcentaje de espermatozoides con un óvulo con una alta capacidad repa- No necesariamente. La calidad del DNA fragmentado menor la probabili- radora va a ser mucho menor que en DNA pudiera ser óptima y sin embar- dad de que un espermatozoide con el primer caso. Si bien en el primer go otros parámetros espermáticos u DNA intacto pueda fecundar al ovoci- caso, como se indica en la Fig. 1, ovocitarios podrían estar también to. podrían producirse dos embriones afectados. Como se ha indicado ante- 3. Grado de fragmentación de DNA grado I, que podrían dar lugar a un riormente, los tests de fragmentación por espermatozoide. Cuanto mayor sea embarazo, ello no quiere decir de que pueden tener un alto valor predictivo el grado de fragmentación del DNA la fragmentación de DNA no esté aso- negativo pero no positivo. Las tasas de nuclear del espermatozoide, menor la ciada a un mal pronóstico en TRA, ya fecundación e implantación, además probabilidad de que el ovocito lo que de haber menos ovocitos como en de depender de la calidad genómica pueda reparar. el caso ilustrado en la Fig. 2, podría del espermatozoide que haya fecunda- 4. Si existe únicamente daño primario no producirse ningún embrión viable do al ovocito, van a depender también o si existe daño combinado primario y y, por lo tanto, no se produciría un de otros parámetros como son la cali- secundario. Por ejemplo, en casos de embarazo. Por lo tanto, el número de dad citoplasmática y genómica del apoptosis durante la espermatogéne- ovocitos disponibles es un factor ovocito y la receptividad del endome- sis o roturas de DNA producidas importante que va a influir en el valor trio. durante la espermiogénesis, general- predictivo de tests de fragmentación mente este tipo de daño no suele estar de DNA. Esto mismo se aplicaría a 5. ¿Qué se hace cuando los valores asociado a daño secundario. Por el ciclos de coito dirigido e IAC, donde el de fragmentación de DNA obtenidos contrario, en casos de daño post-testi- número de ovocitos que se obtienen en varias muestras de semen son con- cular inducido por el radical hidroxilo habitualmente es de uno y dos, res- sistentemente altos? ¿tendría que o en casos de exposición a radiación pectivamente. Aquí las tasas de recurrirse a semen de donante? ionizante, el daño primario (que suele embarazo serían más bajas cuando el ser de cadena doble) casi siempre grado de fragmentación es relativa- No. Muestras de semen con un valor está asociado a daño secundario. mente alto, ya que habitualmente se de fragmentación por encima del 5. Si el daño afecta intrones o exones. desarrollan de uno a dos folículos. Por umbral de normalidad pueden produ- Más del 90% del DNA está formado lo tanto, uno esperaría que el valor cir embarazos a término, independien- por intrones. Por lo tanto, la probabili- predictivo negativo de tests de frag- temente de la edad de la mujer. Esto dad de que el daño de DNA afecte a mentación, especialmente aquellos es particularmente cierto cuando se exones, que son las secuencias del que miden daño real como el test utilizan tests con una valor predictivo DNA que codifican proteínas, es rela- TUNEL, sea más alto en ciclos de IAC. bajo. Estudios recientes muestran que tivamente baja. Esto ha sido confirmado en un estudio muestras de semen con valores de 6. Capacidad del ovocito de reparar donde se encontró una correlación sig- fragmentación relativamente altos daño de DNA en el espermatozoide nificativa entre el grado de fragmenta- medidos por el test SCSA (Gandini et que lo ha fecundado. Esta capacidad ción de DNA en semen medido por el al., 2004; Bungum et al., 2004) o puede variar de un ovocito a otro en test TUNEL y las tasas de embarazo por el test SCD (Muriel et al., 2006) cohortes de ovocitos obtenidos en en ciclos de IAC (Duran et al., 2002). pueden resultar en embarazos viables ciclos de in vitro. Desdichadamente, a término. De ahí que se recomiende la capacidad de reparación del ovoci- Para concluir, podríamos decir que el uso de tests de fragmentación que to no se puede determinar in vitro, ya el valor predictivo de un test de frag- miden daño real, como el test TUNEL, que esto afectaría su viabilidad. mentación, IItest, es el sumatorio de en combinación con tests que miden 7. Número de ovocitos. En ciclos de in daño secundario de DNA como la pre- vitro en parejas donde el nivel de frag- varios factores: IItest = II(1) + II(2) + sencia de 8-OH-2´-deoxiguanosina. mentación de DNA en semen, medido II(3).......+II(n). Algunos de estos facto- por TUNEL, es relativamente alto, la res pueden medirse y otros no como, 6. ¿Por qué muestras de semen con probabilidad de que se produzcan por ejemplo, si el daño afecta a intro- valores de fragmentación relativamen- embriones viables y un embarazo a nes o exones o la capacidad reparado- te altos pueden dar lugar a un emba- término va a depender, al menos en ra del ovocito. razo a término? parte, del número de ovocitos obteni-
    • A R T Í C U L O S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 21 FIGURA 1: Resultado hipotético de un caso de ICSI donde seis ovocitos fueron microinyec- tados con espermatozoides provenien- tes de un semen con un nivel de frag- mentación de DNA del 40% medido por TUNEL. La calidad de reparación de los ovocitos se indica mediante el símbolo +. Cuanto mayor sea la capacidad de reparación del ovocito mayor el número de símbolos + y viceversa. Cuanto mayor sea el grado de fragmentación de DNA en el espermatozoide mayor la intensidad de fluorescencia. De los seis embriones obtenidos, dos fueron de buena calidad (2 x G1) y cuatro de cali- dad deficiente (G2, G4, G4). La trans- ferencia de los dos embriones Grado I resultó en un embarazo. La calidad de los embriones se representa en día 3 por razones puramente didácticas ya que, en general, el efecto de la fecun- FIGURA 2: dación de ovocitos por espermatozoides Resultado hipotético de un caso de ICSI donde tres ovocitos fueron microinyec- con DNA fragmentado sobre la calidad tados con espermatozoides provenientes de un semen con un nivel de fragmen- embrionaria pudiera expresarse en esta- tación de DNA también del 40% medido por TUNEL. Todos los embriones obte- díos más tardíos (late paternal effects) nidos fueron de mala calidad (G2, G4, G4). Se transfirieron los tres embriones (Tesarik et al., 2004). y no se produjo embarazo. Evenson DP. Selecting cryopreserved plained recurrent pregnancy loss. Arch 7. ¿Qué test de fragmentación de semen for assisted reproductive tech- Androl 2003; 49:49-55. niques based on the level of sperm Duran EH, Morshedi M, Taylor S, DNA es el más recomendable? nuclear DNA fragmentation resulted Oehninger S. Sperm DNA quality pre- in pregnancy. Fertil Steril 2004; dicts intrauterine insemination outco- Se recomienda utilizar tests que 81:712-3. me: a prospective cohort study. Hum Reprod 2003; 17:3122-8. midan daño primario y daño secunda- Banks S, King SA, Irvine DS, Saunders rio. Para determinar daño primario se PT. Impact of mild scrotal heat on Evenson DP, Darzynkiewicz Z, and DNA integrity in murine spermatozoa. Melamed, MR. Relation of mamma- recomienda el uso de tests de frag- Reproduction 2005; 129:505-14. lian sperm heterogenity to fertility. mentación que miden daño real como Science 1980; 210:1131-133. el test TUNEL, ya sea por microscopía Benchaib M, Braun V, Lornage J, Hadj S, Salle B, Lejeune H, Guerin JF. Evenson DP and Melamed MR. Rapid o por citometría de flujo. Los kits Sperm DNA fragmentation decreases analysis of normal and abnormal cell comerciales que existen para el test the pregnancy rate in an assisted types in human semen and testis reproductive technique. Hum Reprod biopsies by flow cytometry. J. TUNEL son sencillos, poco costosos, 2003; 18:1023-8. Histochem Cytochem 1983; 31:248- permiten el uso de microscopía de 53. campo claro o de fluorescencia, Billig H, Chun SY, Eisenhauer K, Hsueh Evenson DP, Higgins PJ, Grueneberg D, AJ. Gonadal cell apoptosis hormone- Ballachey BE. Flow cytometric analy- dependiendo de si la sonda va conju- regulated cell demise. Hum. Reprod. sis of mouse spermatogenic function gada a peroxidasa o fluoresceína, res- Update 1996; 2:103-117. following exposure to ethylnitrosourea. pectivamente (Roche Diagnostics, Cytometry 1985; 6:238-53. Brandiff B and Pedersen RA. Repair of Mannheim, Germany) y, por lo tanto, the ultraviolet-irradiated male genome Evenson DP, Jost LK, Baer RK, Turner pueden realizarse en cualquier labora- in fertilized mouse eggs. Science TW, Schrader SM. Individuality of 1981; 211:1431-1433. DNA denaturation patterns in human torio. No se recomienda el uso de sperm as measured by the sperm tests como el SCSA o el test SCD, Britan A, Maffre V, Tone S, Drevet JR. chromatin structure assay. Reprod. incluyendo el Halosperm kit, ya que Quantitative and spatial differences in Toxicol. 1991; 5:115-25. the expression of tryptophan-metabo- estos tests miden daño potencial o lizing enzymes in mouse epididymis. Evenson DP and Jost, LK. Sperm chro- susceptibilidad a la desnaturalización Cell Tissue Res 2006; 2:1-10. matin structure assay: DNA denatura- del DNA y tienen un valor predictivo bility. In: Methods in cell biology, Vol Bungum M, Humaidan P, Spano M, 42., Flow Cytometry (Darzynkiewicz, relativamente bajo en TRA. Para Jepson K, Bungum L, Giwercman A. Z., Robinson, J.P., and Crissman, H.A. medir daño secundario se recomienda The predictive value of sperm chroma- (eds) Academic Press, Orlando, tin structure assay (SCSA) parameters 1994; pp:159 la determinación de 8-OH-2´-deoxi- for the outcome of intrauterine inse- guanosina utilizando el kit de ELISA mination, IVF and ICSI. Hum Reprod Evenson DP. Loss of livestock breeding de Oxford Biomedical (Oxford 2004; 19:1401-8. efficiency due to uncompensable sperm nuclear defects. Reprod Fertil Biomedical Research, USA). Burrello N, Arcidiacono G, Vicari E, Dev 1999a; 11:1-15. Asero P, Di Benedetto D, De Palma A, Romeo R, D´Agata R, Calogero AE. Evenson DP, Jost LK, Marshall D, Bibliografía Morphologically normal spermatozoa Zinaman MJ, Clegg E, Purvis K, de of patients with secretory oligo-asthe- Angelis P, Claussen OP. Utility of the Aitken RJ, Gordon E, Harkiss D, Twigg no-teratozoospermia have an increa- sperm chromatin structure assay as a JP, Milne P, Jennings Z, Irvine DS. sed aneuploidy rate. Hum Reprod diagnostic and prognostic tool in the Relative impact of oxidative stress on 2004; 19:2298-302. human fertility clinic. Hum Reprod the functional competence and geno- 1999b; 14:1039-49. mic integrity of human spermatozoa. Carrell DT, Liu L, Peterson CM, JOnes Biol Reprod 1998; 59:1037-46. KP, Hatasaka HH, Erickson L, Evenson DP, Jost LK, Corzett M, Balhorn Campbell B. Sperm DNA fragmenta- R. Characteristics of human sperm Álvarez JG, Ollero M, Larson-Cook KL, chromatin structure following an epi- tion is increased in couples with unex- sode of influenza and high fever: a
