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Actualización sobre las variables que hay tras la técnica de injerto de tejido adiposo en cuanto a obtención, viabilidad celular, zonas donantes, etc. Por el Dr Jesus Benito Ruiz, Clinica Tres ...

Actualización sobre las variables que hay tras la técnica de injerto de tejido adiposo en cuanto a obtención, viabilidad celular, zonas donantes, etc. Por el Dr Jesus Benito Ruiz, Clinica Tres Torres, barcelona

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Injertos tejido adiposo   seme2011 Injertos tejido adiposo seme2011 Presentation Transcript

  • DR. JESÚS BENITO RUIZ Injertos de Tejido Adiposo y ASCs En qué punto nos encontramos? Clinica Tres Torres, Barcelona
  • ANTECEDENTES
    • 1987. Bircoll introduce el uso de tejido adiposo como material de aumento para la mama ( Plast. Reconstr.Surg., 1987,79:267-271).
    • Tras aquello se acumulan las malas experiencias y complicaciones por esteatonecrosis.
    • Un panel de expertos de la American Society for Plastic and Reconstructive Surgery emite un comunicado desaconsejando su práctica.
    • En 2007, Coleman, usando la técnica que había descrito, avala su uso y reporta buenos resultados en el aumento de mamas (Plast. Reconstr. Surg., 2007, 119: 775-785) .
    • Khouri ha presentado muy buenos resultados con pre-expansión (BRAVA) e injerto de grasa posterior (Clin. Plast. Surg, 2009, 36: 269-280)
    • Zuk y cols en el 2001 aislan lo que denominaron Processed Lipoaspirate Cells o PLA.
    • Puesto que en la práctica clínica se observan situaciones en la que hay osificación de tejido adiposo, asumieron que las células residentes , preadipocitos unipotenciales no podrían ser las causantes. Asi que investigaron si las PLA podrían ser las células multipotenciales que podrían diferenciarse en lineas celulares mesodérmicas (adipógenas, condrógenas, osteógenas y miógenas)
    • (Zuk PA, Zhu M, Mizuno H et al. Multilineage cells from huma adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Eng., 2001, 7:211-228)
    • el tejido adiposo humano contiene una población de células capaz de proliferar y diferenciarse en múltiples líneas celulares, características de las células troncales o células madre
    • ( Zuk PA, Zhu M, Ashjian P, De Ugarte DA, Huang JI, Mizuno H, Alfonso ZC, Fraser JK, Benhaim P, Hedrick MH (2002) Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol Biol Cell 13:4279–4295)
    • Se caracterizan por potencial de diferenciación y de clonicidad (diferenciación en múltiples líneas de clones de ASC individuales)
    • El conjunto de estas células se conoce como Células regenerativas derivadas del tejido adiposo o fracción vascular estromal, caracterizadas por su capacidad para generar nuevo tejido adiposo y vasos sanguíneos asi como producir factores de crecimiento que ayuden a sobrevivir a los adipocitos y a la formación de la red vascular
    • Rehman J, Traktuev D, Li J, Merfeld-Clauss S, Temm-Grove CJ, Bovenkerk JE, Pell CL, Johnstone BH, Considine RV, March KL (2004) Secretion of angiogenic and antiapoptotic factors by human adipose stromal cells. Circulation 109:1292–1298
    • Se está estudiando el papel de ASC para tratamiento de procesos como reparación de disco interventebral, fracturas, lesiones nerviosas (médula espinal, nervio periférico), Huntington, esclerosis múltiple,incontinencia urinaria,disfunción erectil, reparación hepática, diabetes, colitis, Crohn, isquemia miocárdica y tejidos en general, lesiones por radiodermitis, ulceras, antienvejecimiento, tendones.
    • Hay ensayos clínicos en marcha en reparación osea, enf. De Crohn, incontinencia urinaria y en enfermedad injerto vs huésped (parece que las ASC pueden suprimir aspectos específicos del sistema inmune). También parecen estimular la activación y proliferación de células T durmientes y generan céulas T reguladoras
    • Las células, denominadas Celulas Troncales derivadas del tejido adiposo (Adipose-Derived Stem Cells) son capaces de elaborar factores de crecimiento
    • (Yi, CG et al., VEGF gene therapy fort he survival of transplanted fat tissue in nude mice. J. Plast. Reconstr.Aesth.Surg., 2007, 60:272-278)
    • (Patrick CW et al., Long term implantation of preadypocite-seeded PLGA scaffolds. Tissue Eng., 2002, 109:1292-1298).