    • A R T Í C U L O S Juan G. Álvarez et al. Nuevos avances en el estudio de.... 22 case study. J Androl 2000; 2003; 80:895-902. Steril 1993; 60:888-892. 21:739-46. Lopes, S., Jurisicova, A., Sun, J.G. et al. Pentikainen V, Erkkila K, and Dunkel L. Fernández JL., Goyanes VJ., Ramiro- Reactive oxygen species: potential Fas regulates germ cell apoptosis in Díaz J., Gosalves J. Application of cause for DNA fragmentation in the human testis in vitro. Am. J. FISH for in situ detection and quanti- human spermatozoa. Hum. Reprod. Physiol. 1999; 276:E310-E316. fication of DNA breakage. Cytogenet 1998; 13:896-900. Cell Genet 1998; 82:251-56. Sailer BL, Sarkar LJ, Bjordahl JA, Jost Lopes S, Sun JG, Jurisicova A, Meriano LK, Evenson DP. Effects of heat stress Fernández JL, Vázquez-Gundin F, J, Casper RF. Sperm deoxyribonucleic on mouse testicular cells and sperm Delgado A, Goyanes VJ, Ramiro-Díaz acid fragmentation is increased in chromatin structure. 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Reduction of the Muriel L, Meseguer M, Fernandez JL, azoospermia. Mol Hum Reprod 1999; incidence of sperm DNA fragmenta- Alvarez JG, Remohi J, Pellicer A, 9:831-5. tion by oral antioxidant treatment. J GArrido N. Value of the sperm chro- Androl 2005; 26:349-53. matin dispersion test in predicting Suganuma R, Yanagimachi R, Meistricht pregnancy outcome in intrauterine M. Decline in fertility of maouse Hughes CM, Lewis SE, McKelvey-Martin insemination: a blind prospective sperm with abnormal chromatine VJ, Thompson W. A comparison of study. Hum Reprod 2006; 21:738- during epididymal passage as revealed baseline and induced DNA damage in 44. by ICSI. Hum Reprod 2005; human spermatozoa from fertile and 20:3101-08. infertile men using a modified comet Obasaju M, Kadam A, Sultan K, Fateh assay. Mol Hum Reprod 1996; M, Munne S. Sperm quality may Tesarik J, Greco E, Mendoza C. Late, but 2:613-19. adversely affect the chromosome not early, paternal effect on human constitution of embryos that result embryo development is related to Larson K., DeJonge C., Barnes A. Jost L, from intracytoplasmic sperm injec- sperm DNA fragmentation. Hum and Evenson DP. Relationship betwe- tion. Fertil Steril 1999; 72:1113-25. Reprod 2004; 19:611-5. en assisted reproductive techniques (ART) outcome and status of chroma- Ollero M, Gil-Guzmán E, López MC, Tomlinson MJ, Moffatt O, Manicardi GC, tin integrity as measured by the Sharma RK, Agarwal A, Larson K, Bizzaro D, Afnan M, Sakkas D. Sperm Chromatin Structure Assay Evenson D, Thomas AJ Jr, Álvarez JG. Interrelationships between seminal (SCSA). 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    • D E B A T E S I. Solvas et al. ¿Qué esperas de Asebir? 24 INTRODUCCIÓN A DEBATE La pregunta lanzada para este Debate es: “¿QUÉ ESPERAS DE ASEBIR?” Con ello se pretende conocer la opinión de los asociados e ideas para el mejor funcionamiento de nuestra sociedad. Para el próximo número el tema propuesto es: “ La ética de los tratamientos de reproducción asistida “. Os recordamos que esta sección de la revista está abierta a todos y que de todos depende que sea una herramienta actual e inte- resante. ¡Desde la vocalía de publicaciones os invitamos a participar! ¿QUÉ ESPERAS DE ASEBIR? Ivan Solvas y Ma. Carme Pons.Unitat de Reproducció Assistida. CENTRO MÉDICO TEKNON. Barcelona Una de las tareas principales de expondrían las últimas novedades intercambios repercutiría muy positi- ASEBIR debería ser la unificación de (sobre técnicas, medios de cultivo, vamente tanto en el embriólogo como criterios en los diferentes campos de control de calidad...) y, a la vez , ser- en el laboratorio en el cual trabaja. la Reproducción Asistida (por ejem- virían para poner en común ideas, plo: criterios de valoración y selección comentar problemas y casos atípicos. Otro punto fuerte de la Asociación de embriones, número a transferir, debería ser la asesoria jurídica de sus técnicas de procesamiento de Los aspectos más relevantes de asociados sobre los aspectos legales semen...). Una forma de hacerlo sería estos talleres (similares a los en la aplicación diaria de las técnicas. realizando cursos ASEBIR (similares a Workshop europeos) podrían publicar- los realizados por otras asociaciones se en la propia revista de ASEBIR para Finalmente ASEBIR, en representa- de ámbito europeo) para intentar bus- hacer extensivo su conocimiento al ción de los embriólogos, debería, por car los estándares para las técnicas de resto de profesionales. un lado, erigirse como un interlocutor reproducción, minimizando diferen- válido (junto a los colegios profesiona- cias entre centros de reproducción Siguiendo el modelo estadouniden- les) para defender los intereses del asistida. se, sería recomendable el estableci- colectivo ante la Administración y, por miento de convenios con otro lado, ser el medio encargado de La Asociación podría promocionar Universidades y/o centros de otros paí- divulgar a la sociedad (prensa, escue- reuniones periódicas monotemáticas ses que permitiesen a los asociados las y otros colectivos) la actividad pro- y, a ser posible, prácticas con los hacer estancias con el fin de aprender pia de nuestra profesión. especialistas de cada campo de la nuevas técnicas o de perfeccionarlas. Reproducción Asistida. En ellas se La experiencia generada en estos ¿QUÉ ESPERAS DE ASEBIR? Fernando Marina CEFER. Barcelona Soy el socio de ASEBIR número 17. de carrera, sentí la necesidad de ins- tos que justificaran la creación de esta Me incorporé a esta sociedad en sus cribirme. Me pareció genial que exis- sociedad. En la actualidad, tengo el inicios, cuando era estudiante de tieran Sociedades tan específicas de honor de participar en la Junta Biología. Por tradición familiar ya la temática que en aquellos momentos Directiva y las ganas de aportar cosas tenía pensado trabajar en reproduc- y aún en la actualidad me apasiona nuevas. Mi incorporación a la Junta ción humana y cuando el Dr. Santaló tanto. Me congratuló la circunstancia Directiva ha tenido un inicio un poco nos habló de esta sociedad, en una de que hubiera tanta información, extraño. Digo extraño porque junto clase de Biología Celular de 5º curso tanta gente implicada y tantos proyec- con la alegría de poder participar de
    • D E B A T E S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 25 forma activa en esta sociedad he com- nuestros estatutos, y concretamente al pedir a ASEBIR que haga una política partido con el resto de miembros de la artículo 4: activa para que los socios participen Junta el sentimiento de desasosiego más en la web para relacionarse con derivado de la poca asistencia y parti- ARTÍCULO 4.- Fines de la asociación colegas de la sociedad. Por la parte cipación que hubo en la última Junta a) Agrupar en España a los que me toca como miembro de la General de Zaragoza. Después del Licenciados o Doctores que trabajan Junta os animo a participar en el Foro desánimo inicial, afortunadamente, y en el ámbito de la Biología de de la web, a mantener actualizados los gracias al espíritu positivo y empren- Reproducción, es decir, en el desarro- datos del listado de socios, a utilizar dedor de los miembros de la Junta, llo y aplicación de técnicas de repro- la web para solicitar ofertas de traba- rápidamente hubo un sentimiento de ducción y de caracterización genética, jo, a consultar la agenda de congresos poner remedio a este hecho. Las pri- incluyendo tanto a los profesionales (es una de las más completas)... Es meras propuestas se encaminaron a que se dedican a tareas de aplicación posible que muchos estéis pensando intentar encontrar un horario más clínica humana, como a los proceden- en estos momentos lo siguiente “no atractivo para celebrar la Junta tes de áreas de investigación básica me acuerdo del password”. Quizás General. Posteriormente, y después de en especialidades afines. deberíamos pedirle a ASEBIR que per- un análisis más reposado, se pensó en mita cambiar con facilidad el usuario llevar a la revista éste hecho en forma b) Fomentar el estudio, desarrollo y y password para que la gente use uno de debate. Para evitar que la baja difusión de las distintas especialida- que conozca y le sea familiar. asistencia a la Junta General viniera des que comprende la Biología de la La revista, el congreso, la web y la motivada por un alejamiento entre las Reproducción, poniendo en común los publicación del primer cuaderno de necesidades del asociado y las activi- conocimientos y líneas de investiga- embriología clínica tienen el fin de dades de la Asociación, se decidió ción de cada equipo y redactando cumplir con los objetivo de los puntos proponer éste tema. Esta es una forma aquellos protocolos que se puedan 4b y 4c. Pero, queda mucho por de permitir que el socio opine y dé estandarizar. hacer. En cuanto a la redacción de ideas a la Junta para conseguir que protocolos que se puedan estandari- todos nos impliquemos en mayor c) Establecer programas de aprendi- zar, ASEBIR está poniendo la semilla. medida en los objetivos de la zaje de las técnicas y de formación, El cuaderno sobre recursos humanos y Sociedad. Dado que las aportaciones y así como determinar criterios de acre- físicos para el laboratorio de reproduc- las opiniones de los socios son funda- ditación de los centros y de los profe- ción asistida humana es la culmina- mentales para la salud de ASEBIR, se sionales promoviendo el acceso a ción de un gran esfuerzo realizado por ha querido abrir este debate para per- cuantos títulos de especialistas abar- un equipo coordinado por José mitir que todos los que no asisten a que en su día el Laboratorio de Antonio Castilla. Pero no es sólo eso, las Juntas Generales puedan aportar Biología de la Reproducción. lleva delante un número, el primero, ese pequeño pero tremendamente útil lo cual indica que vendrán más detrás. granito de arena. d) Establecer intercambios y promo- Está previsto que los próximos cuader- ver estudios multicéntricos y multidis- nos traten sobre la catalogación de Después de esta inicial disposición ciplinarios, fomentando de este modo ovocitos, embriones tempranos y blas- de motivos quisiera entrar a conside- la relación y colaboración entre sus tocistos y sobre el registro de datos rar qué es lo que yo, y supongo que miembros. del laboratorio de reproducción asisti- muchos socios, esperamos de ASE- da. Tenemos, pues, que pedirle a BIR. Antes de empezar a pedirle cosas e) Mantener colaboración con las ASEBIR que continúe con esta línea a ASEBIR, tenemos que tener claro otras asociaciones científicas y profe- iniciada. Pero también aprovecho para cuáles son los fines de la asociación. sionales tanto nacionales como solicitar a los socios que estas guías Cuando pregunto a mis colegas biólo- extranjeras de especialidades afines, las tomemos y las utilicemos como gos qué esperan ellos de ASEBIR me así como con organismos universita- referencia válida en foros nacionales e contestan de forma general “que rios y autoridades sanitarias y educati- internacionales. defienda a los biólogos ante el esta- vas de todos los niveles de la do”. Sin embargo, ésta función corres- Administración.” El punto 4c habla de establecer pro- ponde a los Colegios Oficiales y, ade- gramas de aprendizaje de las técnicas más, ASEBIR no solo esta compuesta El punto 4a habla de “agrupar”. Este y establecer programas de formación. por biólogos. Sin embargo, sí podemos objetivo o fin de la asociación está a ASEBIR, en esta línea, ha publicado pedirle a ASEBIR que sirva de interlo- mi modo de ver claramente consegui- el programa de formación de embrió- cutor con los Colegios y con el estado do. La sociedad dispone de un listado logo clínico al que podéis acceder o el ministerio de sanidad para defen- de socios, al cual, se puede acceder desde la web. Estos fines formativos der los intereses particulares de las desde la web. Además, se preocupa pueden ser conseguidos de forma acti- personas que trabajamos en reproduc- de que éste grupo de personas tenga va, organizando “workshops” o de ción. Por tanto, antes de pedirle nada la posibilidad de reunirse en un forma pasiva, auspiciando actividades a ASEBIR, tenemos que tener claro Congreso. ¿Podemos pedirle más a propuestas por otros centros o socie- cuáles son sus fines. Para saber esto, ASEBIR sobre este punto?. Pues a lo dades. No sería descabellado solicitar lo tenemos tan fácil como acudir a mejor si. Desde esta revista podemos a ASEBIR que activamente, además
    • D E B A T E S Antonio Urries ¿Qué esperas de Asebir? 28 del congreso, organizara talleres prác- Finalmente, en cuanto al punto 4e que podría informar de actividades ticos que fueran más accesibles a los me gustaría comentar el gran esfuerzo formativas, bolsa de trabajo, noveda- socios que algunos excesivamente realizado por ASEBIR en busca del des en la web, etc. Creo que la infor- caros y extensos Masters en reconocimiento de nuestra especiali- mación anual que se da en la Junta Reproducción Humana que existen en dad ante los usuarios de las técnicas y General o la semestral que aporta la la actualidad. Para este propósito, le ante la propia administración. El revista puede llegar a ser escasa para podríamos pedir a ASEBIR que actúe Colegio Oficial de Biólogos junto con muchos socios como coordinador entre posibles cen- ASEBIR ha desarrollado el tros organizadores, casas comerciales Reglamento para la Calificación de Por último, considero que ASEBIR que quieran mostrar cómo utilizar sus Especialista en Reproducción esta realizando una importante labor productos y comités científicos que Humana Asistida. Otra actividad con ayuda del tremendo esfuerzo decidan qué técnicas, cómo y cuándo importante de ASEBIR se ha realizado altruista y el gran empeño e ilusión organizar estos eventos. como miembro de la Comisión que ponen los miembros de la Junta Promover estudios multicéntricos Nacional de Reproducción Humana Directiva. Sin embargo, una sociedad como apunta el punto 4d es una tarea Asistida del Ministerio de Sanidad y no puede funcionar si sus asociados difícil que no es útil si no está bien Consumo. ASEBIR también ha fomen- no la apoyan. Ruego por tanto, que diseñada. Pero, valdría la pena insistir tado la unión con otras sociedades aunque a veces supone un gran en este punto y establecer políticas científicas españolas con la creación esfuerzo acudir a las Juntas activas para proponer y ejecutar algu- de la Federación de Asociaciones para Generales, cada miembro sea capaz no de estos estudios. Iniciativas como el Estudio de la Reproducción (SEF, de realizar este pequeño sacrificio la del grupo CEIFER en el tema de ASESA, SEC y ASEBIR). En este anual y contribuya con su presencia y control de calidad favorecen que se punto lo único que creo que le pode- aportación a que ésta sea una socie- pongan en común datos multicéntri- mos pedir a ASEBIR es que nos infor- dad viva, con buena salud y con ganas cos. Sin embargo, podríamos pedir a me más eficazmente de todas estas de conseguir nuevos logros. ASEBIR que encabezara activamente actividades. Para ello sería útil la cre- más iniciativas como las del grupo de ación de un boletín electrónico que interés en diagnóstico genético preim- con una periodicidad, por ejemplo, tri- plantacional, que recoja y presente e mestral informara de las actividades informe (web, revista o congreso) que se realizaran en este sentido. Este sobre los resultados multicéntricos boletín podría ser útil también para obtenidos. potenciar los demás puntos puesto ¿QUÉ ESPERAS DE ASEBIR? Antonio Urries. Reproducción Asistida Quirón Zaragoza Resulta difícil decir que espero de permita recibir información sobre esos puntos se ha ido avanzando, aun- ASEBIR sin que parezca una crítica novedades, congresos, bolsa de traba- que aún queda mucho por recorrer e hacia lo que es actualmente nuestra jo, etc., pero me voy a centrar en algo incluso, en algunas cosas, por empe- asociación. Todo lo contrario. Si me más esencial (por lo menos para mí). zar a andar. preguntaran si estoy contento de lo Repasando los objetivos primordia- que es, de lo que aporta, diría que si. les que aparecen en la presentación En primer lugar ¿Por qué no empe- Desde su creación en 1993 la hemos de la página Web (www.asebir.com) zamos reforzándonos nosotros mis- visto crecer, y por mi parte siempre es podemos leer: mos? Considero que quizá lo que una satisfacción cualquier cosa que -Fomentar el estudio, desarrollo y deberíamos hacer es determinar crite- provenga de ella. difusión de las especialidades, conoci- rios de acreditación de los laborato- mientos y líneas de investigación... rios, no de los centros y luchar porque Pero dicho esto, si el debate es -Establecer programas de aprendiza- reconozcan nuestra identidad. ¿Por sobre “lo que esperas”, se supone que je de las técnicas, así como determi- qué no generar incluso nuestros pro- hay que reflejar aquello que actual- nar criterios de acreditación de los pios “Protocolos de consentimiento mente podríamos considerar pueda centros... informado” para los pacientes? ¿Y enriquecerla. -Establecer intercambios y promover cómo es posible que hoy en día aún se estudios multicéntricos... dude que podamos ser los jefes-res- Podríamos mencionar algunos -Mantener colaboración con otras ponsables-directores de nuestros labo- aspectos más o menos importantes, asociaciones... ratorios en el ámbito legal?. como mejorar la página web, abrir un grupo de noticias dinámico que nos Y realmente, en todos y cada uno de Actualmente, y todos lo estamos
    • D E B A T E S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 29 viendo, un Laboratorio de drían por si solas. Porque ¿quién -Emitir opiniones sobre aspectos Reproducción Asistida es algo más puede emitir una opinión más cualifi- científicos, profesionales y legales que un sitio donde capacitar semen y cada sobre si se puede (o no) conge- que puedan afectar a nuestra especia- generar embriones para transferir a lar ovocitos?, ¿Quién puede razonar lidad. Haciendo extensible su divulga- una mujer, y sólo estamos empezan- con mejor criterio el significado que ción al público en general mediante do. Obviamente, en cualquier campo puede tener el término “fecundar tres los medios adecuados cuando se con- de la ciencia es imprescindible la óvulos”?, por mencionar dos debates sidere conveniente. colaboración con muchas otras disci- con que nos hemos encontrado plinas médicas y/o científicas, pero recientemente. Me consta que nuestra Luego unimos esfuerzos con quien colaborar no es supeditar ni limitar, y, asociación se ha movido y ha unido haga falta, pero nuestra opinión por tal como vimos en nuestro último con- sus esfuerzos a otras asociaciones delante. greso, las puertas que se están abrien- para emitir conclusiones y comunica- E incluso: do podemos elegir el traspasarlas o dos, pero yo por lo menos he echado - Defender los intereses profesiona- no, pero desde luego no podemos algo en falta, algo que sigue teniendo les de los asociados. negarlas, y no creo que nadie piense que ver con nuestra identidad. que el que personas muy representati- ¿Dónde está nuestra “opinión” como Y sobre todo, como colofón: vas de nuestra especialidad ocupen asociación? ¿Dijimos algo cuando - Determinar criterios de acredita- cargos importantes dentro de la amenazaron con cerrar un laboratorio ción de los laboratorios y de las perso- Medicina Regenerativa sea una casua- en Barcelona por congelar óvulos? ¿A nas responsables de ellos adecuándo- lidad. quien sancionaban? ¿Al centro? ¿Al los a la realidad. laboratorio? ¿A la persona que realiza- En el momento que asumiéramos ba la técnica? (Que, por cierto, perte- Aunque, naturalmente, es sólo una esto, y asumiéramos nuestra identi- necía a ASEBIR). Y aquí es donde yo opinión. dad, el resto de mis “esperanzas” ven- introduciría otro objetivo primordial: ¿QUÉ ESPERAS DE ASEBIR? Mª Victoria Hurtado de Mendoza1, Mark Grossmann2 y Nieves Cremades3. Junta Directiva.Vocalía de Publicaciones 1 CEHISPRA. Sevilla. 2CENTRO MÉDICO TEKNON. Barcelona 3.Hospital General Universitario de Alicante. Alicante Una de las razones de pertenecer a bolsa de trabajo y una asesoría legal deseable que personas entusiastas y una Sociedad, Asociación o Colegio serían muy útiles. Si bien es cierto comprometidas siguieran portando el profesional es sentirte cerca de tus que ASEBIR no es un Colegio testigo. Por ello, es casi incomprensi- colegas para poder compartir intere- Profesional. ble la falta de asistencia en la última ses, comentar dudas, aprender, estar Asamblea general. Se han hecho al día, que tus derechos sean defendi- Actualmente, tenemos el honor de importantes logros y se está trabajan- dos y sentirte respaldado. Quizás por pertenecer a la Junta Directiva y tra- do para conseguir buenas oportunida- todo ello nació ASEBIR, seguro que bajar en la Vocalía de Publicaciones, des para todos. Es bastante frustrante sus fundadores no sabían que iba a la Revista, lo cual es un privilegio. Y que los asociados no muestren inte- crecer tanto y a tener su propio peso es desde esta perspectiva que les rés. Si el fallo fue de la hora y lo apre- específico en la sociedad científica. pediríamos a los socios de ASEBIR tado de la Jornada, sería muy útil que Hoy por hoy se han conseguido una mayor colaboración con la Revista se hiciese constar para que en próxi- muchas cosas y seguro que aún podre- ya que la calidad de los trabajos publi- mas Asambleas este hecho se tenga mos conseguir más. cados, la participación en Debate y la en cuenta. puesta al día en Formación ¿Qué esperas de ASEBIR? En parte Continuada hacen de nuestra revista En resumen, esperamos que ASE- ya está contestado, pertenecer a una un escaparate de la salud de nuestra BIR siga adelante luchando porque se sociedad dinámica, que nos permita asociación. Así como con la página conozca y reconozca nuestro trabajo estar al día, información actualizada web que debería ser visitada con como embriólogos clínicos y que todos sobre congresos, cursos, jornadas, mayor asiduidad, y sea dicho de paso, colaboremos por una asociación sana conexión con nuestros colegas existe un Foro en el que hay muy poca y dinámica. mediante la página web, la revista, participación. realización de cursos y jornadas reali- zados por miembros de y para ASE- Hemos recibido una asociación que BIR. Asimismo, la creación de una ya ha cumplido sus 10 años y sería