    • La hipoxia aumenta la secreción de proteina liganda de factor de crecimiento insulina-like (IGFBP 1 y 2), de factor estimulante de crecimiento de colonias de macrófagos (M-CSF), receptor de M-CSF, de PGFbeta y de factor de crecimiento vascular endotelial
    • (Park BS, Kim Ws, Choi JS et al. Hair growth stimulated by conditioned medium of adipose-derived stem cells is enhanced by hypoxia: evidence of increased growth factor secretion. Biomed Res., 2010, 31(1): 27-34
    • El tejido adiposo también contiene células endoteliales progenitoras que participan en la formación de vasos sanguíneos Miranville A, Heeschen C, Sengenes C, Curat CA, Busse R, Bouloumie A (2004) Improvement of postnatal neovascularization by human adipose tissue-derived stem cells. Circulation 110:349–355
    • Planat-Benard V, et al. Plasticity of human adipose lineage cells toward endothelial cells: physiological en therapeutic perspectives. Circulation 2004, 109: 656-663.
    • 1 gramo de tejido adiposo aspirado tiene 6.9 x 10 5 adipocitos y 2.1 x 10 6 de celulas no-adipocitos.
    • Considerando factores como la distinta concentración en las distintas fases del centrifugado y el tamaño de adipocitos (entre 90 y 100 µ, calculan que hay 1.000.000 de adipocitos en 1 ml.
    • El 37% de las células no adipocitos están en la fracción estromal vascular y que ocupan la parte baja del centrifugado son células madre derivadas del adipocito
    • Suga H, Matsumoto D, Inoue K, Shigeura T, Eto H, Aoi N, Kato H, Abe H, Yoshimura K. Numerical measurement of viable
    • and nonviable adipocytes and other cellular components in aspirated fat tissue. Plast Reconstr Surg. 2008 Jul;122(1):103-14.
    • Se calculan unas 400000
    • células de la fracción estromal por ml
    • y de ellas un 1-5 % son ASCs
    • Se han aislado células tanto en la fraccion de tejido adiposo como en el líquido de la centrifugación.
    • Estas células se caracterizan por tener marcadores CD34 + y CD45 -
    • El marcador tipico de la ASC es CD31 - CD34 + CD45 - CD90 + CD105 - CD146 -
    • CD34 + significa que son progenitores de pericitos
    • En cultivo las ASC expresan CD31 + que es típico de las células endoteliales.
    • En cultivo también expresan CD105 + que es el marcador relacionado con con las células mesenquimales
    • Yoshimura K, Shigeura T, Matsumoto D, Sato T, Takaki Y, Aiba-Kojima E, Sato K, Inoue K, Nagase T, Koshima I, Gonda K. Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates. J Cell Physiol. 2006 Jul;208(1):64-76
    • Esto explica que las ASC son capaces de diferenciarse a células adiposas, condrales, óseas, musculares, neurales, endoteliales y hepáticas (con el estímulo adecuado)
    • En condiciones adipogénicas las células CD105 - exhiben más genes de tejido adiposo, mientras que las CD105 + son más osteogénicas y condrogénicas ( Jiang T, Liu W, Lu X et al. Potent in vitro chondrogenesis of CD105 + enriched huma adipose derived stem cells. Biomaterials, 2010 (Epub)
    • Existen evidencias que hay diferentes subpoblaciones de ASC que expresan diferentes marcadores y con diferente capacidad de diferenciación
  • En qué punto nos encontramos?
    • Los resultados conseguidos con los injertos de tejido adiposo son variables, con diferentes resultados entre las series publicadas. Los trabajos están encaminados en la línea de viabilidad del adipocito y de las ASCs.
    • Una de las principales razones es la falta de homogeneidad en el método utilizado, no sólo a nivel clínico sino también experimental.
    • Hay muchos factores que influyen en la supervivencia de adipocitos y ASCs.
    • ¿CUÁL ES LA MEJOR ZONA DONANTE?