    • I N M E M O R I A N Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 31 In memoriam: A Esther Generalmente uno escribe en las secciones de obituarios sobre el fallecimiento de sus maestros o jefes, pero hoy me toca hablar de la muerte de una compañera: Esther González Lobo. Fallecida el 20 de septiembre de 2005 a los 30 años, dejando el recuerdo de una mujer que quiso por encima de todo ser feliz. Licenciada en Farmacia por la Universidad de Granada, Embrióloga Becaria de la Fundación Virgen de las Nieves de Granada y Miembro del comité científico del II Congreso de ASEBIR. Muchos socios de ASEBIR la recordaran por su participación en este Congreso, pero quizá no sepan que su esfuerzo y trabajo fue un elemento clave en su organización., y que gran parte de las felicitaciones que recibi- mos por su organización eran para ella. Nunca imaginé la tristeza que queda cuando se pierde a una persona a la cual has enseñado tus vicios y virtudes en el laboratorio de reproducción, que has regañado y felicitado por las malas y buenas rachas de “G” (gestaciones), con la que has firmado artículos, libros y comunicaciones, con la que has hecho planes laborales, que has visto saltar de alegría por sus primeros embarazos, y por su primer oferta de trabajo como embrióloga. Nunca imaginé que aquella recién licenciada que hace ahora 5 años vino a solicitar ser becaria de la Unidad de Reproducción, iba con el tiempo a ser una gran amiga y compañera, que con su sinceridad y espontaneidad expresaba su opinión en las sesiones clínicas, muchas veces discrepantes de la mía. Hoy me gustaría hablar de sus logros profesionales, pero lamentablemente el destino no le dio tiempo para alcanzarlos, pero si nos permi- tió vislumbrar que hubiera llegado donde hubiera querido y que el único limite a su carrera profesional sería el que ella se hubiera marcado. Ejemplo de ello fue su participación como docente en el curso de reproducción de nuestra Unidad durante todo el tiempo que duró su enfermedad, a pesar de los duros y agotadores trata- mientos que recibió. Creo que ASEBIR se va haciendo mayor. Nosotros que estamos acostumbrados a trabajar con la vida en sus primeras etapas, debemos también ir aprendiendo a lidiar con los últimos coletazos de ésta. Gracias por estos 5 maravillosos años. José Antonio Castilla
    • F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A Elia Dina Galo et al. Cambios de expresión del receptor de... 32 CAMBIOS DE EXPRESIÓN DEL RECEPTOR DE ANDRÓGENOS EN RELACIÓN CON LA SUBFERTILIDAD DEL VARÓN Function of androgen receptor, immunoexpression in normal and infertile men. Elia Dina Galo1, Pilar González-Peramato2, Roald Gómez-Pérez3, Manuel Nistal4, Javier Regadera5 Departamento de Morfología Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua-León. 2Servicio de Anatomía Patológica. Hospital Universitario de 1 Guadalajara. Universidad de Alcalá. 3Unidad de Endocrinología, Hospital Universitario de Los Andes Mérida, Venezuela. 4Departamento de Anatomía Patológica. Hospital Universitario La Paz. Madrid. 5Departamento de Anatomía Histología y Neurociencia de Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de Madrid. RESUMEN:La producción de testosterona en los humanos se inicia alrededor de las semanas 8a y 9a de gestación. Este es un evento crucial para el desarrollo sexual primario en un embrión 46,XY (masculinización), y para el normal desarrollo sexual secundario en la pubertad (virilización). La testosterona además es esencial para mantener los caracteres sexuales secundarios en la vida adulta y para iniciar y preservar la espermatogénesis. Las acciones de los andrógenos se cumplen por medio del recep- tor de andrógenos (RA). La unión de los andrógenos a su receptor induce un cambio estructural en el RA, convirtiéndolo de un estado inactivo a su forma activa. En el testículo humano la inmunoexpresión del RA se ha detectado exclusivamente en el núcleo de células de Sertoli, en las células de Leydig y en las células mioides peritubulares. La función de estas células está estrecha- mente relacionada a la concentración y expresión del RA. Mutaciones en el RA ocasionan alteraciones en la acción de los andró- genos, afectando la función endocrina a nivel testicular y de otros órganos diana, comprometiendo además la función reproduc- tiva. El significado de la expresión del RA en la patología testicular funcional congénita y adquirida del testículo humano no está aún bien establecido. En la presente revisión se evalúan los diferentes patrones de expresión inmunohistoquímica del RA repor- tados en el testículo de hombres normales y en pacientes con patología testicular, y se valora el significado funcional de las alteraciones histológicas y moleculares del RA en relación con la disfunción de la fertilidad en estos pacientes. PALABRAS CLAVE: Receptor de andrógenos. Testículo, Infertilidad. ABSTRACT:Testosterone production begins at weeks 8 to 9 of gestation in the human. It is a critical event for primary male sexual development in a 46,XY embryo (masculinization), and for normal secondary sexual development at puberty (virilization). Testosterone also is essential to maintain the secondary sexual characters during adulthood, and for the initiation and preserva- tion of spermatogenesis. The androgen actions are mediated by the androgen receptor (AR). Upon binding of androgens to its receptor, the AR undergoes a conformational change that converts it from an inactive state to its active DNA-binding state. In the human testis, the AR immunoexpression has been detected exclusively in the Sertoli cells nuclei, in the Leydig cells, and in the peritubular myoid cells. These cells function have a strong relation with the AR concentration and expression. Mutations of the AR results in alteration of androgens actions, affecting the endocrine function at the testicular level and in other target organs, affecting also the reproductive function. The meaningful of the AR expression in the congenital and acquired functional testicu- lar pathology, has not been established yet. In this review different immunohistochemical expression patterns of the AR, reported in the testis from normal men, and from patients with testicular pathology are evaluated; also the functional significance from the histological and molecular alterations of the AR are evaluated, in relation with the fertility dysfunction of these patients. KEY WORDS: Androgen receptor, Testis, Infertility. INTRODUCCIÓN andrógenos (RA) (Brinkmann, 2001). la esteroidogénesis (Vornberg et al., En el testículo humano, la inmunoex- 1994; van Roijen et al., 1995; Zhou Los andrógenos son hormonas este- presión del RA se observa en las célu- et al., 1996). roideas importantes para el desarrollo las de Sertoli, células mioides peritu- fenotípico masculino; tienen un papel bulares, células de Leydig, y células Recientemente, el estudio del RA muy importante durante la diferencia- periarteriolares; pero no existe inmu- ha adquirido singular importancia, ción masculina, el desarrollo y mante- nomarcaje para el RA en los diferentes sobretodo en pacientes con cáncer de nimiento de los caracteres sexuales tipos de células germinales (Van próstata, ya que se han detectado secundarios. Los andrógenos son Roijen et al., 1995; Suárez-Quian et algunas mutaciones en una propor- imprescindibles para la iniciación y al., 1999). El RA de los núcleos de las ción pequeña de estos pacientes mantenimiento de la espermatogéne- células de Sertoli participa activamen- (Newmark et al., 1992; Gaddipati et sis. Las acciones de los andrógenos te en los mecanismos de regulación al., 1994). Sin embargo, niveles de están mediadas por el receptor de paracrina entre la espermatogénesis y inmunoexpresión de proteínas del RA
    • F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 33 son similares en tumores prostáticos dencia que la unión de los andrógenos pacientes y varía entre 38 y 75 unida- dependientes de andrógenos a su receptor es importante para man- des de repetición (Nance, 1997). (Bonaccorsi et al., 2003; Denmeade tener los niveles del RA, ya que esta et al., 2003), además, algunos genes unión produce una estabilización pro- DETECCIÓN INMUNOHISTOQUÍMICA DEL RA que regulan el RA se expresan anóma- tectora del receptor que impide su lamente en el cáncer de próstata degradación (Kemppainen et al., En el tracto reproductivo masculino, (Denmeade et al., 2003), lo que 1992). la inmunolocalización del RA ha sido sugiere que el RA puede participar en observada constantemente en el el crecimiento del cáncer de próstata El gen para la síntesis del RA fue núcleo de las siguientes células: 1) en en la ausencia de andrógenos testicu- secuenciado en el brazo largo del cro- el testículo: células de Sertoli, células lares (Gaddipati et al., 1994; mosoma X (Xq 11-12) (Brown et al., de Leydig, células mioides peritubula- Bonaccorsi et al., 2003; Denmeade et 1989). El sexo masculino solo tiene res, epitelio de la rete testis y epitelio al., 2003). una copia del gen, el cual esta consti- de los conductos rectos; 2) en el epi- tuido por 8 exones y codifica a una dídimo: células ciliadas y principales Mutaciones del RA también se han proteína con una longitud de 910 a de los conductos eferentes, en las asociado con defectos en la viriliza- 919 aminoácidos (Lubahn et al., células principales, basales y apicales ción. En este sentido, diferentes tipos 1989). El exon 1 es el más largo del conducto epididimario; 3) en el de mutaciones se han detectado en el (1.613 pares de bases) y codifica la conducto deferente: células oscuras y gen del RA en individuos con síndro- porción amino terminal de la proteína. apicales estrechas; 4) en la próstata y me de insensibilidad a los andrógenos La función de esta porción del recep- vesículas germinales: células basales (Brinkmann, 2001; Quingley 1995) tor es iniciar la trascripción génica. (de reserva) y principales (secretoras). (Androgen Insensitivity Síndrome, Los exones 2 y 3 codifican el dominio El RA se ha observado también en AIS). Sin embargo, el significado de la de unión al ADN, estructuralmente todas las células musculares lisas, expresión del RA en la patología testi- constituyen los dos dedos de zinc. Las células endoteliales, y fibroblastos cular funcional congénita y adquirida mutaciones en esta región condicio- presentes en el testículo y en la vía del testículo humano no esta aún bien nan un RA no funcional, debido a su espermática. El RA se expresa, aun- establecido. incapacidad para la unión al ADN y que en grado variable, en una amplia En la presente revisión se evalúan los por ende el no inicio de la actividad de variedad de tejidos, incluyendo glán- diferentes patrones de expresión trascripción génica. Los exones del 5 dulas sudoríparas, folículos pilosos, inmunohistoquímica del RA reporta- al 8 codifican la porción del receptor músculo cardíaco, células musculares dos en el testículo de hombres norma- requerida para la unión de los andró- lisas gastrointestinales, células folicu- les y en pacientes con patología testi- genos al receptor, en este dominio es lares de la tiroides, y células de la cor- cular, y se valora el significado funcio- donde se han detectado el mayor teza adrenal (van Roijen et al., 1995; nal de las alteraciones histológicas y número de mutaciones en el RA Suárez-Quina et al., 1999; Quingley moleculares del RA en relación con la (Quigley et al., 1995). Las mutacio- et al., 1995; Sar et al., 1990; disfunción de la fertilidad en estos nes en esta región pueden alterar la Regadera et al, 2001; Janssen et al., pacientes. afinidad para la unión de los andróge- 1994). Solo se han inmunolocalizado nos y/o la especificidad de unión vestigios del RA en el núcleo de las BIOLOGÍA MOLECULAR DEL RA (Wiener et al, 1997). células del músculo liso vasculares Aproximadamente el 20 % de todas (van Roijen et al., 1995; Iwamura et El RA pertenece a una subfamilia de las mutaciones del gen del RA ocurren al., 1994; Skinner, 1991). La inmu- la gran familia de factores de trans- en los codones con residuos de argini- nocoloración del RA citoplasmática no cripción nuclear que incluyen el na (Quigley et al., 1995). se ha observado en estructuras testi- receptor de estrógenos (RE alfa y RE culares humanas (Regadera et al., beta), el receptor de hormonas tiroide- Junto al extremo 5’ del exon 1, en el 2001). as (RT), el receptor de la vitamina D y dominio amino terminal, se encuentra el receptor del ácido retinoico una región repetida de la tripleta CAG, EXPRESIÓN DEL RA EN EL TESTÍCULO (Quingley 1995). La unión de los variable en extensión, con un prome- NORMAL HUMANO andrógenos a su receptor induce un dio de 9-38 repeticiones en la pobla- cambio estructural en el RA que con- ción normal. Esta región repetida den- La intensidad de la inmunocolora- vierte al receptor de un estado inacti- tro del gen constituye un polimorfis- ción del RA es más fuerte en el núcleo vo a su forma activa, favoreciendo su mo, dado que existe variabilidad aléli- de las células de Sertoli que en el unión al ADN (Grino, Griffin & Wilson, ca. Se ha observado que la expansión núcleo de las células peritubulares, 1987). Por analogía con otras hormo- de la tripleta CAG (repeticiones) está aunque en estas últimas la inmunotin- nas esteroideas, la unión de la hormo- asociada con una leve modulación de ción positiva parece ser más constan- na al receptor -ésto es de los andróge- la actividad del receptor androgénico. te que en la célula de Sertoli nos al RA- ocasiona cambios de varias En la atrofia muscular espino bulbar (Regadera et al., 2001). En un estu- proteínas asociadas al receptor, como (enfermedad de Kennedy) la repeti- dio preliminar usando pequeñas biop- la proteína de shock térmico de 90 ción de la tripleta CAG se ha encontra- sias testiculares humanas, no se Kda (Housley et al., 1990). Hay evi- do expandida en la mayoría de los observaron cambios en la inmunoex-
    • F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A Elia Dina Galo et al. Cambios de expresión del receptor de... 34 presión del RA de las células de mayoría de los pacientes con criptor- Müller revela una relación estrecha Sertoli en relación con los diferentes quidia unilateral (Wienner et al., entre la actividad del RA y la acción estadios de la maduración de la esper- 1998). En un estudio reciente se ha de la hormona antimülleriana (AMH). matogénesis (van Roijen et al., 1995). encontrado que el 63% de los pacien- El efecto de la AMH en mediar la Sin embargo, recientemente en un tes con testículos localizados en el regresión del conducto de Müller estudio mucho más amplio emplean- escroto tenían niveles altos del RA, puede requerir interacción sinérgica do piezas completas de testículo mientras que el 85% de los pacientes con el RA (Quigley et al., 1995). humano, obtenidas quirúrgicamente con “mal descenso” testicular los en pacientes con cáncer de próstata, o niveles de RA estaban disminuidos y La mayoría de los cariotipos de durante la autopsia, se han demostra- además en los pacientes con testícu- estos pacientes son 46,XY, aunque do cambios en la intensidad de la los intraabdominales los RA eran muy también se han publicado casos de inmunocoloración del RA de células bajos (Hosie, Wessel and Waag, mosaicismo cromosómico (Griffin and de Sertoli humanas. Estos hallazgos 1999). Sin embargo, otros autores en Wilson, 1980). Mutaciones en el gen sugieren que la función del epitelio pacientes con criptorquidia unilateral del RA que afectan al desarrollo del seminífero muy probablemente se no encontraron anomalías del gen de fenotipo masculino se expresan en relacione directamente con la intensi- RA, por lo que no lo consideran como individuos con carga cromosómica 46 dad de la tinción nuclear del RA. responsable directo del desarrollo de XY (Brinkmann, 2001; Quigley et al., Además, existen ciertas evidencias una criptorquidia aislada (Wienner et 1995). Se han realizado revisiones acerca de que la secreción de deter- al., 1998). amplias de la biología molecular del minadas proteínas de la célula de AIS y, aunque en los pacientes con Sertoli humana que controlan la fun- En los testículos criptorquídicos AIS se han descrito mas de 150 muta- ción del ciclo del epitelio seminífero estudiados después de la pubertad, ciones diferentes (Brinkmann, 2001), están reguladas por el RA (Suárez- las células de Sertoli tipo adultas son cuatro los tipos fundamentales de Quian et al., 1999). Estos hallazgos mostraban una inmunotinción para el mutaciones del RA: 1) mutación pun- son consistentes con la hipótesis que RA de intensidad moderada. En con- tual sencilla consistente en la sustitu- sugiere que la regulación de andróge- traste, la intensidad del inmunomar- ción de un solo aminoácido o en un nos en la espermatogénesis ocurre caje del RA fue menor en células de prematuro paro de la expresión de su exclusivamente a través de las células Sertoli inmaduras y disgenéticas codón; 2) inserción o deleción de de Sertoli -células somáticas testicu- (Regadera et al., 2001). Estos hallaz- nucleótidos; 3) una deleción completa lares-, ya que no se ha demostrado gos pudieran sugerir que los segmen- o parcial del gen, y 4) mutación intró- inmunohistoquímicamente la expre- tos del tubo seminífero con atrofia de nica que afecta a la secuenciación del sión de RA en las células germinales células germinales muestran una dis- ARN del receptor de andrógenos (Suárez-Quian et al., 1999). minución o ausencia de la expresión (Brinkmann, 2001). del RA en las células de Sertoli disge- Las células mioides peritubulares néticas (Regadera et al., 2001). Se han descrito dos formas clínicas participan, en parte, en la regulación de AIS: síndrome de sensibilidad a los androgénica de la espermatogénesis a En el AIS, las mutaciones del gen andrógenos completo (CAIS) y el sín- través de un mecanismo paracrino para el RA condicionan diferentes drome de insensibilidad a los andróge- (Skinner, 1991), mediante la estimu- manifestaciones clínicas (Quigley et nos incompleto (IAIS) (Brinkmann, lación del RA, constantemente pre- al., 1995). El AIS sigue un patrón de 2001; Quigley et al., 1995). sente en el núcleo de las células mioi- herencia ligado al cromosoma X, por des. Paradójicamente, las células de cada madre portadora, hay 1:2 niños En el CAIS, el fenotipo característi- Leydig de testículos humanos exhiben con cariotipo 46 XY que está afectado co consiste en la presencia de genita- una inmunolocalización de RA de y 1:2 niñas portadoras. La incidencia les externos femeninos, una vagina intensidad tenue, y asimismo, un de este síndrome es de 1:20.400 corta y frecuentemente hendida, número apreciable de estas células recién nacidos (Bangsboll et al., ausencia o hipoplasia de estructuras intersticiales parecen ser negativas 1992). En la mayoría de los pacientes derivadas del conducto mülleriano para RA (Regadera et al., 2001). con AIS, los testículos se encuentran (útero y trompas) y del conducto de alojados en la cavidad abdominal y Wolf (vía espermática), ausencia de ALTERACIONES DE LA EXPRESIÓN DEL RA menos frecuentemente en el conducto próstata, desarrollo de tejido mamario EN PATOLOGÍA TESTICULAR inguinal (Barthold et al., 2000); ade- y ausencia de pelos axilares y pubia- más, en la infancia el AIS suele des- nos (Brinkmann, 2001). El estudio Algunas mutaciones del RA se pue- cubrirse durante la exploración de una histológico de las gónadas de estos den encontrar en casos con criptorqui- hernia inguinal (Bnagsboll et al., pacientes con CAIS demuestran cam- dia bilateral asociadas a AIS. Sin 1992). En pacientes postpuberales y bios semejantes en testículos criptor- embargo, la relación criptorquidia fenotípicamente niñas la causa más quídicos, aunque en algunos casos las unilateral con las alteraciones del RA frecuente de consulta es la amenorrea lesiones suelen ser menores (Álvarez- constituyen en la actualidad motivo de primaria. Adicionalmente, en algunos Nava et al., 1997). Sin embargo, los controversia, debido a que mutaciones individuos con AIS y criptorquidia, la cambios histológicos en el testículo del gen de RA no son observadas en la persistencia parcial del conducto de extirpado de pacientes adultos con