    Obtención
    • Parece ser que las concentraciones de ASC (CD31 - /CD34 + ) son mayores en el tejido adiposo de zona torácica y abdomen bajos)
    • Kishi K, Imanishi N, Ohara H et al. Distribution of adipose-derived stem cells in adipose tissues from human cadavers. J. Plast. Reconstr. Surg., 2010 Oct;63(10):1717-22
    • Padoin AV, Braga-Silva J, Martins P et al. Sources of processed lipoaspirate cells: influence of donor site on cell concentration.
    • Plast Reconstr Surg. 2008 Aug;122(2):614-8.
    • En cambio, para Fraser y cols la mejor zona donante era la zona de la cadera.
    • Fraser JK, Wulur I, Alfonso Z, Zhu M, Wheeler ES. Differences in stem and progenitor cell yield in different subcutaneous adipose tissue depots. Cytotherapy. 2007;9(5):459-67.
    • Para otros autores, no hay diferencia entre zonas donantes.
    • Rohrich RJ, Sorokin ES, Brown SA. In search of improved fat transfer viability: a quantitative analysis of the role of centrifugation and harvest site. Plast Reconstr Surg. 2004 Jan;113(1):391-5; discussion 396-7.
    ¿Cuál es la mejor zona donante?
    • ANESTESIA LOCAL
    Obtención
  • Anestesia local
    • La anestesia local (lidocaína) parece afectar negativamente en el metabolismo de los adipocitos, con una reducción del transporte de la glucosa y de lipolisis (1) y de la viabilidad y diferenciación de los preadipocitos (ASC) (2).
    • 1. Moore JH Jr, Kolaczynski JW, Morales LM, et al. Viability of fat obtained by syringe suction lipectomy: effects of local
    • anesthesia with lidocaine. Aesthetic Plast Surg. 1995 Jul-Aug;19(4):335-9.
    • 2. Keck, Maike; Zeyda, Maximilian; Gollinger, Karina; et al. Local Anesthetics Have a Major Impact on Viability of Preadipocytes and Their Differentiation into Adipocytes Plastic and Reconstructive Surgery. 126(5):1500-1505
    • La articaina/epinefrina y la lidocaina al 2% son especialmente lesivas. El tiempo entre infiltracion y aspiración puede ser relevante en cuanto al contacto más prolongado entre células y anestésico (2)
  • Fig. 1
    • Fig. 1. Viability of preadipocytes after treatment with local anesthetics. Viability was assessed by flow cytometry immediately after treatment with indicated local anesthetics. The diagram shows cell viability in mean ± SEM, with the saline control treatment taken as 100 percent (n = 15). Significant differences from control are indicated by asterisks: *p < 0.05; ***p < 0.001.
    • Local Anesthetics Have a Major Impact on Viability of Preadipocytes and Their Differentiation into Adipocytes
    • Keck, Maike; Zeyda, Maximilian; Gollinger, Karina; Burjak, Sonja; Kamolz, Lars-Peter; Frey, Manfred; Stulnig, Thomas M.
    • Plastic and Reconstructive Surgery. 126(5):1500-1505, November 2010.
    • doi: 10.1097/PRS.0b013e3181ef8beb
    Copyright © 2010 Plastic and Reconstructive Surgery. Published by Lippincott Williams & Wilkins.
  • Fig. 3
    • Fig. 3. Adiponectin expression of preadipocytes after treatment with local anesthetics. After treatment with indicated local anesthetics, preadipocytes were differentiated into adipocytes for 12 days. Adiponectin mRNA expression was assessed by quantitative real-time reverse-transcriptase polymerase chain reaction and normalized to ubiquitin C expression. The diagram shows mean ± SEM of adiponectin expression with the saline control treatment taken as 100 percent (n = 5). Significant differences from control are indicated by asterisks: *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001.
    • Local Anesthetics Have a Major Impact on Viability of Preadipocytes and Their Differentiation into Adipocytes
    • Keck, Maike; Zeyda, Maximilian; Gollinger, Karina; Burjak, Sonja; Kamolz, Lars-Peter; Frey, Manfred; Stulnig, Thomas M.
    • Plastic and Reconstructive Surgery. 126(5):1500-1505, November 2010.
    • doi: 10.1097/PRS.0b013e3181ef8beb
    Copyright © 2010 Plastic and Reconstructive Surgery. Published by Lippincott Williams & Wilkins.
    • DAÑO MECANICO
    Obtención
    • No hay mayor daño celular de adipocitos entre grasa aspirada y la obtenida por escisión. La viabilidad de preadipocitos también se encuentra preservada incluso almacenando la SVF 24h a 4ºC o en cultivo en diferentes dias.
    • Lalikos JF, Li YQ, Roth TP, Doyle JW, Matory WE, Lawrence WT. Biochemical assessment of cellular damage after adipocyte harvest. J Surg Res. 1997 Jun;70(1):95-100.
    • von Heimburg D, Hemmrich K, Haydarlioglu S, Staiger H, Pallua N. Comparison of viable cell yield from excised versus aspirated adipose tissue. Cells Tissues Organs. 2004;178(2):87-92.
    • Park H, Williams R, Goldman N, et al. Comparison of effects of 2 harvesting methods on fat autograft. Laryngoscope. 2008 Aug;118(8):1493-9.
    • Schreml S, babilas P, Fruth S et al. Harvesting human adipose tissue-derived adult stem cells: resection vs liposuction. Cytotherapy 2009, 11(7): 947-957
    • En cambio el grupo de Yoshimura demostró que el número de adipocitos viables y de ASCs era mucho menor en tejido aspirado que en intacto escisional. Este trabajo les sirvió para desarrollar el CAL.
    • Eto H, Suga H, Matsumoto D et al. Characterization of structure and cellular components of aspirated and excised adipose tissue. Plast Reconstr Surg. 2009 Oct;124(4):1087-97.
    • También puede ocurrir que el número de células sea el mismo pero la función de los adipocitos en el tejido aspirados sea menor (medido con actividad de la G3PDH)
    • Pu LL, Cui X, Fink BF, Cibull ML, Gao DThe viability of fatty tissues within adipose aspirates after conventional liposuction: a comprehensive study. Ann Plast Surg. 2005 Mar;54(3):288-92; discussion 292.
    • .
    Daño mecánico
    • ASPIRACION. JERINGAS VS LIPOSUCTOR
    Obtención
  • El vacío
    • No hay datos concluyentes que aseguren que la obtención a jeringa sea mejor que con lipoaspirador.
    • Smith P, Adams WP Jr, Lipschitz AH, et al. Autologous human fat grafting: effect of harvesting and preparation techniques on
    • adipocyte graft survival. Plast Reconstr Surg. 2006 May;117(6):1836-44.
    • Leong DT, Hutmacher DW, Chew FT, Lim TC. Viability and adipogenic potential of human adipose tissue processed cell
    • population obtained from pump-assisted and syringe-assisted liposuction. J Dermatol Sci. 2005 Mar;37(3):169-76.
    • Se recomienda usar lipoaspirador a 0.5 atm
    • La jeringa obtiene una presión de 660 mmHG (0.86 at)
  • El vacío
    • El porcentaje de células de la fracción estromal es mayor cuando se usa aspiración a 350 mmHg que 700 mmHG y superior en ambos casos que jeringa.
    • Mojallal A, A uxenfans C, L equeux C, B raye F, Damour O. Infl uence of negative pressure when harvesting adipose tissue on cell yield of the stromal–vascular fraction. Biomed Mater Eng 2008; 18: 193 – 7 .
    • La obtencion con jeringa de 10 cc y embolo a 2 cc de aspiración da lugar a una presión negativa de 0.37 at. La jeringa de 50 cc llega a una presión de vacío de 0.76 at. En un trabajo experimental Ould-Ali muestra que a menor presión de vacío, mayor supervivencia de tejido adiposo y menos fibrosis.
    • Ould-Ali D. Mechanical factors influencing fat cell transplants quality. IFATS, Dallas 2010.
  • Kahveci R et al., A useful technique to obtain adequate negative pressure for liposuction, J Plast Reconstr Aesthet Surg (2009),
    • CÁNULAS
    Obtención
  • Obtención
    • Coleman ha diseñado una serie de cánulas encaminadas a la obtención atraumática de la grasa y su infiltración segura (reduciendo la posibilidad de inyección intravascular)
    • Erdim y cols muestran que la viabilidad es mayor cuando la obtención se realiza con cánulas grandes (6 mm) sin diferencia en cuanto infiltracion entre 14. 16 y 20g.