    • F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 35 AIS es similar al de algunas criptor- tad a estos pacientes se produce tam- no revelan anomalías de este gen quidias aunque también pueden bién una elevación de los niveles séri- (Isurugi et al., 1996). Es más, defec- semejar testículo inmaduro e incluso cos de testosterona, LH y estradiol tos parciales en la función del RA testículo infantil normal (Morris and (Brinkmann, 2001). Por otro lado, están causados por sustituciones de Mahesh, 1963; Nistal and Paniagua, existe una variante clínica peculiar de aminoácidos del dominio hormonal 1996). Los adenomas de células de AIS denominada enfermedad de activo del RA en la cadena del ADN. Sertoli son frecuentes en los testículos Kennedy en la que se asocia alteracio- Estos defectos parciales funcionales de estos pacientes, aunque se consi- nes del desarrollo neurológico -carac- del gen del RA pueden determinar cla- deraron en publicaciones clásicas terizadas por atrofia bulbar y espinal ramente cambios funcionales pero algunas diferencias histológicas testi- asociada a atrofia muscular- y anoma- también alteraciones cuantitativas en culares entre las formas completa e lías cuantitativas del RA que se rela- la abundancia del receptor (Ávila, incompleta de AIS (Teter and cionan con la severidad de los sínto- Zoppi and McPhaul, 2001). De Boczkowski, 1966; Damjanov, mas del AIS (MacLean HE, 1995) En hecho, mutaciones en el gen del RA Drobnjak and Grizelj, 1971), trabajos todos estos casos de síndrome de son las causas de alteraciones de la posteriores de amplias series de Kennedy existe una correlación entre función del receptor, por lo que muta- pacientes concluyeron que no existían la longitud repetida de CAG y el des- ciones diversas pueden asociarse con diferencias histológicas relevantes en arrollo temprano de enfermedad neu- signos clínicos heterogéneos de AIS los testículos entre los dos tipos de rológica, por lo que se demuestra que (Hiort et al., 1994; Brown, 1995). AIS (Rutgers and Scully, 1991). En esta enfermedad tiene una relación los pacientes con CAIS, los niveles de directa con alteración de la secuencia En pacientes subfértiles con oligo- testosterona basal y después de la del RA (Dejager et al., 2002). Por últi- zoospermia y niveles de gonadotropi- estimulación con HCG (Galli- mo, se ha descrito todo un espectro de nas séricas normales, la intensidad de Tsinopoulou et al., 2003) están eleva- individuos con síntomas intermedios la inmunoexpresión del RA variaba dos en la edad puberal (Brinkmann, de AIS en los que el diagnóstico se sustancialmente entre las biopsias de 2001); mientras que, los niveles basa- descubre en la evaluación de una los diferentes pacientes (van Roijen et les de gonadotropinas pueden ser nor- infertilidad de causa desconocida al., 1995), no encontrándose una males (Galli-Tsinopoulou et al, 2003) (Brinkmann, 2001). Dentro de estas correlación entre la intensidad de la aunque también pueden encontrarse variantes clínicas cabe destacar varios inmunoexpresión del RA en las células niveles elevados de la LH (Galli- estudios de pacientes con hipospadias de Sertoli y en células mioides con Tsinopoulou et al., 2003). Los niveles severas y criptorquidia bilateral en los respecto al grado de maduración de la séricos de testosterona estuvieron que puede existir alteraciones del RA espermatogénesis. Además, los nive- ligeramente disminuidos en los (Holmes, Miller & Baskin, 2004), les de inmunoexpresión del RA en las pacientes adultos y ligeramente eleva- incluidas la mutación puntual en el células de Sertoli y las células mioides dos en los pacientes prepuberales. El exón 8 (Hiort et al., 1994). Sin peritubulares no están regulados nivel de estradiol sérico estuvo ligera- embargo, en la mayoría de los casos directamente por los niveles séricos mente aumentado en todos los de hipospadia no se centraron en de gonadotropinas. Estos resultados pacientes (Regadera et al., 1999). mutaciones específicas, por lo que es indican que la inmunodetección del necesario establecer criterios genéti- RA no se relaciona con la calidad del Histopatológicamente, en los cos que permitan clasificar y tratar epitelio espermático en pacientes con pacientes adultos con AIS se ha correctamente estos casos (Hiort et oligozoospermia (van Roijen et al., encontrado una disminución del volu- al., 1994). Todo este espectro de 1995; Singh et al., 2006). Asimismo, men testicular y una alternancia de enfermedades permiten concluir que en otro estudio no se han encontrado áreas modulares con áreas difusas. El las variaciones fenotípicas en los cambios evidentes de inmunoexpre- diámetro tubular estaba significativa- defectos moderados del RA pudieran sión del RA como un marcador de fun- mente disminuido y la densidad del no detectarse en individuos adultos ción testicular o con el grado de volumen de los túbulos seminíferos con AIS durante la exploración clínica hipospermatogénesis, ni tampoco con estaba aún más reducida (Galli-Tsinopoulou et al., 2003). Pero el grado de diferenciación de las célu- (Jockenhovel et al., 1993). los datos aún no son claros, ya que las de Sertoli (Saunders et al., 1996; Característicamente, en los testículos numerosos estudios han demostrados Jarow and Zirkin, 2005; Aiman and de los pacientes con AIS no se encon- una considerable heterogeneidad en Griffin, 1982). Pero los datos aún no traron células germinales ni tampoco la expresión del RA, dependiendo de son concluyentes ya que otros autores células de carcinoma in situ. si se trata de pacientes con CAIS o han medido la inmunoexpresión del con IAIS; esta diferente inmunoexpre- RA en fibroblastos de piel genital, En el IAIS, los cambios fenotípicos sión también ocurre cuando se estu- observando que la resistencia a los son muy diversos, aunque en la mayo- dian biopsias de cáncer de próstata y andrógenos puede ser la causa de una ría de estos pacientes predomina la en biopsias testiculares (Ávila, Zoppi fracción importante (40% o más) de apariencia femenina con genitales and McPhaul, 2001). En los pacien- infertilidad idiopática, debida a azoos- ambiguos, mientras que en otros tes con IAIS, el estudio de la secuen- permia o severa oligozoospermia casos existe un predominio del fenoti- ciación directa de los exones que (Saunders et al., 1996); por lo que en po masculino y cuando llega la puber- codifican el gen de RA generalmente al actualidad se están diseñando
    • F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A Elia Dina Galo et al. Cambios de expresión del receptor de... 36 Fig. 1. Intensa Expresión del Receptor de Andrógenos en los Fig. 2. Tubos seminíferos con atrofia moderada en un hombre núcleos de las células de Sertoli en un hombre joven con de edad avanzada. Nótese la conservación de la expresión del espermatogénesis normal. Receptor de Andrógenos. Fig. 3. Distribución irregular e intensidad variable de la expre- Fig. 4. Biopsia de testículo criptorquídico extirpado después sión del Receptor de Andrógenos en un caso de criptorquidia de la pubertad. Tubo seminífero con crecimiento puberal y bilateral postpuberal con incompleta diferenciación de célu- moderada expresión del Receptor de Andrógenos en sus célu- las germinales. las de Sertoli (izquierda). En la vecindad se observan varios tubos seminíferos de tipo infantil (derecha) con mínima o ausencia de expresión del Receptor de Andrógenos en las células de Sertoli disgenéticas.
    • F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 37 modelos de ratones con mutaciones En hombres infértiles no se han Brinkmann AO. Molecular basis of CAG del RA con el fin de evaluar el encontrado cambios evidentes de androgen insensitivity. Mol Cell grado de diferenciación de la células inmunoexpresión del RA que lo con- Endocrinol, 2001; 179:105-9. de Sertoli en relación a alteraciones viertan en un marcador de función de la espermatogénesis (Yu et al., testicular, y todavía es prematuro en Brown CJ, Goss SJ, Lubahn DB, 2006). patología reproductiva humana prede- Joseph DR, Wilson EM, French FS, cir el grado de hipospermatogénesis o Willard HH. Androgen receptor el grado de desdiferenciación de las locus on the human X chromosome: CONCLUSIONES células de Sertoli solo teniendo en regional localization to Xq11-12 cuenta las alteraciones de expresión and description of a DNA polymor- El RA pertenece a la superfamilia de génica e histopatológica del RA, dado receptores intranucleares, cuya res- phism. Am J Hum Genet. 1989; que hasta la actualidad el grado de puesta final se lleva a cabo a través de 44:264-9. expresión del RA no se relaciona con su unión con el ADN. Está estrecha- las alteraciones de diferenciación del mente relacionado con la diferencia- Brown TR. Human androgen insensiti- epitelio espermático presentes en los ción sexual del varón. La activación vity syndrome. J Androl, 1995; pacientes subfértiles. normal del RA permite un buen des- 16:299-303. arrollo y diferenciación de los órganos internos y externos masculinos. Damjanov I, Drobnjak P, Grizelj V. 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A comprehensive endocri- zación del RA citoplasmática no se ha androgen insensitivity syndrome: ne description of Kennedy’s disease observado en estructuras testiculares clinical and anatomopathological revealing androgen insensitivity lin- humanas. findings in 23 patients. Genet ked to CAG repeat length. J Clin Couns, 1997; 8:7-12. Endocrinol Metab, 2002; 87:3893- Mutaciones en el RA condicionan 901. alteraciones en la acción de los andró- Ávila DM, Zoppi S, McPhaul MJ. The genos, afectando la función endocrina androgen receptor (AR) in syndro- Denmeade SR, Sokoll LJ, Dalrymple a nivel testicular y de otros órganos S, Rosen DM, Gady AM, Bruzek D, mes of androgen insensitivity and in diana, comprometiendo además la Ricklis RM, Isaacs JT. Dissociation prostate cancer. J Steroid Biochem función reproductiva. Algunas muta- between androgen responsiveness Mol Biol, 2001; 76:135-42. ciones del RA están implicadas en for malignant growth vs expression casos con testículos criptorquídicos. of prostate specific differentiation La relación de las alteraciones del RA Bangsboll S, Qvist I, Lebech PE, markers PSA, hK2, and PSMA in con el desarrollo de un testículo no Lewinsky M. Testicular feminization human prostate cancer models. descendido unilateralmente es aún syndrome and associated gonadal Prostate, 2003; 54:249-57. motivo de controversia, debido a que tumors in Denmark. Acta Obstet mutaciones del gen de RA no son Gynecol Scand, 1992; 71:63-6. Gaddipati JP, McLeod DG, Heidenberg observadas en la mayoría de los HB, Sesterhenn IA, Finger MJ, Moul pacientes con criptorquidia unilateral. Barthold JS, Kumasi-Rivers K, JW, Srivastava S. Frequent detec- El AIS es la manifestación clínica más Upadhyay J, Shekarriz B, Imperato- tion of codon 877 mutation in the evidente de mutaciones en el RA. 