    • Erdim M, Tezel E, Numanoglu A, Sav A. The effects of the size of liposuction cannula on adipocyte survival and the optimum temperature for fat graft storage: an experimental study. J Plast Reconstr Aesthet Surg. 2009 Sep;62(9):1210-4.
    • No parece que el tipo de cánula para la obtención sea un problema importante. El diámetro de la cánula puede tener importancia en función de la presión de aspirado.
    • PROCESAMIENTO DE LA GRASA:
    • CENTRIFUGACION VS OTROS
    Procesamiento
  • La centrifugación
    • Estudio de viabilidad de adipocitos y ASC a 400 – 800 – 1200 – 3000 y 4200 g.
    • Injerto en ratones y medida del peso del injerto al mes
    • ( Coleman es a 1286 g)
    • Kurita M, Matsumoto D, Shigeura T, Sato K, Gonda K, Harii K, Yoshimura K. Influences of centrifugation on cells and t
    • tissues in liposuction aspirates: optimized centrifugation for lipotransfer and cell isolation. Plast Reconstr Surg. 2008
    • Mar;121(3):1033-41
  •  
  • Hay cierta reduccion de tejido Adiposo y aumento de fracción oleica al Aumentar la centrifugación pero no es Significativa El número de ASC es consistente hasta 1200g pero luego cae a partir de 4000g La supervivencia de los injertos al mes En ratones es ligeramente superior en Los centrifugados a 3000 g No hay incremento de paso de células rojas Y de ASC al liquido a mayor fuerza de centrifugacion
    • El tejido adiposo nativo es más rico en ASC que el aspirado, pero la centrifugación hace que el tejido se compacte y aumenta de forma relativa la concentración de ASC.
    • Calculan que de 140 ml aspirados, se obtienen 100 ml una vez centrifugados y de éstos se consiguen unos 80 ml de aumento
    • Recomiendan 1200 g (1892 rpm) que viene a ser lo que expuso Coleman (1286 g)
    • g = (1.119 x 10^-5) * rpm^2 * r r es el radio del rotor
    • Ojo que hay que saber el radio del rotor de la centrifuga para poder calcular correctamente las g.
  • Lavado vs centrifugado
    • Estudian la diferencia en número de adipocitos y células no adipocitos
    • El lavado y el centrifugado eliminan la mayor parte de células de serie roja, pero el lavado parece conservar más adipocitos y ASC que el centrifugado.
    • Condé-Green A, Gontijo de Amorim NF, Pitanguy I. Influence of decantation, washing and centrifugation on adipocyte and
    • mesenchymal stem cell content of aspirated adipose tissue: a comparative study. J Plast Reconstr Aesthet Surg. 2009
  •  
  • CD 45+ son celulas rojas, CD 45- son celulas endoteliales (CD 34+), Células mesenquimales (CD 105+) y ASC (CD 31+)
  • Lavado vs centrifugado
    • No hay evidencias suficientes que demuestren que el centrifugado aumenta la supervivencia del injerto, en comparación sedimentación o decantación.
    • Rohrich RJ, Sorokin ES, Brown SA. In search of improved fat transfer viability: a quantitative analysis of the role of centrifugation and harvest site. Plast Reconstr Surg. 2004 Jan;113(1):391-5; discussion 396-7.
    • Rose JG Jr, Lucarelli MJ, Lemke BN, et al. Histologic comparison of autologous fat processing methods. Ophthal Plast Reconstr Surg. 2006 May-Jun;22(3):195-200.
    • A mayor fuerza de centrifugación, peor funcionamiento del adipocito (reducción de transporte de glucosa y reducción de viabilidad.
    • Xie Y, Zheng D, Li Q, Chen Y, Lei H, Pu LL The effect of centrifugation on viability of fat grafts: an evaluation with the
    • Glucose transport test. J Plast Reconstr Aesthet Surg. 2010 Mar;63(3):482-7.
    • Nuevos sistemas de filtrado (Puregraft), más rápidos que centrifugación pueden dan resultados similares.
    • TEMPERATURA
    Procesamiento
    • Estudian la degeneración de la grasa y persistencia de adipocitos y ASC en muestras centrifugadas a 2330g por cinco minutos a 1-2-4-24 horas a temperatura ambiente, 4ºC a 1-2-3 dias y a -80ºC por 1 mes.
    • Estudian el “oil ratio” y la presencia de glicerol-3-fosfato dehidrogenasa (una enzima intracelular) asi como porcentaje de ASCs
    • Matsumoto D, Shigeura T, Sato K, Inoue K, Suga H, Kato H, Aoi N, Murase S, Gonda K, Yoshimura K. Influences of preservation at various temperatures on liposuction aspirates. Plast Reconstr Surg. 2007 Nov;120(6):1510-7
  • 2330 g = 3600 rpm Los adipocitos aguantan bien la Centrifugacion incluso a 4300 g
  •  
  •  
  •  
    • Hasta las 4 horas de preservacion a Temperatura
    • ambiente hay aumento progresivo de oil ratio y
    • GPDH, muy significativa a 24 h
    • Las ASC parecen mantenerse hasta 4 h. Pero a
    • las 24 horas casi han desaparecido. Si se preserva
    • a -4ºC el número de ASC se mantiene 24 h. Pero
    • Luego se reducen.
    • Recomiendan hacer la transferencia en menos de 4 horas
    • Si se ha de enviar tejido adiposo para procesar y obtener ASC puede enfriarse a 4ºC, teniendo 24 horas.
    • Parece ser que se puede alargar la supervivencia de las ASC con la adición de PVP (polivinilpirrolidona) al 10% en medio PBS (1) o DMEM (Dulbecco’s modified Eagle’s medium)(2).
    • 1. (Guha A, Devireddy R. Polyvinylpirrolidone PVP mitigates the damaging effects of intracellular ice formation in adult stem cells. Ann Biomed. Eng., 2010 (Epub))
    • 2. Thirumala S., Gimble JM., Devireddy RV. Cryopreservation of stromal vascular fraction of adipose tissue ina serum-free freezing medium. J. Tissue Eng. Regen. Med., 2009 (Epub)
  • Temperatura
    • En cambio, otros autores comentan que e sposible obtener un número adecuado de ASC y mantener viabilidad aceptable de adipocitos hasta 24 h tras la obtención a temperatura ambiente.
    • Carvalho PP, Yu G, Wu X et al. Processing and passaging of human adipose-derived stromal/stem cells: use of anima free products and extended storage at room temperature. IFATS proceedings, Dallas, 2010
    • CRIOPRESERVACION
    Almacenamiento
  • Criopreservación
    • Cuál es el mejor método para congelar el tejido adiposo y criopreservarlo?
    • ¿Qué temperatura?
    • ¿Cuál es el mejor criopreservante? ¿ A qué concentración?
    • Que viabilidad existe? ¿Hay diferencia en cuanto a la expansión de las ASC?
    • CELL ASSISTED LIPOGRAFTING (CAL)
    Mejora de supervivencia
    • Se ha comparado la celularidad y viabilidad de ASC entre lipoaspirado y tejido adiposo integro (biopsia). Eto y cols concluyen que la composición original del tejido adiposo intacto es de: Adipocitos, 16%; células estromales, 30 %; céulas endoteliales, 15%; otros ( fibroblastos, células musculares lisas, 30 %; y células sanguíneas , 9 %. Los resultados indican un mayor daño tisular y deficiencia de células progenitoras en tejido aspirado.
    ¿Cómo obtener más ASCs?
    • La deficiencia relativa de ASC en lipoaspirado puede deberse a:
      • la mayor parte de ASC esta alrededor del los grandes vasos, que se dejan en la zona donante
      • Algunas ASC pasan a la fracción liquida del lipoaspirado
      • Algunas ASC son dañadas en el proceso de lipoaspiración.
    • Hay que tener en cuenta que estos autores no centrifugan el aspirado. La centrifugación puede aumentar la concentración de células madre y adipocitos viables.
    • Estos hallazgos pueden justificar el enriquecimiento con ASC (Cellution) . Detractores comentan que el SVF sólo tiene un 0,005% de ASC.
    ¿Cómo obtener más ASCs?