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    • F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A Elia Dina Galo et al. Cambios de expresión del receptor de... 38 Griffin JE; Wilson JD. The syndromes tribution in formalin-fixed, paraffin- repeat diseases. Brain Pathology, of androgen resistance. New Engl J embedded sections after microwave 1997; 7:881-900. Med, 1980; 302:198-209. treatment. J Histochem Cytochem, 1994; 42:783-8. Newmark JR, Hardy DO, Tonb DC, Grino PB, Griffin JE, Wilson JD. Carter BS, Epstein JI, Isaacs WB, Transformation of the androgen Janssen P, Brinkman AO, Boersma Brown TR, Barrack ER. Androgen receptor to the deoxyribonucleic WJ, van der Kwast Th. receptor gene mutations in human acid-binding state: studies in homo- Immunohistochemical detection of prostate cancer. Proc Natl Acad Sci genates and intact cells. the androgen receptor with mono- USA, 1992; 89:6319-23. Endocrinology, 1987; 120:1914- clonal antibody F39.4 in routinely 20. processed, paraffin-embedded Nistal M, Paniagua R. Non-neoplastic human tissues after microwave pre- diseases of the testis. In: Bostwick Hiort O, Klauber G, Cendron M, treatment. J Histochem Cytochem, DG, Eble JN, eds. Urologic Surgical Sinnecker GH, Keim L, Schwinger 1994; 42:1169-75. Pathology. St Louis: Mosby Inc; E, Wolfe HJ, Yandell DW. Molecular 1996: 496-5132. characterization of the androgen Jarow JP, Zirkin BR. The androgen receptor gene in boys with hypospa- microenvironment of the human tes- Quigley CA, De Bellis A, Marschke KB, dias. Eur J Pediatr, 1994; 153:317- tis and hormonal control of sperma- El-Awady MK, Wilson EM, French 21. togenesis. Ann Y Acad Sci, 2005; FS. Androgen receptor defects: his- 1061:208-20. torical, clinical, and molecular pers- Holmes NM, Miller WL, Baskin LS. pective. Endocrine Rev, 1995; Lack of defects in androgen produc- Jockenhovel, Rutgers JK, Mason JS, 16:271-321. tion in children with hypospadias. J Griffin JE, Swerdloff RS. Leydig cell Clin Endocrinol Metab, 2004; neoplasia in a patient with Regadera J, Martínez-García F, 89:2811-6. Reifenstein syndrome. Exp Clin González-Peramato P, Serrano A, Endocrinol, 1993; 101:365-70. Nistal M, Suárez-Quian C. Androgen Hosie S, Wessel L, Waag KL. Could receptor expression in sertoli cells testicular descent in humans be Kemppainen JA, Lane MV, Sar M, as a function of seminiferous tubule promoted by direct androgen stimu- Wilson EM. Androgen receptor phos- maturation in the human cryptor- lation of the gubernaculum testis? phorylation, turnover, nuclear trans- chid testis. J Clin Endocrinol Metab, Eur J Pediatr Surg, 1999; 9:37-41. port, and transcriptional activation. 2001; 86:413-21. Housley PR, Sanchez ER, Danielsen Specificity for steroids and antihor- M, Ringold GM, Pratt WB. Evidence mones. J Biol Chem, 1992; Regadera J, Martínez-García F, that the conserved region in the ste- 267:968-74. Paniagua R, Nistal M. Androgen roid binding domain of the glucocor- insensitivity syndrome. Arch Pathol ticoid receptor is required for both Lubahn DB, Brown TR, Simental JA, Lab Med, 1999; 123:225-34. optimal binding of hsp90 and pro- Higgs HN, Migeon CJ, Wilson EM, tection from proteolytic cleavage. A French FS. Sequence of the Ruizeveld de Winter JA, Trapman J, two-site model for hsp90 binding to intron/exon junctions of the coding Vermey M, Mulder E, Zegers ND, the steroid binding domain. J Biol region of the human androgen van der Kwast ThH. Androgen Chem, 1990; 265:12778-81. receptor gene and identification of a receptor expression in human tis- point mutation in a family with com- sues: an immunohistochemical Isurugi K, Hasegawa F, Shibahara N, plete androgen insensitivity. Proc study. J Histochem. Cytochem, Mori H, Shima H, Harada N, Nat Acad Sci USA, 1989; 86:9534-8. 1991; 39:927-36. Hasegawa T, Honma S, Imasaki K, Nawata H. Incomplete testicular MacLean HE, Choi WT, Rekaris G, feminization syndrome: studies on Warne GL, Zajac JD. Abnormal Rutgers, JL; Scully, RE. The androgen androgen receptor (AR) function, AR androgen receptor binding affinity insensitivity syndrome (testicular gene analysis, and aromatase activi- in subjects with Kennedy’s disease feminization): a clinocopathologic ties at puberty and long-term obser- (spinal and bulbar muscular study of 43 cases. Int J Gynecol vations of clinical and hormonal fea- atrophy). J Clin Endocrinol Metab, Pathol, 1991; 10:126-44. tures from infancy to puberty. 1995; 80:508-16. Endocr J, 1996; 43:557-640. Sar M, Lubahn DB, French FS, Wilson Morris JM, Mahesh VB. Further obser- Iwamura M, Abrahamsson PA, vations on the syndrome “Testicular EM. Immunohistochemical localiza- Benning M, Cockett AT, di Feminization”. Am J Obstet tion of the androgen receptor in rat Sant´Agnese PA. Androgen receptor Gynecol, 1963; 87:731-48. and human tissues. Endocrinology, immunostaining and its tissue dis- Nance MA. Clinical aspects of CAG 1990; 127:3180-6.
    • F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 39 Saunders, PTK, Millar, MR, Majdic G, Teter J, Boczkowski, K. Testicular Roth DR, Lamb DJ. Androgen recep- Bremner WT, McLaren TT, Grigor feminization with and without clito- tor gene alterations are not associa- KM, Sharpe RM. Cellular and ral enlargement. Am J Obstet ted with isolated cryptorchidism. J Molecular Regulation of Testicular Gynecol, 1966; 94:813-9. Urol, 1998; 160:863-5. Cells. In: C. Desjardins Ed. Proceedings of the XIIIth Testis Van Roijen JH, Van Assen S, van der Wiener JS, Teague JL, Roth DR, Workshop on Cellular and Molecular Kwast Th H, de Rooij DG, Boersma Gonzales ET Jr, Lamb DJ. Molecular Regulation of Testicular Cells spon- W, Vreeburg J, Weber R. Androgen biology and function of the andro- sored Serono Symposia USA, New receptor immunoexpression in the gen receptor in genital develop- York: Springer; 1996: 213-220. testes of subfertile men. J Androl, ment. J Urol, 1997; 157:1377-86. 1995; 16:510-6. Singh R, Deepa SR, Madhavi S, Gupta Yu Z, Dadgar N, Albertelli, Scheller A, NJ, Chakravarty B, Singh L, Van Roijen JH, Van Assen S, Van Der Albin RL, Robins DM, Lieberman Thangaraj K. Male infertility: no evi- Kwast TH, De Rooij DG, Boersma J, AP. Abnormalities of germ cell dence of involvement of androgen Vreeburg JT, Weber RF. Androgen maturation and Sertoli cell cytoske- receptor gene among Indian men. J receptor immunoexpression in the leton in androgen receptor 113 CAG Androl, 2006; 27:102-5. testes of subfertile men. J Androl, knock-in mice reveal toxic effects of 1995; 16:510-6. the mutant protein. Am J Pathol, Skinner MK. Cell-cell interactions in 2006; 168:195-204. the testis. Endocr Rev, 1991; Vornberger W, Prins G, Musto NA, 12:45-77. Suárez-Quian C. Androgen receptor Zhou X, Kudo A, Kawakami H, Hirano distribution in rat testis: new impli- H. Immunohistochemical localiza- Suárez-Quian C, Martínez-García F, cations for androgen regulation of tion of androgen receptor in mouse Nistal M, Regadera J. Androgen spermatogenesis. Endocrinology, testicular germ cells during fetal receptor distribution in adult human 1994; 134:2307-16. and postnatal development. Anat testis. J Clin Endocrinol Metab, Rec, 1996; 245:509-18. 1999; 84:350-8 Wiener JS, Marcelli M, Gonzales ET Jr,
    • N O T I C I A S Noticias 40 NOTICIAS 1. Resultados de la votación para la elección / reelección de miembros de la Junta Directiva de ASEBIR Candidata/o votos Begoña Arán Corbella 72 Nieves Cremades Hernández 75 Esther Fernández García 52 Mark Grossmann i Camps 82 Mª Victoria Hurtado de Mendoza y Acosta 66 Fernando Marina Reguero 64 Jorge Ten Morro 65 Acorde con los estatutos la composición de la Junta Directiva resultante de las elecciones queda como sigue: Cargo dentro de la Junta Directiva Presidente Antonio L. González-Utor Vicepresidenta Carmen Ochoa Marieta Secretaria y Vocalía de Congresos Begoña Arán Corbella Tesorero Manuel Ardoy Vilches Vocalía de Congresos Mª José de los Santos Molina Vocalía de Docencia y Formación Jorge Martín Cuadros Fernández Vocalía de Docencia y Formación Juan Manuel Moreno García Vocalía de Página WEB Jorge Ten Morro Vocalía de Publicaciones Mª Victoria Hurtado de Mendoza y Acosta Vocalía de Publicaciones Nieves Cremades Hernández Vocalía de Publicaciones Mark Grossmann i Camps Vocalía de Relaciones Públicas Fernando Marina Rugero
    • N O T I C I A S Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 41 2. III CONGRESO ASEBIR Apreciados amigos y compañeros: Ya ha pasado suficiente tiempo desde nuestro congreso como para hacer un repaso de todo lo que allí aconteció. Y nuestra conclusión, con vuestro permiso, no ha podido ser más positiva. Hemos segui- do creciendo en asistencia (260 inscripciones) y presentación de trabajos (14 Ponencias; 108 Comunicaciones presentadas, de las cuales 32 como comunicación oral) y una conferencia magistral a cargo del Dr. Antonio Bernad (Investigador del CSIC, Departamento de Inmunología y Oncología, Centro Nacional de Biotecnología, Madrid). Un año más, se otorgó el Premio EMB a la mejor comuni- cación que este año fue entregado al trabajo: “Expresión de ZP3 Recombinante Humana Biológicamente activa en células CHO” que firmaban Mª Jiménez-Movilla y col., del Departamento de Biología Celular de la Universidad de Murcia. Vivimos momentos emotivos al nombrar Socia Honorífica de nuestra sociedad a Anna Veiga. La entrega del galardón, así como nuestro reconocimiento a su dila- tada labor profesional y arduo trabajo en ASEBIR fue realizado por nuestro Presidente, Antonio L. González-Utor. Hemos contado con la colaboración y esponsorización de las principales empresas relacionadas con nuestra especialidad (12 Stands instalados y 20 Entidades colaboradoras y/o expositoras), nuestro campo científico parece no tener límite... ¿Qué más podemos pedir? Bueno, si, algo querría pediros, y es que no vuelva a pasar lo que sucedió en la reunión de la Asamblea. La gente de la junta está tra- bajando muy duro por todos nosotros (estar seguros de ello) y no se merecen el desplante que les hici- mos, ni contribuye en absoluto a la buena salud de nuestra asociación. Pero broncas aparte, volviendo al hilo de la carta, espero que nosotros, el comité organizador, os hayamos hecho disfrutar tanto en lo científico como en lo lúdico, con actuaciones originales como Los tambores y el de la cara pintada y con Salvatore y el morro que le echaba. (¿habéis visto las fotos?), y que en estos dos días de convivencia hayáis aprendido y disfrutado a partes iguales con ese “punto” de cordialidad e informalidad que hemos intentado darle. Y sobre todo, espero veros a todos en Bilbao. Y en la Asamblea. Y... ¿Qué más puedo deciros? Que ha sido un placer trabajar para vosotros Antonio Urries López Presidente del Comité Organizador ASEBIR 2005
    • G A L E R Í A P A R A E L R E C U E R D O Galería 42 3. GALERÍA PARA EL RECUERDO Gran participación de socios en presentación de trabajos y asistencia. La sala de Pósters, estratégicamente situada, estuvo muy animada.