  • Eto H, Suga H, Matsumoto D et al. Characterization of structure and cellular components of aspirated and excised adipose tissue. Plast. Reconstr. Sur., 2009, 124(4): 1087-1097 NOTA: 30% rotura de adipocitos con cánula de 2.5 mm a vacio de 500 – 700 mmHg
  • CAL
    • ¿Es necesario enriquecer el tejido que implantamos?
    • ¿ Cómo actúan las ASC in vivo en este tipo de injerto? ¿Función paracrina, formación de vasos, diferenciación en adipocitos, efecto llamada a otros precursores?
    • Hay mayor supervivencia de injerto de TA con ASC?
    • ¿Cual es el porcentaje adecuado de ASC/cc de TA para obtener un mejor resultado?
    • En un trabajo reciente en un modelo de isquemia en ratones, se ha visto que la isquemia produce apoptosis celular en el dia 1 y necrosis en el dia 3 y 7. Luego se produce un aumento de angiogenesis alrededor del dia 7 y alrededor del dia 14 se evidencia nuevos adipocitos. Las células madre no sufren apoptosis y la inmunohistoquimia sugiere que son las responsables de la neoformación vascular y de los nuevos adipocitos. En isquemia severa hay más fibrosis porque hay una mayor produccion de FGF con la hipoxia.
    CAL Adipose Tissue Remodeling under Ischemia: Death of Adipocytes and Activation of Stem/Progenitor Cells Suga, Hirotaka M.D.; Eto, Hitomi M.D.; Aoi, Noriyuki M.D.; Kato, Harunosuke M.D.; Araki, Jun M.D.; Doi, Kentaro M.D.; Higashino, Takuya M.D.; Yoshimura, Kotaro M.D. Plastic & Reconstructive Surgery: December 2010 - Volume 126 - Issue 6 - pp 1911-1923
    • CONTROVERSIAS
    Adipose stem cells
  • Cuestiones por dilucidar
    • Selección de ASC en fresco vs expandidas (autologas o alogénicas) para tratamientos
    • Formas de administración más apropiadas
    • Tumoregenicidad de las ASC
    • Estandarización de procedimientos de obtención del tejido adiposo y de su manejo (liposucción, decantación, centrifugación) y por tanto de ASC
    • Criopreservación
    • CAL: estudios in vivo sobre destino de las células injertadas, papel real de ASC “in vivo”, ratio ASC/volumen de tejido adiposo
    • Algunos trabajos muestran que las ASC incrementan el crecimiento y capacidad de metástasis de lineas celulares de cáncer de mama (1-3), melanoma (4) y osteosarcoma (5).
    • Zimmerlin y cols han demostrado que ASC aumentan el crecimiento de lineas celulares activas de cancer de mama (metastasis) pero no de durmientes (6).
    • 1. Muehlberg FL, Song YH, Krohn A, et al. Tissue-resident stem cells promote breast cancer growth and metastasis. Carcinogenesis. 2009:30(4):589-97
    • 2. Garrido I, Lacroix-Triki M, Dirat B et al. Adipose Tissue Increases dramatically the tumour growth whe co-injected with breast cancer cell lines: a prudence recommendation for autologous fat transfer in breast parenchyma. IFATS, Dallas 2010.
    • 3. Walter M, Liang S, Ghosh S, Hornsby PJ. Li R. Interleukin 6 Secreted from Adipose Stromal Cells Promotes Migration and Invasion of Breast Cancer Cells. Oncogene. 2009 July 30; 28(30): 2745–2755
    • 4. Lucia Kucerova*, Miroslava Matuskova, Kristina Hlubinova, Veronika Altanerova and Cestmir Altaner. Tumor cell behaviour modulation by mesenchymal stromal cells. Molecular Cancer 2010, 9:129-143
    • 5. Perrot P, Rousseau J, Bouffaut AL et al. Safety Concern between Autologous Fat Graft, Mesenchymal Stem Cell and Osteosarcoma Recurrence. PLoS ONE 2010 5(6): e10999
    • 6. Zimmerlin L, Donnenberg AD, Rubin JP, Basse P, Landreneau RJ, Donnenberg VS. Regenerative Therapy and Cancer: In Vitro and In Vivo Studies of the Interaction Between Adipose-Derived Stem Cells and Breast Cancer Cells from Clinical Isolates. Tissue Eng Part A. 2010 Sep 17. [Epub ahead of print]
    ASCS y CANCER
    • En cambio, otros trabajos muestran una actividad inhibidora para el crecimiento de algunos tumores. Parecer ser pues que existe diferente respuesta en función de la linea celular.