    • G A L E R Í A P A R A E L R E C U E R D O Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 43 El título de Socia Honoraria recayó en nuestra querida Anna Veiga. El actual Presidente, Antonio L. González-Utor, hizo entrega del premio en reconoci- Un año más contamos con el Premio otorgado por EMB a la mejor comu- nicacción. En imagen izquierda a derecha, el artífice de este premio Sergio Oliveró, la gana- dora Mª Jiménez, el Presidente de ASEBIR, Antonio L. González-Utor y el Presidente del Comité Organizador, Antonio Urries. Aprovechamos estas líneas para agradecer Además de unas jornadas de trabajo intenso, hubo tiempo para saludar a los amigos. Todos los eventos estuvieron muy bien organizados y causaron sensación en los invitados.
    • G A L E R Í A P A R A E L R E C U E R D O Galería 44 CENA DE GALA La cena de la gala fue el colofón a unos días intensos de trabajo. La liberación de energía se hizo patente en las ganas de cantar y bailar
    • A G E N D A Agenda 46 AGENDA The 22nd Annual Meeting of the European Society for Human Reproduction (ESHRE) June 18-21, 2006. Prague, Czech Republic. ESHRE congress: www.eshre.com The Second EMBIC Summer School “Molecular Mechanisms of Implantation” Pécs, Hungary July 1-4, 2006 Contacto: Prof. Julia Szekeres-Bartho e-mail: szjuli@main.pote.hu Web-site: www.embic.org Basic hESC Practical Training Course University of Sheffield, UK July 4-6, 2006 Centre for Stem Cell Biology, University of Sheffield, UK. Contacto: Miss Claire Herridge e-mail: c.herridge@sheffield.ac.uk Web-site: http://www.cscb.shef.ac.uk/Training1/SUMMERSCHOOL200511
    • A G E N D A Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 47 CSCB 4th International Sympsoium, “Progress Towards Cell Therapies” University of Sheffield, UK July 14th, 2006 Centre for Stem Cell Biology, University of Sheffield, UK. Contacto: Miss Claire Herridge e-mail: c.herridge@sheffield.ac.uk Web-site: http://www.cscb.shef.ac.uk/Training1/InternationalOneDaySymposium/ 39th Annual Meeting of the Society for the Study of Reproduction Nebraska, USA July 29, 2006 - August 1, 2006 Qwest Center Omaha, Omaha, Nebraska, U.S.A. Contacto: Judith Jansen e-mail: ssr@ssr.org Web-site: http://www.ssr.org Reproduction and malignant disease Barcelona, Spain 15-16 September, 2006 Contacto:Serono Symposia International Foundation E-mail: info@seronosymposia.org Website: http://www.seronosymposia.org/reproductive/event_descrip.ihtml?id=262
    • A G E N D A Agenda 48 8th World Congress on Controversies in Obstetrics, Gynecology & Infertility (COGI) Sptembre 14-17, 2006. Salvador - Bahia, Brasil. COGI congress: cogi_reg@comtecint.com 10th International Symposium on Spermatology 17 a 22 septiembre 2006. Madrid, España Technical Secretariat: Unicongress - Atlanta Viajes e-mail: secretariat@spermadrid2006.org Web: http://www.spermadrid2006.org Second Asia-Pacific Forum on Andrology Shanghai, China October 19-23, 2006 Contacto:Ms Hui Zhang e-mail: apfa@sibs.ac.cn Web-site: http://2apfa.asiaandro.com/login.asphttp://www.conference.ac.cn/apfa.htm ONLINE SUBMISSION. American Society for Reproductive Medicine 62nd Annual Meeting October 21-25, 2006 New Orleans, Louisiana Web-site: http://www.asrm.org/whatsnew.html
    • A G E N D A Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 49 ART in the 21st Century: A Time for Reflection and New Horizons - Part 2 Amsterdan, The Netherlands November 10-11, 2006 Contacto: William Schoolcraft E-mail: info@seronosymposia.org Web-site: http://www.seronosymposia.org/reproductive/event_descrip.ihtml?id=288 4th International Workshop on Epididymis 04 a 07 Diciembre 2006 Clermont-Ferrand, Francia Joel Drevet e-mail: joel.drevet@univ-bpclermont.fr
    • INFORMACIÓN PARA LOS AUTORES Información para los autores y normas de publicación 50 Información para los Autores Normas de Publicación NORMAS DE PUBLICACIÓN jos se indicará, en el siguiente orden: título 1993;59:418-423. en castellano; título en inglés; nombre y un B) Artículo de revista con más de La revista ASEBIR es una publicación apellido de cada uno de los autores y nom- 6 autores: del ámbito de la Biología de la bre completo del centro, con la dirección Reproducción abierta a considerar cuantos para correspondencia, incluido correo elec- Marrama P, Baraghini GF, Carani C, trabajos afines a esta área de conocimien- trónico. En la segunda página se incluirá Celani MF, Giovenco P, Grandi F, et al. to puedan adaptarse a uno de los siguien- un resumen y las palabras clave (ambos en Further studies on the effect of pentoxifyl- tes apartados: Artículos Originales; Temas castellano e inglés). La estructura de los line on sperm count and sperm movility in de Actualización o Debates. Además, la manuscritos preferentemente deberá orga- patients with idiopathic oligo-asthenozoos- revista ASEBIR da cabida a la actualidad nizarse en los apartados de Introducción, permia. Andrologia 1985;17:612-616. en sus secciones de Noticias y Agenda. Material y Métodos, Resultados, Discusión, Agradecimientos, Bibliografía, Tablas y C) Libro completo: La revista ASEBIR se publica semes- Gráficas. Las tablas se numerarán con tralmente por lo que es indispensable que números romanos y las figuras con núme- Colson JH, Armour WJ. Spermatogéne- los escritos para las secciones de Debates, ros arábigos. Los pies de figura se imprimi- sis. 2º ed. Londres: Delmar Publishers; Noticias y Agenda sean enviados antes del rán en hoja aparte y cada figura llevará 1996. 30 de Abril para el primer número del año escrito en el dorso su numeración. (Junio) y antes del 15 de Noviembre para D) Capítulo de libro: el segundo número del año (Diciembre). Las citas bibliográficas deben ser directas, consignándose en el texto el Siracusa G, Felici M, Salustri A. Los originales deben enviarse a: nombre del autor o de los dos autores y Meiotic maturation of the mammalian Secretaría de ASEBIR, C/ Fernández Caro el año (ej.: Smith, 1993 o bién Smith oocyte. En: Ach RH, Balmaceda JP, 44, Oficina 2. 28027 (Madrid). Se reco- and Michigan, 1997) y si son más de Johnston I, editors. Gamete Physiology. mienda utilizar sobres que protejan ade- dos autores consignándose el primero 2º ed. New York: Raven Press; 1990. p. cuadamente el contenido informático. seguido de "et al.," (ej.: Smith et al., 129-144. 1998). Para agrupar varias citas se Manuscritos: Todos los trabajos remiti- encadenarán con ";" (Ej: Smith and E) Comunicación a congreso: dos deberán ser inéditos y se presentarán Michigan, 1997; Smith et al., 1998). en un manuscrito original y dos copias Bengston S, Solheim. Hatching assis- impresas, a doble espacio en hojas din A4, Las referencias bibliográficas se presen- ted. XXII Meeting of European Society of así como también en soporte informático. taran en la sección de Bibliografía por Human Reproduction and Embriology; Se acompañarán de una carta de presenta- orden alfabético siguiendo las normas del ción en la que se solicite su valoración y se International Committee of Medical 1997 Jun20-23; Roma, Italia. p. 1561-2. indique la sección donde se desea su Journal Editors 5th edition (dichas normas publicación. En esta carta debe constar se pueden consultar en JAMA 1997; Para la sección de debate se acepta- claramente que el trabajo no ha sido publi- 277:927-934). Los nombres de las revis- rán textos (de no más de dos hojas din cado previamente y que todos los autores tas se abreviarán de acuerdo con el estilo A4 a 30 líneas, incluidas un máximo de están de acuerdo en su contenido y ceden usado en el Index Medicus (que se puede cinco citas bibliográficas y dos figuras si los derechos de su publicación a ASEBIR. consultar en la List of Journals Indexed las hubiere), que reflejen la opinión de Para la reproducción de material ya edita- que se incluye todos los años en el núme- los diferentes firmantes sobre el tema de do es necesaria la autorización expresa de ro de enero). A continuación se dan un discusión que se propondrá en el núme- los propietarios del copyright. ejemplo de formato de citas bibliográficas: ro de la revista anterior. Para artículos originales y temas de A) Artículo de revista Para las secciones de noticias y agenda actualización se sugiere una extensión no con menos de 6 autores: se aceptarán escritos que informen de con- superior a las trece hojas din A4 a 30 líne- gresos u otros eventos relacionados con la as, con no más de seis figuras y seis Lewis SE, Moohan JM, Thompson W. Biología de la Reproducción o la actividad tablas. Effects of pentoxifylline on human sperm asociativa de ASEBIR siempre que identi- movility in normospermic individuals using fiquen de manera clara los organizadores En la primera página de todos los traba- computer-assisted analysis. Fertil Steril de los mismos.
    • B O L E T Í N D E I N S C R I P C I Ó N Junio 2006 Vol. 11 • Nº1 51 Boletín de Inscripción DATOS PERSONALES Don/Doña: ................................................................................................................................................................................................................... con Domicilio en C/ .............................................................................................................................................. CP:................................................ Ciudad:.................................................................................. Teléfono: ...........................................Teléfono Móvil: ................................................... E-mail:........................................................................................................................................................................................................................... Formación Básica (Médico, Biólogo, Farmacéutico, etc.):............................................................Grado Académico (Licenciado, Doctor, Especialista en..., etc.) .......................................... CENTRO DE TRABAJO Domicilio profesional C/........................................................................................................................................ CP: ................................................ Centro de Trabajo: ...................................................................................Departamento: ............................................................................................. Ciudad: ............................................................................... Teléfono: ...................................................... Fax: ............................................................ E-mail: .......................................................................................................................................................................................................................... DESEA PERTENECER COMO MIEMBRO NUMERARIO A LA ASOCIACIÓN PARA EL ESTUDIO DE LA BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN, ASEBIR DATOS BANCARIOS BANCO/CAJA ................................................................................................ AGENCIA .............................................................................................. N° CUENTA PROVINCIA ........................................................ Desea recibir la correspondencia en: Dirección Particular Dirección de Trabajo FIRMA FECHA ENVIAR A: Secretaría ASEBIR C/ Fernández Caro, 44. Oficina 2. 28027 MADRID HOJA DE ORDEN DE PAGO BANCARIO (EJEMPLAR PARA EL BANCO) Sr. Director de la Agencia N°: ..................................................................................Banco/caja ................................................................................... C/ .................................................................................................. Provincia ............................................................................................................... RUEGO A USTED SE SIRVA CARGAR EN.................................................................................................................................................. N° CUENTA ............................................................................................................................................................................................... Los recibos que le presente al cobro la ASOCIACIÓN PARA EL ESTUDIO DE LA BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN FIRMA FECHA