    • Khakoo AY, Pati S, Anderson SA, et al. Human mesenchymal stem cells exert potent antitumorigenic effects in a model of Kaposi's sarcoma. J Exp Med 2006, 203:1235-47.
    • Qiao L, Xu Z, Zhao T, Zhao Z, Shi M, Zhao RC, Ye L, Zhang X: Suppression of tumorigenesis by human mesenchymal stem cells in a hepatoma model. Cell Res 2008, 18:500-7.
    • Qiao L, Xu ZL, Zhao TJ, Ye LH, Zhang XD: Dkk-1 secreted by mesenchymal stem cells inhibits growth of breast cancer cells via depression of Wnt signalling. Cancer Lett 2008, 269:67-77.
    • Nakamura K, Ito Y, Kawano Y, et al. Antitumor effect of genetically engineered mesenchymal stem cells in a rat glioma model. Gene Ther 2004, 11:1155-64 .
    ASCS y CANCER
  • ASCS y CANCER
    • Hasta que se tengan más datos no se recomienda el uso de injerto de tejido adiposo o uso de ASC en cirugía conservadora de la mama o defectos postquirúrgicos oncológicos si no se tiene la completa seguridad de que no hay células tumorales.
    • Los datos no son concluyentes y se observan respuestas contradictorias respecto al crecimiento del tumor en presencia de ASCs.
    • Un estudio reciente en ratones ha demostrado que el número de ASC por gramo de tejido adiposo disminuye con la edad, pero no su capacidad de diferenciación y multipotencialidad.
    • (Yamada T., Akamatsu H, Hasegawa S et al. Age-related changes of p75 neurotrophin receptor-positive adipose derived stem cells. Dermatol. Sci., 2010. (Epub)
    • Parece ser que el porcentaje adipocito/celulas estromales permanece constante independientemente del IMC y de la edad, aunque el número d células es mayor en obesos. La capacidad de diferenciación de las ASC parece disminuir al aumentar el IMC.
    • van Harmelen V, Skurk T, Röhrig K,et al. Effect of BMI and age on adipose tissue cellularity and differentiation capacity in women. Int J Obes Relat Metab Disord. 2003 Aug;27(8):889-95.
    ASCs /edad/IMC
  • ASCs y antiaging
    • Las ASC tienen varios aceleran la reparación de las heridas, ya que activan los fibroblastos, incitan su proliferación mediante su actividad paracrina y liberación de diversos factores como basic fibroblast growth factor (bFGF), keratinocyte growth factor (KGF), TGF-1, HGF y VEGF. Promueven también la producción de colágeno tipo I y la migración de fibroblastos. En animale s aceleran la cicatrización.
    • La hipoxia incrementa estos fenómenos
    • Kim WS, Park BS, Sung JH, Yang JM, Park SB, Kwak SJ, Park JS (2007) Wound healing eVect of adipose-derived stem cells: a critical role of secretory factors on human dermal Wbroblasts. J Dermatol Sci 48:15–24
    • ASCs podrían tener un efecto antioxidante, reductor de arrugas cutáneas y blanqueador.
    • Algunos estudios en animales han mostrado una reducción de arrugas creadas con radiación UVB
    • Park BS, Jang KA, Sung JH, Park JS, Kwon YH, Kim KJ, Kim WS (2008) Adipose-derived stem cells and their secretory factors as a promising therapy for skin aging. Dermatol Surg 34:1323–1326.
    • El problema actualmente es cómo obtener y utilizar las ASCs y medio adecuado para llevarlo a cabo. Se están investigando diversos biomateriales que sirvan como andamio y vehiculo de las ASCs en regeneración tisular
    ASCs y antiaging
  • 2011
    • 3er Congreso de la Sociedad
    • Española de aplicaciones
    • terapéuticas del Trasplante
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    • Barcelona
    • 25-26 Noviembre 2011
    • www.setgra.org
    • [email_address]
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